怀地黄3-酮酯酰CoA-硫解酶基因的克隆、序列特征和时空表达分析

目的 对怀地黄3-酮酯酰CoA-硫解酶(Rehmannia glutinosaf hueichingensis 3-ketoacyl CoA-thiolase,RghKAT)cDNA 全长基因进行克隆及分析,为怀地黄分子育种提供候选基因和理论依据.方法 根据其他植物ARGOS基因序列的保守结构域设计简并引物,采用RT-PCR和RACE技术,获得RghKAT cDNA全长序列;通过生物信息学技术对其核苷酸序列和氨基酸序列进行比对:利用实时荧光定量PCR技术检测了其在2个时期、10个组织的表达.结果 RghK AT基因全长1 713 bp,包含了1 395 bp的开放阅读框(ORF),编码464个氨基酸:同源比对和系统进化分析表明,RghKAT的核苷酸序列与葡萄、番茄、毛果杨、拟南芥和小麦的KAT核苷酸序列同源性分别达84％、82％、82％、79％、73％; RghKAT编码的氨基酸序列与矮牵牛、葡萄、黄瓜、拟南芥和小麦的KAT氨基酸同源性分别为88％、88％、86％、87％、78％:各物种KAT酶进化树符合物种进化规律;理化性质表明该蛋白为略成碱性的稳定蛋白质,蛋白质二级结构主要由α-螺旋、不规则卷曲、β-折叠和β-转角构成;在N端存在一个由70个氨基酸残基组成的信号肽;RghKAT蛋白三维结构具有硫解酶典型的特征序列;表达谱分析表明,RghKAT mRNA在各时期、各组织中均有表达,盛花期花瓣中表达最强,而在幼苗期叶中表达量最低.结论 成功克隆了RghKAT cDNA 全长序列,具有KAT基因的结构特性及其产物硫解酶典型的特征序列,其在盛花期花瓣中表达量最高.     

基于传统性效及现代研究的姜黄质量标志物分析

姜黄为我国传统中药,味辛、苦,性温,具有破血行气、通经止痛之功效,其用药历史悠久,最早收载于《新修本草》。对姜黄化学成分及主要药理活性进行总结,并基于传统性效及现代研究两方面对姜黄质量标志物进行预测分析。建议对姜黄的芳姜黄酮、α-姜黄酮、β-姜黄酮、姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素及黄酮类等成分进行定性、定量分析,进一步开展其所含的萜类和甾醇类等成分化学物质组的深入研究,为明确姜黄的质量标志物和姜黄质量评价研究提供科学依据。     

秦岭岩白菜的化学成分(Ⅰ)

目的:研究秦岭岩白菜Bergenia scopulosa的化学成分.方法:采用大孔吸附树脂柱色谱、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和重结晶等手段进行分离纯化,根据理化性质和光谱数据鉴定化合物结构.结果:从秦岭岩白菜甲醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(1)、胡萝卜苷(2)、(+)-儿茶素(3)、没食子酸(4)、熊果苷(5)、岩白菜素(6)、4-O-没食子酰岩白菜素(7)、11-O-没食子酰岩白菜素(8)、邻苯二酚(9)、丁香酸(10)、槲皮素(11)和芦丁(12).结论:化合物8～12为首次从该植物中分离得到.     

异型南五味子根茎中倍半萜类化学成分及其细胞毒活性

目的:对异型南五味子根茎中的倍半萜类化合物进行分离、结构鉴定和细胞毒活性研究。方法:将药材异型南五味子根茎阴干,粉碎成粗粉,用95%乙醇提取3次,每次1 h。减压回收提取液至无醇味后,将提取液用水分散,过聚酰胺柱色谱,依次用不同体积分数乙醇洗脱,得到水洗脱物,30%乙醇洗脱物,60%乙醇洗脱物和95%乙醇洗脱物。30%乙醇洗脱部位过小孔树脂柱色谱(MIC),不同体积分数乙醇洗脱MCI树脂,得到水洗脱物,30%乙醇洗脱物,50%乙醇洗脱物和95%乙醇洗脱物,50%乙醇洗脱物为富集得到的总倍半萜部位。以甲醇-水为流动相,用中压制备液相色谱对总倍半萜类部位进行分离,用TLC和HPLC对得到的组分进行合并。对于含有倍半萜的组分用高效液相色谱进行分离,分离得到单体化合物。得到的单体化合物用ESI-MS和NMR谱学技术进行结构确定。结果:从异型南五味子根茎中获得8个倍半萜类化合物,结构分别鉴定为1α-hydroxy-9-deoxycacalol(1),balsamiferine B(2),balsamiferine D(3),chaetopenoid A(4),chaetopenoid B(5),asterothamnone A(6),asterothamnone B(7),and 10-dehydroxy-melleoliede B(8)。体外抗肿瘤活性筛选表明,化合物2,6,7对人肝癌细胞(SMMC7721)具有抑制活性,半数抑制浓度分别为10.6,9.5和15.5μmol·L~(-1)。结论:倍半萜化合物1~8为从南五味子属植物中首次获得。     

基于UPLC-Q/TOF-MS的丹参-川芎对局灶性脑缺血大鼠保护作用的脂质组学研究

目的研究丹参-川芎水煎液冻干物对局灶性脑缺血模型大鼠脂质代谢异常的调节作用。方法采用线栓法复制大鼠局灶性脑缺血模型,将SD大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组及丹参-川芎干预组。末次给药后采集血浆,采用超高效液相色谱四级杆飞行时间质谱联用仪(UPLC-Q/TOF-MS)进行血浆脂质组学研究,采用正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)处理脂质组学数据,考察丹参-川芎干预前后脂质代谢物组变化。结果成功复制了大鼠局灶性脑缺血模型,丹参-川芎水煎液冻干物对局灶性脑缺血大鼠异常脂质代谢表现出明显的改善作用,大鼠脑缺血损伤血浆脂质标志物为PS(21:0/0:0)、PG(12:0/17:0)、C16 sphinganine,phytosphingosine、PE [18:1(9Z)/0:0]、PC(16:1/2:0)、PC(0:0/18:0)、PC(16:1/0:0)、PC(16:0/0:0)、PC(18:2/0:0)、PC(18:1/0:0)、PC(18:0/0:0)、PC(20:5/0:0)。结论丹参川芎水煎液冻干物具有脑缺血损伤保护作用,其机制可能与其对脂质,尤其是磷脂酰胆碱(PC)的调节有关。     

慢性心力衰竭中医证型与B型钠尿肽关系对照研究

[目的]分析慢性心力衰竭(CHF)患者不同中医证型与BNP水平的相关性,探讨BNP作为CHF中医辨证分型客观指标的可行性。[方法]选取本院诊断为慢性心力衰竭的患者117例作为研究对象,进行中医辨证分型,另外选取健康体检者23例作为对照组,所有患者抽取血液采用免疫荧光法测定BNP,并同时进行心脏彩超检查测定LVEF,结果进行统计学分析。[结果]CHF病人BNP水平明显高于对照组,BNP的水平随心力衰竭加重而上升,与NYHA心功能分级呈正相关(r=0.813,P<0.001)。CHF病人LVEF明显低于对照组,LVEF随心力衰竭加重而降低,与NYHA心功能分级呈负相关(r=-0.627,P<0.001)。BNP水平与中医证型间存在正相关性(r=0.773,P<0.001),BNP水平按心肺气虚、心气阴虚兼血瘀→气虚血瘀→心脾阳虚兼血瘀水停→心脾肾阳虚水泛兼血瘀逐级递增。LVEF与中医证型间存在负相关性(r=-0.679,P<0.001),LVEF按照心肺气虚→心气阴虚兼血瘀→气虚血瘀、心脾阳虚兼血瘀水停→心脾肾阳虚水泛兼血瘀逐级递减。[结论]慢性心力衰竭中医证型与BNP具有相关性,BNP可作为CHF中医辨证分型的一个客观化指标。     

冠心康胶囊对实验性急性心肌缺血大鼠心电标测与血液流变学的影响

目的:观察中药复方制剂冠心康胶囊抗大鼠急性心肌缺血的药理效应及探讨对血瘀模型大鼠的血液流变学的影响。方法:运用盐酸异丙肾上腺素(ISO)造大鼠急性心肌缺血模型,运用皮下注射大剂量肾上腺素加冰水冷浴造大鼠瘀血模型,观察冠心康胶囊对大鼠急性心肌缺血模型心电标测和瘀血模型血液流变学等指标的影响。结果:大、中、小剂量的冠心康胶囊组大鼠心电图S-T段移位明显低于模型组(P<0.05或P<0.01),血液流变学指标中全血黏度比(mPa.s)、红细胞压积、血沉、红细胞聚集指数、血浆黏度比(mPa.s)与模型组比有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:冠心康胶囊可降低血液黏度,改善冠脉循环,有效抗大鼠急性心肌缺血。     

TRPV1离子通道与中药辛味药性的关系研究

中药五味理论及味效发生机制一直是中药药性研究领域的重点和难点。该文利用基于药效团的虚拟筛选技术,通过研究中药成分对TRPV1离子通道的调节作用探讨TRPV1与中药辛味药性之间的关系。结果发现TRPV1激动剂药效团模型与中药化学成分之间的匹配关系揭示了辛味中药的药效成分。因此,提出TRPV1离子通道是辛味药性发挥药效的潜在靶点之一。中药辛味药性是由其化学成分决定的,且在不同层次上符合继承性和加和性等特点。     

正交实验法优选骨碎补提取工艺的研究

目的：研究骨碎补的提取工艺。方法：以骨碎补总黄酮及柚皮苷含量为指标，采用正交实验法进行优选，并用紫外分光光度法测定总黄酮的含量．HPLC法测定柚皮苷含量。结果：提取次数是骨碎补有效成分提取的关键因素，其次是溶媒用量．乙醇浓度和提取时间为最次要因素。结论：最佳提取工艺为骨碎补用10倍量60％乙醇回流提取3次．1h/次。     

微创穴位埋线对慢性阻塞性肺疾病稳定期患者临床疗效、外周血NF-κB活性和TNF-α、IL-8水平的影响

目的:观察微创穴位埋线治疗慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)稳定期患者的临床疗效、外周血NF-κB活性和TNF-α、IL-8水平的影响。方法:选取2014年2月—2014年12月在上海中医药大学附属岳阳中西医结合医院呼吸科门诊就诊的慢阻肺稳定期患者60例,随机分为埋线组和对照组,每组30例。对照组给予西医常规治疗,埋线组在对照组治疗的基础上加用微创穴位埋线治疗。观察两组患者临床疗效、外周血NF-κB活性和TNF-α、IL-8水平。结果:埋线组有效率为86.67%,对照组有效率为76.67%,两组比较无统计学意义(P0.05);埋线组治疗后CAT评分、m MRC评分优于对照组,差异有统计学意义(P0.05);埋线组治疗后外周血NF-κB活性较对照组显著下降,差异有显著统计学意义(P0.01);两组治疗前后TNF-α和IL-8水平比较,无统计学意义(P0.05)。结论:微创穴位埋线联合常规西医治疗对慢阻肺稳定期患者外周血中NF-κB的活性具有明显抑制作用。