急性脑膜炎/脑炎综合征哨点监测病例的流行特征及其临床诊断分析

目的分析急性脑膜炎/脑炎综合征（AMES）病例的流行特征和临床诊断分类。方法在济南市选取省、市、县级各2所医院作为哨点医院,对2008-2009年报告的AMES病例进行个案调查并收集临床诊断等资料。结果 2008-2009年共报告AMES病例699例,其中2008年369例,2009年330例;2年报告的AMES病例均在7-9月呈现高峰,济南市籍与非济南市籍病例数基本持平,男女性别比为1.75∶1,10岁以下儿童占70%以上（发病年龄中位数为7岁）,且以学生、散居儿童、托幼儿童为主。AMES病例的入院诊断中,属于病毒性感染者为574例,占82.12%,细菌感染者为73例,占10.44%。结论 AMES是临床常见且具有流行特征的综合征,目前入院诊断以病毒性感染为主。今后应加强AMES病例的监测和防控工作。     

无菌性脑膜炎暴发中柯萨奇B3病毒的基因特征分析

目的 明确2008年山东省临沂市郯城县无菌性脑膜炎暴发的病原,对分离到的柯萨奇B3病毒的基因特征、遗传变异规律及进化来源进行分析.方法 采集暴发病例的粪便、脑脊液标本,应用RD、Hep-2细胞进行病毒分离;阳性分离物分别采用中和试验、逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和核苷酸序列测定方法进行定型,最后与GenBank中检索到的其他CVB3毒株进行同源性分析,并构建VP1完整编码区亲缘进化树研究其遗传进化规律.结果 共采集22份粪便和120份脑脊液标本,分离到病毒35株,经鉴定34株为CVB3,1株为ECH030.34株CVB3分离株VP1区部分序列(381 bp)核苷酸同源性为90.5%～100%,氨基酸同源性为98.4%～100%;与Nancy原型株的核苷酸同源性为79.5%～81.6%,氨基酸同源性为98.4%～99.2%.012/2008TC/SD/CHN和177/2008TC/SD/CHN与安徽2008年分离的Fuyang19株同源性最高,核苷酸同源性分别为98.2%和91.0%,氨基酸同源性分别为99.2%和98.9%;进化树分析显示,中国大陆分离株独处一支,且呈单源性发生关系.结论 此次脑膜炎暴发的病原是CVB3.它与其他的中国分离株同源性高,与国外分离到的CVB3具有不同的基因特征.     

基于下一代测序的污水中人星状病毒分子流行病学研究

目的 了解生活污水中人星状病毒（HAstV）的型别分布及遗传多样性。方法 2018年1月—2019年6月在山东省济宁市按季度采集6份生活污水样本，通过阴离子膜吸附洗脱法进行浓缩后，提取核酸，进行ORF2完整编码区的RT-PCR扩增及扩增产物下一代测序，对产生的干净数据使用CLC Genomics Workbench 12.0软件de novo组装后，进行基因定型、同源性比较和系统发生学分析。结果 检测地区生活污水中HAstV的检出率为100%，共获得HAstV序列43条，分属9种基因型，分别为HAstV-1、HAstV-2、HAstV-3、HAstV-4、HAstV-5等经典型和MLB1、VA1、VA2、VA3等新型HAstV，其中HAstV-5(47.53%)占比最高；基于ORF2完整编码区的系统发生学显示山东株与国内外其他参考株在一些分支上聚集在一起，表明不同型别在世界不同地区的传播。结论 本研究证实了基于NGS的环境监测有助于提高对HAstV遗传多样性的认识。     

手足口病患儿柯萨奇病毒A10型山东地方株VP1区基因特征分析

目的 了解手足口病(HFMD)患儿标本中分离到的柯萨奇病毒A10型(Coxsackie virus A10,CVA10)山东地方株VP1区基因特征.方法 采集2008年至2009年部分HFMD病例临床标本,细胞培养方法分离病毒,提取病毒核酸,RT-PCR扩增病毒VP1区序列,生物信息学方法鉴定其基因型别.选择代表性CVA10毒株,与GenBank中检索到的其他CVA10毒株进行核苷酸和氨基酸同源性分析,并以VP1部分序列构建亲缘进化树.结果 从山东省HFMD患儿的760份临床标本中分离出330株病毒,其中有17株分子定型鉴定为CVA10.CVA10山东地方株彼此间核苷酸和氨基酸的同源性分别在82.3%～100.0%和94.2%～100.0%,与CVA10原型株(Kowalik株)核苷酸和氨基酸的同源性为75.6%～76.8%和90.2%～93.2%.亲缘进化树显示,CVA10山东地方株分别属于两个不同的基因亚型.结论 CVA10也是引起HFMD的病原体之一,山东省存在CVA10两种基因亚型的共循环.     

风疹病毒JR23株糖蛋白E1在毕赤酵母表达系统中的表达和抗原性分析

目的在毕赤酵母表达系统中表达风疹病毒(rubella virus，RV)JR23株包膜糖蛋白E1，为研究E1蛋白的结构功能、开发基因工程疫苗和重组蛋白诊断试剂盒奠定基础。方法E1基因的表达质粒pGAPZαa-E1经AVRⅡ线性化后用LiCl法转化酵母菌，在YPD(含100μg／ml Zeocin^TM)平板上两次筛选，挑出单菌落，于液体YPD中培养，并在不同时间收集培养物，用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果SDS-PAGE显示E1重组蛋白在毕赤酵母中高效稳定表达，在48h时表达量达到最高，之后趋于稳定，上清和细胞中均有蛋白表达。Western blot结果表明，上清中的E1重组蛋白能够分别与抗RV的阳性血清和单克隆抗体反应，而细胞中的E1重组蛋白只能与抗RV的阳性血清反应，不能与单克隆抗体反应。这说明所表达的蛋白一部分在信号肽的引导下分泌出胞，并经过折叠形成了正确的构像，能够与单克隆抗体结合；而另一部分由于蛋白本身的跨膜区连在了细胞膜上没有分泌出去，没有形成能够被单抗识别的构像，不能与单抗结合。结论E1包膜糖蛋白在酵母菌中成功表达，且免疫反应性良好。     

2015-2021年山东省菏泽市水痘流行病学特征分析

目的 分析2015-2021年山东省菏泽市水痘流行病学特征,为水痘的预防控制提供科学数据。方法 通过中国疾病预防控制信息系统收集2015-2021年山东省菏泽市水痘发病情况,分析其时间、地区、人群分布特征。结果 2015-2021年山东省菏泽市共报告水痘发病7 264例,各年度发病率分别为9.29/10万、9.95/10万、11.36/10万、16.46/10万、19.79/10万、9.31/10万、7.17/10万,年均报告发病率为11.93/10万。除2018年和2019年以外,各年度的发病高峰均出现在4-7月和10月-次年1月。发病数较多的人群依次为学生3 063例(42.17%)、散居儿童1 873例(25.78%)、幼托儿童1 124例(15.47%)。发病数较多的年龄依次为5～9岁2 596例(35.74%)、0～4岁1 804例(24.83%)、10～14岁1 135例(15.63%)。结论 2015-2019年山东省菏泽市水痘报告发病率呈逐年上升趋势,2020-2021年发病率有所下降,儿童为发病高危人群。     

汉坦病毒GM04-38株N-联糖基化位点在细胞融合中作用的初步确定

段外,各突变体均表达出G1、G2片段.IFA显示天冬酰胺突变前后各位点均显示荧光信号,呈核周分布.突变后134位点与928位点的突变体融合现象消失,其余各位点突变后融合现象仍然存在.结论 G1上的134位点可能与蛋白正确折叠有密切关系,134位点突变极可能导致蛋白的错误折叠,进而无法转运出内质网.G2上的928位点对细胞融合有重要作用,提示汉坦病毒融合肽很有可能位于G2上.     

山东省2020—2021年蚊虫中乙型脑炎病毒感染率及系统进化分析

目的 了解山东省蚊虫中流行性乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）的感染情况、基因型及遗传变异特征,为流行性乙型脑炎的防控提供科学依据。方法 分别于2020年8月和2021年8月在山东省济宁市微山县、临沂市莒南县、东营市垦利区采用紫外诱蚊灯和电动吸蚊器采集蚊虫标本。对蚊虫标本进行研磨,使用实时荧光定量PCR方法检测蚊虫标本中的JEV,采用最大似然法对蚊虫中JEV感染率及其95%可信区间进行估算。将JEV阳性标本进行E基因和PrM基因的RT-PCR扩增及测序,并使用Bioedit 7.0和Mega 11等软件进行序列分析。结果 2年2次共采集蚊虫6种737批37 455只,其中三带喙库蚊为优势蚊种31 452只（83.97%）,其次为骚扰阿蚊2 508只（6.70%）、中华按蚊2 468只（6.59%）、淡色库蚊970只（2.59%）、伊蚊40只（0.11%）和二帯喙库蚊17只（0.04%）。将所有蚊虫分为737批进行检测,其中53批JEV核酸阳性,2020年和2021年山东省监测点蚊虫JEV总体感染率分别为0.19%(0.13%,0.26%)和...