| 风疹病毒JR23株糖蛋白E1在毕赤酵母表达系统中的表达和抗原性分析 |
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| 引用本文： | 温红玲,王志玉,宋艳艳,任桂杰,陶泽新,宋绍霞,王桂亭,许洪芝. 风疹病毒JR23株糖蛋白E1在毕赤酵母表达系统中的表达和抗原性分析[J]. 中华微生物学和免疫学杂志, 2005, 25(3): 190-193 |
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| 作者姓名： | 温红玲 王志玉 宋艳艳 任桂杰 陶泽新 宋绍霞 王桂亭 许洪芝 |
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| 作者单位： | 50012,济南,山东大学公共卫生学院病毒学研究室 |
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| 基金项目： | 教育部博士点基金 ( 2 0 0 30 4 2 2 0 1 8)，山东省科技厅重点发展规划项目 ( 2 0 0 1BB1CAA7) |
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| 摘 要： | 目的在毕赤酵母表达系统中表达风疹病毒(rubella virus，RV)JR23株包膜糖蛋白E1，为研究E1蛋白的结构功能、开发基因工程疫苗和重组蛋白诊断试剂盒奠定基础。方法E1基因的表达质粒pGAPZαa-E1经AVRⅡ线性化后用LiCl法转化酵母菌，在YPD(含100μg／ml Zeocin^TM)平板上两次筛选，挑出单菌落，于液体YPD中培养，并在不同时间收集培养物，用SDS-PAGE和Western blot进行分析。结果SDS-PAGE显示E1重组蛋白在毕赤酵母中高效稳定表达，在48h时表达量达到最高，之后趋于稳定，上清和细胞中均有蛋白表达。Western blot结果表明，上清中的E1重组蛋白能够分别与抗RV的阳性血清和单克隆抗体反应，而细胞中的E1重组蛋白只能与抗RV的阳性血清反应，不能与单克隆抗体反应。这说明所表达的蛋白一部分在信号肽的引导下分泌出胞，并经过折叠形成了正确的构像，能够与单克隆抗体结合；而另一部分由于蛋白本身的跨膜区连在了细胞膜上没有分泌出去，没有形成能够被单抗识别的构像，不能与单抗结合。结论E1包膜糖蛋白在酵母菌中成功表达，且免疫反应性良好。
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| 关 键 词： | 毕赤酵母表达系统 JR23株 风疹病毒 抗原性分析 SDS-PAGE Western 包膜糖蛋白E1 E1包膜糖蛋白 重组蛋白 基因工程疫苗 blot 抗体反应 诊断试剂盒 单克隆抗体 免疫反应性 结构功能 E1蛋白 LiCl 表达质粒 E1基因 不同时间 |
| 修稿时间： | 2004-06-10 |
Expression and antigenicity of rubella virus JR23 strain glycoprotein E1 in yeast |
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| WEN Hong-ling,WANG Zhi-yu,SONG Yan-yan,REN Gui-jie,TAO Ze-xin,SONG Shao-xia,WANG Gui-ting,Xu Hong-zhi. Expression and antigenicity of rubella virus JR23 strain glycoprotein E1 in yeast[J]. Chinese Journal of Microbiology and Immunology, 2005, 25(3): 190-193 |
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| Authors: | WEN Hong-ling WANG Zhi-yu SONG Yan-yan REN Gui-jie TAO Ze-xin SONG Shao-xia WANG Gui-ting Xu Hong-zhi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Rubella virus Glycoproteins Pichia pastoris Protein expression |
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