凝血因子V基因突变(1691G/A)与脑血栓、深静脉血栓相关性的研究

本文采用ＰＣＲ扩增、限制笥酶切及电泳分型等方法,检测了凝血因子Ｖ１６９１（Ｇ→Ａ）突变在中国汉族人群体中的分布特点,并探讨了该突变同脑血栓、深静脉血栓等血栓性疾病的风险相关性。结论如下：１．中国汉族人群中约有１．９６％携带突变基因１６９１Ａ,墨西哥人中有１．８８％,美国白人中为１．８９％,美国黑人中为０％,资料表明瑞典人群中约为７％,此结果提示该基因频率随种族、地区的不同而存在着差异。２．深静脉血栓患者的ＦａｃｔｏｒＶ１６９１Ａ基因频率为０．０７６１与正常对照组（０．００９８）比较,统计结果ＲＲ＝８．９７９８（ｕ＝２．６６４８〉２．５８,Ｐ〈０．０１）两者差异显著,此结果表明该突变是静脉血栓的主要的风险因子。３．脑血栓患者的ＦａｃｔｏｒＶ１６９１Ａ基因频率为０．００６７５,与正常对照组（０．００９８）比较,统计     

凝血因子V基因多态性与静脉血栓形成

静脉血栓形成(venous thrombosis，VT)在发达国家年发病率1‰。且随年龄增长呈递增现象，儿童的发病率1／10万，老年人接近1％”。。VT多发生在下肢深静脉，与其相关的主要并发症是血栓后遗综合征及致死性的肺动脉栓塞，发生率分别是20％”。及1‰～‰。我国尚缺乏大规模血栓流行病学的调查资料。从近些年我科收治的病人来看，VT     

新疆蒙古族健康人群中FV Leiden突变的研究

目的探讨新疆蒙古族健康人群中FV Leiden（凝血因子V）突变的发生率。方法应用PCR-限制性片段长度多态性技术（PCR—restriction fragment length polymorphism,PCR—RFLP）对新疆地区132例健康个体（其中50例蒙古族和82例汉族）进行FV Leiden基因突变研究分析。结果新疆蒙古族和汉族健康个体均未检出FV Leiden基因突变类型包括纯合子和杂合子。结论新疆地区蒙古族人群和汉族健康人群均未见到FV Leiden基因突变,提示FV Leiden突变可能不是新疆地区蒙古族和汉族健康人群以及冠心病人群血栓形成的主要危险因素。     

凝血因子V基因Leiden突变检测方法在新疆汉族健康人群中应用

目的建立FV Leiden突变的检测方法,研究分析新疆汉族健康人群中FV Leiden突变的发生率。方法应用聚合酶链反应(PCR)—限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP),对新疆地区82例健康个体进行FV Leiden基因突变研究分析。结果新疆汉族健康个体均未检出FV Leiden基因突变类型包括纯合子和杂合子。结论 FV Leiden突变可能不是新疆地区汉族健康人群静脉血栓(VT)发病的主要危险因素。     

凝血因子Ⅸ基因新发错义突变致乙型血友病一例家系分析

目的:分析一例乙型血友病(HemophiliaB,HB)家系的遗传学病因。方法:采用凝固法检测先证者及其家系成员凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT),免疫比浊法检测D-二聚体浓度;采用血液分析仪检测血红蛋白(Hb)含量,发色底物法检测凝血因子Ⅸ(F9)活性,采用PCR-Sanger测序法分析HB的关键致病基因F9基因序列并进行突变分析。结果:先证者Hb含量降低,凝血功能示APTT延长,D-二聚体增高,F9活性明显下降;先证者母亲及女儿APTT及F9活性分别有不同程度的延长和降低,其父亲、妹妹和哥哥的APTT及F9活性正常。测序结果显示该家系先证者携带F9基因半合子错义突变c.289TG(p.Cys97Gly),为首次发现的变异位点,先证者母亲及女儿各携带杂合突变。结论:F9基因第4外显子c.289TG(p.Cys97Gly)半合子变异可能为HB致病性变异。     

乏凝血因子V血浆的制备及在病毒性肝炎患者中检测的临床意义

目的 :探讨乏凝血因子V血浆制备方法及凝血因子V活性 (FV C)测定病毒性肝炎患者中的临床意义。方法 :采用温育法制备乏因子V基质血浆并应用于临床检测。病毒性肝炎住院病人 175例 ,分急性肝炎、慢性轻度肝炎、慢性中 /重度肝炎、肝硬化和重症肝炎五个组 ,检测血浆中FV C ,并与 36例正常对照组测定结果相比较。结果 :自制乏因子V基质血浆检测结果 :与正常对照组比较 ,除急性肝炎外 ,慢性轻度肝炎轻度异常 (P <0 0 5 ) ,慢性中 /重度肝炎、重症肝炎和肝硬化患者血浆中FV C则明显下降 (P <0 0 0 1) ,差异均有显著意义。结论 :自制乏因子V血浆 ,简单易行 ,结果满意。FV C的下降与病情严重程度相关 ,该测定对于判断重症肝炎病情和观察其预后有重要的临床价值。     

凝血酶原基因G20210A和凝血因子V Leiden突变与冠心病的相关性探讨

目的：探讨凝血酶原基因G20210A和凝血因子VG1691A(Leiden)突变在中国汉族人群中的发生率及与冠心病的关系。方法：用聚合酶链反应和限制性内切酶片段长度多态性技术，对234例冠心病患者和210名正常人的凝血酶原基因G20210A和凝血因子V Leiden突变进行分析。结果：找到了一例正常人的凝血酶原基因G20210A变异，突变率为0．2％。冠心病和正常人中均未发现凝血因子V Leiden突变。结论：汉族人群中存在凝血酶原基因G20210A突变，但凝血酶原基因G20210A和凝血因子V Leiden变异在我国的发生率较低，不足以作为冠心病的遗传性危险因素。     

凝血因子Ⅷ基因及其基因突变的研究

本文拟对甲型血友病FⅧ基因及其蛋白质结构和功能,FⅦ基因突变类型作一综述.     

凝血因子V基因Leiden突变与严重先兆子痫的关系研究

为探讨凝血因子Ｖ基因Ｌｅｉｄｅｎ突变与孕妇严重先兆子痫的关系。方法：采用聚合酶链反应和限制性片段长度多态分析对３５例严重先兆子痫孕妇及９０例正常对照组孕妇进行等位基因检测。结果：３５例严重先兆子痫患者中有３人,为Ｌｅｉｄｅｎ突变杂合子（８．６％）,而正常对照组中的９０人中只有１人为Ｌｅｉｄｅｎ突变杂合子（１．１％）,二组间差异显著,ｘ２＝４．８９,Ｐ＜０．０５。结论：因子Ｖ基因Ｌｅｉｄｅｎ突变携带者患严重先兆子痫的风险高于正常组。     

家族性糖尿病人群中线粒体基因点突变的分析研究

目的 研究线粒体基因11个已知突变或变异在中国家族性糖尿病人群中的确切发生率及其与糖尿病的相关性.方法 应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态结合直接测序方法 对随机抽取的无亲缘关系的770个糖尿病家系的先证者及309名非糖尿病对照者进行线粒体基因tRNALeu(3243,3256),tRNASer(12258),tRNAGlu(14709),tRNALys(8296,8344.8363),NDI(3316,3394,3426),ND4(12026)区11个已知位点突变或变异的筛查.结果 糖尿病先证者组中发现13例tRNALeu3243 A→G突变(1.69%),9例tRNAGlu14709 T→C变异(1.17%),17例ND1 3316 G→A变异(2.21%),18例ND13394 T→C变异(2.34%),28例ND412026 A→G变异(3.63%);在正常对照组中发现5例14709 T→C变异(1.62%),5例3316 G→A变异(1.62%)和6例3394 T→C变异(1.94%),9例12026 A→G变异(2.91%),未见到3243 A→G突变携带者.在两组中均未见到tRNALeu3256C→T,tRNALys 8296A→G,tRNALys8344A→G,tRNALys 8363G→A,tRNASer 12258C→A和ND1 3426 A→G突变.分别比较14709,3316,3394,12026位点变异在糖尿病先证者组和对照组的发生率以及临床资料,差异无统计学意义.在糖尿病先证者组中尚见到同时伴有两个位点改变的情况,其中3243 A→G突变和3394 T→C变异者2例,3243 A→G突变和12026 A→G变异2例.结论 线粒体基因tRNALeu(UUR) 3243 A→G突变是中国人线粒体糖尿病的主要致病基因,14709,3316,3394,12026位点变异可能是中国人线粒体基因多态,中国人群中未见到tRNALeu 3256C→T,tRNALys 8296A→G,tRNALys 8344A→G,tRNALys 8363G→A,tRNASer 12258C→A和ND1 3426 A→G突变,它们可能不是中国人线粒体糖尿病的致病基因.     

司帕沙星对哺乳动物培养细胞基因突变试验

司帕沙星浓度在20-100μg/ml对中国仓鼠HGPRT位点突变V79细胞相对克隆形成率为41.77-5％。司帕沙星浓度为12.5、25、50和100μg/ml时,不加或加S_9mix未发现V79细胞突变数明显增加。试验结果为阴性。     

人睫状神经营养因子基因在大肠杆菌中的表达

目的克隆人睫状神经营养因子（ｈＣＮＴＦ）基因，并在大肠杆菌宿主系统中高效表达出具有生物活性的ｈＣＮＴＦ蛋白。方法从人外周神经组织总ＲＮＡ经逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增得到编码人ＣＮＴＦ的全长ｃＤＮＡ片段，此片段经回收和纯化后克隆进ＰＧＥＭ－５Ｚｆ（＋）质粒载体，并进行了ＤＮＡ序列分析，然后进一步亚克隆进Ｔ７启动子表达载体，用ＩＰＴＧ在大肠杆菌宿主中诱导ｈＣＮＴＦ蛋白表达，并以体外培养的鸡胚背根神经节（ＤＲＧ）神经元测定了重组ｈＣＮＴＦ蛋白的神经营养活性。结果成功克隆了人ＣＮＴＦ基因，含重组ＣＮＴＦ质粒的大肠杆菌经０．４ｍｍｏｌ／ＬＩＰＴＧ诱导３小时后，靶蛋白占细菌总蛋白的２５％以上。结论ｈＣＮＴＦ基因的克隆和高效表达为进一步研究其结构功能关系和临床应用打下了基础     

16例苯丙酮尿症PAH基因Exon7突变的检测

应用选择突变扩增系统方法对１６例苯丙酮尿症患儿ＰＡＨ基因Ｅｘｏｎ７区域的多聚酶链反应扩增产物进行了突变位点的检测。结果在３２个突变位点中Ｒ２４３Ｑ和Ｒ２６１Ｑ突变位点的检出率分别为４６．８８％和９．３８％，二者占整个突变位点的５６．２５％。表明ＰＡＨ基因Ｅｘｏｎ７突变在中国苯丙酮尿症患者中具有很高的发生频率。     

膀胱癌组织中K－ras基因点突变及其基因产物P21的表达研究

为在分子生物学水平探讨膀胱癌的发生发展以及恶性程度的判别和预后评价的指标，作者应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）和免疫组织化学方法，研究了５４例膀胱癌组织和５例正常膀胱组织的Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变和其产物Ｐ２１的表达情况。结果表明：５４例膀胱癌组织中，仅有４例Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变和３４例Ｐ２１蛋白阳性表达，并且浅表性肿瘤Ｐ２１阳性表达率明显低于浸润性肿瘤。提示Ｋ－ｒａｓ基因点突变在膀胱癌中发生率较低，Ｐ２１蛋白的过量表达主要是膀胱癌晚期表现，它可能与Ｈ－ｒａｓ和Ｎ－ｒａｓ基因突变有关。为肿瘤病因学研究和临床研究提供了有用的资料。     

重组睫状神经营养因子对受损周围神经施万细胞相关基因表达的作用

目的研究重组睫状神经营养因子(CNTF)对受损周围神经施万细胞基因表达的作用。方法用硅管套接切断的大鼠坐骨神经,在受损神经局部给予重组CNTF,术后用免疫组织化学ABC法结合计算机图像分析观测S100蛋白(S100)、生长相关蛋白-43(GAP-43)、磷酸化酪氨酸(PTyr)、信号转导子和转录激活子(STAT)3的免疫反应阳性物质在修复侧远段神经的分布和相对含量。结果CNTF组修复侧远段神经相应区域S100、GAP-43、PTyr、STAT3阳性物质的含量显著或非常显著高于生理盐水组。结论重组CNTF能上调受损神经施万细胞S100、GAP-43、PTyr和STAT3的表达,提示重组CNTF通过强化受损神经施万细胞JAK-STAT途径,E调其S100和GAP-43的基因表达。     

人类免疫球蛋白同种异型G3m（16）因子在中国人群中的分布

应用单克隆抗体酶联免疫吸附抑制试验，对我国３个民族８个群体２１０４份血样进行了免疫球蛋白同种异型Ｇ３ｍ（１６）因子检测。将所获数据及其他学者报道的数据一同进行了多元相关和多元回归分析。结果显示中国人Ｇ３ｍ（１６）基因频率呈沿海拔和纬度变化的浙变群，每一地理人群的Ｇ３ｍ（１６）基因频率受到海拔高度和纬度的综合影响，建立了可预测中国人群Ｇ３ｍ（１６）基因频率的多元回归方程。     

肺腺癌中p16基因外显子2的突变分析

为了解肺腺癌ｐ１６基因外显子２的突变情况，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）及ＰＣＲ双链ＤＮＡ循环测序技术分析了２２例肺腺癌中的ｐ１６基因，结果显示：２２例肺腺癌中存在２例纯合缺失，３例点突变。其中病例１密码子５６由ＣＴＧ→ＣＡＧ的突变，编码的氨基酸由亮氨酸变为谷氨酰胺；病例１２密码子１２１由ＴＡＣ→ＴＧＣ的突变，编码的氨基酸由酪氨酸变为半胱氨酸；病例１０密码子８０由ＧＡＧ→ＡＡＧ的突变，编码的氨基酸由谷氨酸变为赖氨酸，同时这例密码子７９存在一个由ＣＧＧ→ＡＧＧ的同义突变。另外还发现１例由单碱基缺失导致的移码突变。ｐ１６基因在２２例肺腺癌中纯合缺失频率为９．１％，基因突变频率为２７．３％。可见，多重肿瘤抑制基因ｐ１６与肺腺癌的发生发展密切相关并在其演进过程中起着一定的作用。     

人骨髓巨核细胞分化发育过程中神经生长因子基因表达

实验通过原位分子杂交技术,检测人骨髓巨核细胞分化发育过程中神经生长因子（ＮＧＦ）基因表达情况。结果显示β神经生长因子ＤＮＡ探针与其互补的ｍＲＮＡ杂交后应信号存在于各级不同发育的巨核细胞胞浆中。原巨核数量很少,较难发现,杂交后反应阳性的胞浆很少,呈线状。幼巨核细胞阳性胸浆较少,杂交反应产物分布较为均匀。颗粒型巨核细胞胞浆丰富,杂交反应产物深浅不一,常见较为细小的阳性颗粒,成就型巨核细胞体积很大,胞浆