麦冬皂苷B通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡

目的探讨麦冬皂苷B对人黑色素瘤(Melanoma)A375细胞增殖,凋亡和细胞周期的影响以及相关机制。方法麦冬皂苷B处理A375细胞后,采用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;免疫印迹法检测麦冬皂苷B对A375细胞PI3K,p-PI3K,AKT,p-AKT蛋白以及通路下游凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Cleaved-caspase3表达的影响。结果麦冬皂苷B能抑制A375细胞增殖活力及PI3K/Akt/mTOR通路的活化;麦冬皂苷B促进了A375细胞内Bax和Cleaved-caspase 3的表达,抑制Bcl-2表达,诱导人黑色素瘤细胞发生凋亡;麦冬皂苷B阻滞了A375细胞细胞周期,G0/G1期细胞比例明显升高;PI3K/Akt/mTOR通路活化剂IGF-1处理A375细胞后抑制了麦冬皂苷B的上述作用。结论麦冬皂苷B能抑制A375细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。     

核因子κB信号通路在银屑病中的研究进展

【摘要】 核因子κB是一种蛋白转录因子,介导炎症等复杂的生物学过程,是多种免疫和炎症通路以及细胞增殖、分化和凋亡的关键调节因子。银屑病是一种炎症性皮肤病,其特征之一是磷酸化核因子κB水平升高导致角质形成细胞抗凋亡能力增强,并加重炎症反应。本文概述核因子κB信号通路及其在银屑病中的研究进展。     

黑素瘤核因子-κB活性的研究进展

黑素瘤是一种侵袭性的皮肤肿瘤,人类黑素瘤中存在核因子-κB的上调,异常的核因子-κB信号通路参与黑素瘤增殖、凋亡及肿瘤转移、血管生成等病理生理进程,导致基因异常表达,加速病情的进展.核因子-κB信号转导通路、关键调节因子如TNFR/TRADD/TRAF、TRAIL/TRAILR、FasR/FasL/FAP-1及基因突变等在黑素瘤的发生发展中起重要作用.因此,核因子-κB信号通路的研究有可能为治疗黑素瘤提供新的思路和方法.     

核因子-κB与炎症性皮肤病

核因子-κB／Rel家族是一种具有多向转录调节作用的蛋白质，参与多种基因的转录；与炎症反应、免疫应答以及免疫细胞的活化、转化和凋亡等一些重要的病理过程密切相关。主要讨论核因子-κB在某些炎症性皮肤病，如特应性皮炎、银屑病、结缔组织病、日光性皮炎发病过程中所起作用的研究进展。     

核因子-κB活化在胃癌耐药细胞株中作用的实验研究

目的探讨核因子-κB活化在胃癌细胞株耐药性机制中的作用。方法诱导培养胃癌细胞耐药亚株SGC7901／ADM,MTT法检测阿霉素对胃癌细胞株的细胞毒作用,流式细胞仪检测胃癌细胞株凋亡率的变化,免疫细胞化学染色法检测胃癌细胞株中的核因子-κB活化。结果SGC7901／ADM相对耐药度较亲本细胞提高了8．9倍,10ug／ml阿霉素所导致的SGC7901／ADM胃癌细胞株凋亡率在48h最低达到17．53％＋1．02％,较亲本细胞下降31％。核因子-κB活化在SGC7901／ADM胃癌细胞株达到65％。结论核因子-κB活化所导致的胃癌细胞株凋亡率下降在SGC7901／ADM胃癌细胞株耐药性机制中发挥一定作用。     

A375细胞外信号调节激酶通路与核因子κB通路的交互作用初探

【摘要】 目的 探讨黑素瘤细胞A375细胞外信号调节激酶（ERK）通路与核因子κB（NF-κB）信号转导通路的交互作用。 方法 将培养的A375细胞分为对照组、选择性ERK信号通路抑制剂U0126（10 μmol/L、5 μmol/L）处理组和选择性NF-κB通路抑制剂BMS-345541（10 μmol/L、5 μmol/L）处理组,分别提取蛋白质和mRNA,用Western 印迹、RT-PCR观察U0126抑制ERK通路后,NF-κB P65、p-IκBα蛋白及NF-κB P65 mRNA的表达,观察BMS-345541抑制NF-κB通路后ERK1/2 、p-ERK1/2蛋白及ERK1 mRNA的表达。 结果 应用10 μmol/L、5 μmol/L U0126抑制ERK通路后,胞核NF-κB P65蛋白表达（分别为0.60 ± 0.04、0.56 ± 0.06）均较对照组（1.54 ± 0.15）减少（P < 0.01）,其表达量与药物浓度无显著相关性（P > 0.01）;p-IκBα蛋白的表达（0.90 ± 0.05、0.70 ± 0.02）均较对照组（0.61 ± 0.03）增加（P < 0.01）,两药物浓度组之间的表达量差异有统计学意义（P < 0.01）;NF-κB P65 mRNA的表达（0.79 ± 0.05,0.75 ± 0.04）均较对照组（0.86 ± 0.05）减少（P < 0.01）。应用10 μmol/L BMS-345541抑制NF-κB通路后,ERK1/2、p-ERK1/2蛋白及ERK1 mRNA的表达（0.73 ± 0.07、0.75 ± 0.09、1.51 ± 0.02）较对照组减少（P < 0.01）,BMS-345541浓度为5 μmol/L时,ERK1/2、p-ERK1/2蛋白和ERK1 mRNA的表达（0.94 ± 0.11、0.99 ± 0.04、1.62 ± 0.03）较对照组的差异无统计学意义（均P > 0.05）。 结论 NF-κB通路和ERK通路在黑素瘤A375细胞中存在交互作用。     

地塞米松对HaCaT细胞核因子-κB/IκB表达的影响

目的:探讨地塞米松对角质形成细胞核因子(NF)-κB活性及其抑制蛋白(IKB)α表达的调节作用.方法:采用反转录-荧光实时定量PCR和蛋白印迹试验.观察经不同浓度及不同时间的地塞米松作用下.培养的人角质形成细胞HaCaT细胞的IκBα mRNA和蛋白质的表达;用蛋白印迹试验检测NF-κB核蛋白的表达情况.结果:地塞米松可诱导HaCaT细胞IKBα的表达而抑制NF-κB核转位,此作用呈浓度依赖性效应,在36 h时作用最明显.结论:糖皮质激素通过调控人角质形成细胞NF-κB/IκB信号通路.可抑制皮损局部的炎症反应.     

核因子-κB与皮肤病

核转录因子-κB(nuclear factor,NF-κB)属于Rel蛋白家族.在静止状态下.NF-κB蛋白二聚体与其抑制蛋白(IκB)结合,以无活性状态存在于胞质,一旦被刺激信号激活后,NF-κB与IκB解离而转入核内发挥其功能.NF-κB几乎存在于所有细胞中,参与多种基因表达的调控,与免疫反应、炎症反应及细胞凋亡密切相关,在疾病的发生、发展中起重要作用.本文就NF-κB与皮肤病如银屑病、特应性皮炎、结缔组织病、皮肤肿瘤的关系作一简要综述.     

核因子-κB与皮肤病

核因子κB(NF-κB)是一种能调节多种炎症和免疫基因表达的转录调控因子 ,它在胞浆中与其抑制蛋白 (IκB)结合呈非活性状态 ,一旦被胞外刺激信号刺激后与IκB解离而转入核内调控基因表达。NF -κB表达异常与许多皮肤病有关 ,如银屑病、红斑狼疮、皮肤肿瘤等。针对NF -κB活性的研究将对相关皮肤病的诊断和治疗带来帮助     

核转录因子E2F6通过β联蛋白信号通路调控恶性黑素瘤细胞增殖和转移的机制研究

【摘要】 目的 研究核转录因子E2F6在人恶性黑素瘤组织和细胞系中的表达,及其对恶性黑素瘤细胞A375增殖、迁移和侵袭的影响。方法 收集重庆市中医院2012年1月至2017年12月皮肤科确诊的50例皮肤恶性黑素瘤和30例色素痣冻存组织及石蜡切片。通过 qRT-PCR分析 E2F6 mRNA在人恶性黑素瘤和色素痣组织及7株恶性黑素瘤细胞系（HM、A375、WM451、WM35、SK-MEL-1、Hs-695T、MDA-MB-435s）和色素痣细胞中的表达,免疫组化和Western印迹检测E2F6、β联蛋白在人恶性黑素瘤组织中的表达。采用脂质体转染法将E2F6抑制质粒和对照质粒转染至A375细胞,通过qRT-PCR和Western印迹验证E2F6基因的敲减效率。通过CCK8、软琼脂平板克隆实验、Transwell迁移和侵袭实验、3D细胞培养实验检测E2F6基因敲减对A375细胞增殖、迁移和侵袭的影响,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率,通过Western印迹检测总β联蛋白、活化β联蛋白、c-Myc和细胞周期蛋白D1等水平。两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验;采用Pearson相关系数分析皮肤恶性黑素瘤中E2F6和β联蛋白表达的相关性。结果 7株恶性黑素瘤细胞系E2F6 mRNA相对表达水平均高于色素痣细胞（均P < 0.001）。qRT-PCR显示,皮肤恶性黑素瘤组织中E2F6 mRNA的相对表达（0.000 55 ± 0.000 17）高于色素痣组织（0.000 18 ± 0.000 09,t = 3.22,P < 0.001）。免疫组化、Western印迹显示,皮肤恶性黑素瘤组织中E2F6的相对表达水平高于色素痣组织（均P < 0.001）,而β联蛋白的相对表达水平低于色素痣组（均P < 0.001）。相关性分析显示,恶性黑素瘤组织中E2F6蛋白与β联蛋白的表达呈负相关（免疫组化：r = -0.56,Western印迹：r = -0.63,均P < 0.01）。敲减A375细胞E2F6基因后,E2F6抑制组E2F6 mRNA、蛋白相对水平低于对照组（t = 3.38、2.76,P < 0.001）。CCK-8实验显示,继续培养后48 h,E2F6抑制组细胞增殖能力低于对照组（t = 4.58,P < 0.01）;软琼脂平板实验显示,E2F6抑制组细胞相对克隆比低于对照组（t = 2.26,P＜0.001）;迁移实验显示,E2F6抑制组穿出小室细胞数（165 ± 23）低于对照组（376 ± 22,t = 3.14,P < 0.01）;侵袭实验显示,E2F6抑制组穿出小室细胞数（96 ± 11）低于对照组（315 ± 31,t = 2.12,P < 0.01）;3D细胞培养实验显示,E2F6抑制组细胞形态发生明显变化,侵袭性伪足消失。流式细胞仪检测显示,E2F6抑制组G0 - G1期细胞比例、细胞凋亡率均高于对照组（均P < 0.001）。Western印迹显示,E2F6抑制组β联蛋白水平、活化β联蛋白水平及其下游靶基因蛋白c-Myc、细胞周期蛋白D1水平均低于对照组（P < 0.001）,P21蛋白水平高于对照组（P＜0.001）;E2F6抑制组上皮-间质转化相关分子波形蛋白、神经钙黏着蛋白水平低于对照组（P < 0.001）,而上皮钙黏着蛋白水平高于对照组（P < 0.001）。结论 核转录因子E2F6在恶性黑素瘤中高表达,敲减A375细胞E2F6基因可能通过拮抗β联蛋白信号抑制细胞增殖、迁移和侵袭。     

3种糖皮质激素对HaCaT细胞核因子-κB/抑制蛋白IκBα调节的比较

目的:比较3种不同糖皮质激素对角质形成细胞的核因子(NF)-kB/IkBα调节效应的差异.方法:将培养的人角质形成细胞HaCaT细胞分为空白对照组、氢化可的松组、地塞米松组、倍他米松组,采用反转录(RT)-PCR和蛋白印迹试验检测各组HaCaT细胞的IkBα mRNA和蛋白质表达,用蛋白印迹试验检测NF-kB核蛋白的表达情况.结果:3种糖皮质激素均具有诱导HaCaT细胞IkBα的表达而抑制NF-kB核转位的作用,其中氢化可的松作用最弱,地塞米松与倍他米松无明显差异.结论:不同效力的糖皮质激素对角质形成细胞NF-kB/IkBα的调节效力不同.提示临床上正确选用不同效力糖皮质激素外用制剂的必要性.     

IFN—B与恶性黑色素瘤细胞A375的关系

目的探讨恶性黑色素瘤细胞A375肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TNFrelatedapoptosisinducedligand,TRAIL）诱导凋亡的敏感性。方法采用MTF法及流式细胞术分别检测不同浓度的可溶性TRAIL蛋白单独处理以及联合IFN-13处理后A375细胞的增殖率和凋亡率。采用western—blot、免疫组化方法检测TRML单独处理及联合IFN—B处理后A375细胞内TRAIL受体及凋亡相关蛋白的表达差异。结果TRAIL蛋白联合IFN-B处理的恶性黑色素瘤细胞A375中TRAIL受体DcRl、DcR2、DR4、DR5表达增高,肿瘤细胞抑制率,凋亡率增加。与单独处理相比,联合处理后A375细胞内凋亡相关蛋白caspase8、caspase9表达上调,NF—KB下调。结论IFN—B能通过上调黑色素瘤A375细胞内凋亡相关蛋白增加TRAIL受体的表达从而增强A375细胞对TRAIL的敏感性。     

P物质对HaCaT细胞核因子-κB的激活作用

目的:确定P物质(substance P,SP)对HaCaT细胞核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)激活的量效和时效。方法:采用免疫细胞化学法和Western-blot法检测不同作用浓度和时间的SP组和对照组HaCaT细胞中NF-κB阳性细胞和核蛋白的表达。结果:作用30 min时,对照组和10~(-9)mol/L浓度的SP组细胞生长状态良好,并可见核分裂相;与对照组相比,10~(-9) mol/L浓度的SP对HaCaT细胞NF-κB表达无明显影响(P0.05);10~(-8)mol/L至10~(-5)mol/L的SP组HaCaT细胞中NF-κB阳性细胞表达率分别为16.22%±1.20%、22.94%±2.21%、29.24%±2.63%、31.45%±2.75%,均高于对照组(P0.05);核蛋白表达量分别为0.20±0.11、0.44±0.11、0.62±0.04、0.69±0.04,也显著高于对照组(P0.01),且随作用时间延长,阳性细胞表达率和核蛋白表达量逐渐增加。结论:P物质对HaCaT细胞的NF-κB具有激活作用,并有剂量和时间依赖性。     

系统性红斑狼疮患者皮损中核因子-κB表达水平的初步研究

目的：观察系统性红斑狼疮（SLE）患者皮损中核因子-κB（NF-κB）的表达情况及与病情活动的关系。方法：取15例SLE患者典型皮损进行石蜡切片、免疫组化染色，观察其阳性表达颜色的深浅并进行半定量分析。结果：15例SLE患者典型皮损中14例NF-κBp65表达阳性，8例，3例，3例 ，阳性细胞见于表皮角质形成细胞及真皮单一核细胞，其中以棘层细胞及颗粒层细胞的细胞核中表达较强，而非SLE患者正常皮肤中则未见明显的NF-κBp65表达阳性细胞，且皮损中NF-κB表达与疾病活动无明显关系。结论：SLE患者皮肤损害的发生与局部NF-κB的异常激活有一定关系，但似与疾病活动无关。     

姜黄素对小鼠黑素瘤的抑制作用及对核因子κB激活和生存素表达的影响

目的 探讨姜黄素抑制小鼠黑素瘤作用的可能机制.方法 将黑素瘤细胞株B16F10接种于小鼠右大腿外侧皮下,建立荷黑素瘤小鼠模型,于接种后第7天分别予以50和100 mg/kg姜黄素干预,以0.5 mL无血清RPMI 1640培养基腹腔注射为对照组,观察不同处理组瘤体的变化,采用免疫印迹方法检测肿瘤组织核因子κB(NF-κB)p65表达程度,应用半定量逆转录聚合酶链反应方法检测生存素mRNA的水平.结果 姜黄素治疗组小鼠瘤重均较肿瘤对照组降低,尤以50 mg/kg姜黄素组为著,抑瘤率可达55.56%(P<0.01);治疗组肿瘤组织NF-κBp65表达水平均较肿瘤对照组降低,50 mg/kg姜黄素组降低63.19%,100 mg/kg姜黄素组降低55.74%,治疗组与肿瘤对照组差异有统计学意义(P<0.01);治疗组生存素mRNA均较肿瘤对照组降低,50 mg/kg组降低51.02%,100mg/kg组降低34.69%,治疗组与肿瘤对照组差异有统计学意义(P<0.01);肿瘤组织NF-κB活性与生存素mRNA表达水平呈正相关(r=0.81,P<0.01).结论 姜黄素可能通过抑制NF-κB活化从而下调其下游生存素基因表达来抑制恶性黑素瘤的生长.     

DM/PM中核因子-κB的表达及作用机制探讨

目的 通过研究NF-κB在DM/PM患者骨骼肌的表达情况,以及DM患者血清体外对脐静脉内皮细胞(HUVEC)NF-κB表达的影响,初步探讨NF-κB在DM/PM中的相关作用的机制.方法 采用免疫组织化法对25例DM/PM患者骨骼肌中的NF-κB(P65)进行检测,取16例DM患者治疗前和6例治疗后的血清加入体外培养的HUVEC中,用细胞免疫组织化法检测HUVEC株NF-κB(P65)的表达.结果 NF-κB(P65)在DM/PM患者骨骼肌内的微血管内皮细胞和肌纤维中表达上调,与正常对照组相比差异有显著性(P＜0.05),正常对照组无表达;DM患者治疗前血清体外作用HUVEC 6h后,(11.126±1.920)％细胞表达阳性,24h后细胞的阳性率上升到(17.048±1.140)％,差异有统计学意义(P＜0.01);治疗后血清对脐静脉内皮细胞(HU-VEC)的NF-KB(P65)阳性表达率分别为(6.797±0.609)％(6h)和(11.273±0.643)％ (24h),二者均低于相应的治疗前表达率(P＜0.01).结论 NF-κB在DM/PM肌肉微血管肌纤维的炎症性反应过程中发挥重要作用,其在DM患者血清中可能有激活NF-κB的成分.     

三黄凝胶对大鼠耳廓痤疮模型核因子-κB和白细胞介素-37的影响

目的 通过研究三黄凝胶作用于大鼠耳廓痤疮模型时核因子(NF)-κB信号通路和抗炎细胞因子白细胞介素(IL)-37的表达水平,探究三黄凝胶治疗痤疮的作用机理.方法 选择60只6～8周Wistar大鼠,采用随机抽样法分6组:空白组和模型组、阳性对照组以及三黄凝胶的低浓度、中浓度和高浓度组,每组10只大鼠,除空白组外,剩余各...     

姜黄素基于Toll样受体-核因子-κB信号通路对子宫内膜炎大鼠炎性反应的影响

目的 分析姜黄素基于Toll样受体-核因子-κB(TLRs-NF-κB)信号通路对子宫内膜炎大鼠炎性反应的影响。方法 选取43只SPF级SD雌性大鼠,其中10只大鼠作为空白组,另外33只大鼠建立子宫内膜炎模型,将建模成功的30只大鼠分为模型组、低剂量组、高剂量组,各10只。空白组大鼠、模型组大鼠用同等剂量的无菌生理盐水灌胃,低剂量组大鼠给予50 mg/kg姜黄素灌胃,高剂量组大鼠给予100 mg/kg姜黄素灌胃。比较各组的氧化应激反应指标、炎性因子水平及TLRs-NF-κB信号通路蛋白表达量。结果 与空白组相比,模型组、低剂量组、高剂量组的丙二醛(MDA)、白介素-2(IL-2)、白介素-8(IL-8)、白介素-1(IL-1)水平及TLR4、TLR2、NF-κB p65表达量升高,超氧化物歧化酶(SOD)、环氧合酶-2(COX-2)水平降低,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,低剂量组和高剂量组的MDA、IL-2、IL-8、IL-1水平及TLR4、TLR2、NF-κB p65表达量降低,SOD、COX-2水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05);与低剂量组相比,高剂量组的MDA、IL-2、IL-8、IL-1水平及TLR4、TLR2、NF-κB p65表达量降低,SOD、COX-2水平升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 姜黄素可抑制子宫内膜炎大鼠机体内炎性因子表达,调控子宫内环境平衡,其机制可能与抑制TLRs-NF-κB信号通路、减少蛋白凋亡有关。     

miR-21、miR-494对黑素瘤A375细胞凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨miR-21抑制物和miR-494模拟物转染A375细胞的最佳有效转染浓度及其对黑素瘤A375细胞增殖的影响.方法 取6个浓度梯度的miR-21抑制物和miR-494模拟物转染A375细胞,实时荧光定量PCR法检测相应的miRNA.继而用Cy5标记的miRNA模拟物阴性对照转染A375细胞,荧光显微镜下观察转染效率.用流式细胞仪检测转染后细胞增殖的变化.结果 从A375细胞中成功提出miRNA.定量PCR结果显示,当转染物miR-21抑制物浓度为120 nmol/L时,转染细胞内有miR-21模拟物最大程度的下调表达,2-△△Ct值为0.80(0.65 ～ 0.92),低于对照组;当miR-494模拟物浓度为250 nmol/L时,转染细胞内有miR-494模拟物最大程度的上调,2-△△Ct值为126.82(111.52～144.22),明显高于对照组;miR-21抑制物转染组与miR-494模拟物转染组G1期细胞比率分别为(61.61±3.25)％、(61.05±3.17)％,高于对照组(P＜0.05);增殖指数分别为(38.39±3.25)％、(38.95±3.17)％,低于对照组(P＜0.05);细胞凋亡率分别为(27.74±1.39)％、(34.30±2.35)％,高于对照组(P＜0.01),细胞转染效率达90％以上.结论 miR-21抑制物和miR-494模拟物促使肿瘤细胞的G1期阻滞和促进凋亡作用,miR-21可增强A375细胞增殖,有原癌基因样功能;miR-494可抑制A375细胞增殖,有抑癌基因样作用.