结直肠癌原发灶与肝转移灶K-ras基因状态的研究

目的观察K-ras基因在结直肠癌原发灶及肝转移灶的突变状态。方法采用富集PCR配对测序法检测46例（男35例,女11例）结直肠癌肝转移患者原发灶及肝转移灶K-ras基因突变状态,其中结肠癌肝转移21例（45.7%）,直肠癌肝转移25例（54.3%）。结果46例中有18例（39.1%）原发灶K-ras基因为突变型,其中17例对应的肝转移灶K-ras基因为突变型,1例对应的肝转移灶K-ras基因为野生型。28例（60.9%）原发灶K-ras基因为野生型者中,26例对应的肝转移灶K-ras基因为野生型,2例对应的肝转移灶K-ras基因为突变型。统计分析表明,原发灶与肝转移灶K-ras基因突变状况差异无统计学意义（P=1.00）。结论转移性结直肠癌原发灶与肝转移灶的K-ras基因突变状态差异无统计学意义。     

K-ras基因突变在内蒙古地区结直肠癌患者中研究

目的检测内蒙地区结直肠癌K-ras基因突变情况,并结合临床病理资料加以分析。方法提取15例结直肠癌患者结直肠癌手术切除标本组织的DNA,对产物进行基因序列癌组织的DNA聚合酶链反应（PCR）扩增、DNA直接测序分析。结果 K-ras基因突变率为0%,几种分化型的结直肠癌均未发现K-ras基因突变类型,包括12密码子（GGT）、13密码子（GGC）。结论我院结直肠癌患者k-ras基因突变率为0%,转移性结直肠癌患者原发肿瘤与转移灶肿瘤k-ras基因型均相同;结直肠癌患者k-ras基因突变与否与年龄、性别、肿瘤浸润深度、肿瘤组织学类型无关。     

K-ras基因突变与结直肠癌生物学行为的关系

目的: 观察结直肠癌组织中k-ras基因突变情况,探讨k-ras基因突变与结直肠癌生物学行为的关系。方法: 采用实时荧光定量PCR法检测123例结直肠癌组织中k-ras基因1号外显子12、13密码子突变情况,结合其临床病理资料分析。结果: 123例结直肠癌组织中k-ras基因突变者53例(40.8%),其中12密码子突变42例(34.1%),13密码子突变者11例(8.9%)。基因突变率与肿瘤大小、肿瘤侵润深度、分化程度无明显相关性,与淋巴结转移、肝脏转移及TNM分期有相关性（P<0.05）。淋巴结转移多者k-ras基因突变率高,有肝脏转移者基因突变率高,TNM分期越晚基因突变率越高。结论: K-ras基因突变可能在结直肠癌的发生、发展中起重要作用,而且与淋巴结转移和肝脏转移有密切相关,可作为判断结直肠癌恶性程度的一个分子生物学指标。     

K-ras基因状态与结直肠癌临床病理特征的关系

目的观察结直肠癌原发灶K-ras基因的突变,探讨其与临床病理特征的关系。方法运用实时荧光定量PCR法检测230例结直肠癌组织K-ras基因12、13密码子的突变,利用χ2检验分析其与临床病理特征的相关性。结果 230例结直肠癌患者中,84例K-ras基因发生突变,突变率为36.5%,其中12密码子突变65例(28.2%)、13密码子突变19例(8.3%)。结直肠癌肺转移患者K-ras基因突变率较无肺转移患者高(P=0.022),12、13单密码子突变与临床病理特征(患者年龄、性别、肿瘤部位、病理分型、TNM分期、Dukes分期、区域淋巴结及肝肺转移)无关(P>0.05)。结论结直肠癌K-ras基因突变可能与肺转移存在相关性,检测K-ras基因突变对结直肠癌患者临床个体化治疗具有指导意义。     

结直肠癌组织中K-ras基因突变的分子病理学检测分析

目的:应用实时荧光定量PCR方法探讨K-ras基因突变情况及其临床病理意义。方法:收集71例结直肠癌石蜡组织,使用实时荧光定量PCR法检测K-ras基因状态。结果:结直肠癌中K-ras基因突变率为35.22%(25/71),发现7种突变(Gly12Asp,Gly12Val,Gly12Cys,Gly12Ser,Gly12Ala,Gly12Arg和Gly13Asp),其中1例为Gly12Val和Gly12Arg双突变,其中56.00%(14/25)的突变发生在第十二密码子的第二位碱基,且最常见类型为Gly12Asp。K-ras基因突变率在男性组中低于女性组(χ2=7.904,P=0.005),在无淋巴结转移组中低于有淋巴结转移组(χ2=5.851,P=0.016),差异有统计学意义,但K-ras基因突变与其他临床病理参数(年龄、肿瘤位置、浸润深度、组织学类型及Dukes’分期)差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:女性或有淋巴结转移结直肠癌患者K-ras基因突变多见,可作为筛查是否进行分子靶向治疗的重点人群。     

结直肠癌原发灶及肝脏转移灶中TMSG-1的表达及意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因(tumor metastasis suppressor gene-1,TMSG-1)在结直肠癌组织及对应肝脏转移灶中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测200例结直肠癌原发灶和52例肝脏转移灶中TMSG-1蛋白的表达。结果结直肠癌原发灶中TMSG-1的高表达率为42. 5%(85/200),中等强度表达率为29. 5%(59/200),阴性率为28. 0%(56/200)。结直肠癌肝脏转移灶中TMSG-1的高表达率为17. 3%(9/52),中等强度表达率为50. 0%(26/52),阴性率为32. 7%(17/52)。TMSG-1在结直肠癌原发灶中的表达与肿瘤分化程度、浸润深度、有无淋巴结转移、有无远处转移及肿瘤TNM分期显著相关(P 0. 05),与患者年龄、性别及肿瘤大小无关。TMSG-1在结直肠癌肝脏转移灶中的表达显著低于原发灶(P 0. 05),且在肝脏转移灶中的表达与临床病理特征无明显相关性。结论 TMSG-1在肿瘤转移过程中表达明显降低,其低表达与结直肠肿瘤进展密切相关,有望在病理诊断中作为一种新型肿瘤标志物判断结直肠癌的预后。     

结直肠腺癌中Fascin-1、β-catenin蛋白表达及其与K-ras基因突变状态的相关性

目的探讨结直肠腺癌中Fascin-1、β-catenin蛋白的表达和K-ras基因突变状态,分析三者在结直肠腺癌侵袭转移过程中的相关性。方法应用免疫组化En Vision两步法检测Fascin-1、β-catenin蛋白的表达,采用ARMS荧光定量PCR法检测Kras基因突变情况,分析Fascin-1、β-catenin蛋白的表达及K-ras基因突变与结直肠腺癌临床病理特征的关系,并对三者进行相关性分析。结果 112例结直肠腺癌中,Fascin-1蛋白高表达率为27. 7%(31/112),显著高于癌旁正常组织(P 0. 01);β-catenin蛋白核的高表达率为29. 5%(33/112),显著高于癌旁正常组织(P 0. 01); Fascin-1蛋白的高表达及β-catenin蛋白核的高表达与淋巴结转移(P=0. 022,P=0. 027)、TNM分期(P=0. 042,P=0. 019)相关; Fascin-1蛋白的高表达与肿瘤位置相关(P=0. 004); K-ras基因突变39例,突变率为34. 8%(39/112); K-ras基因突变与患者年龄、性别、肿瘤位置、分化程度、淋巴结转移及TNM分期均无关(P 0. 05); Fascin-1蛋白高表达、β-catenin蛋白核表达与K-ras基因突变存在相关性(rs=0. 252,rs=0. 258,P 0. 05); Fascin-1蛋白高表达与β-catenin蛋白核表达呈正相关(rs=0. 213,P 0. 05)。结论 Fascin-1蛋白和β-catenin蛋白参与结直肠腺癌的侵袭转移,与K-ras基因突变相关; K-ras可能通过β-catenin蛋白促进Fascin-1蛋白的表达,从而为K-ras基因突变型结直肠癌的靶向治疗提供新的研究方向。     

结直肠癌原发灶中CXCR6的表达与临床意义

目的: 明确趋化因子受体CXCR6在结直肠癌原发灶中的表达特点及临床意义。方法: 收集2004年8月至2008年12月中山大学附属第一医院手术切除的143例结直肠癌标本及29例癌旁组织,应用免疫组化方法检测CXCR6的表达,采用Image-Pro Plus 6.0 软件分析图片的平均累积吸光度(mIA),分析CXCR6与同时性肝转移及预后的关系。结果: CXCR6在结直肠癌组织中呈不同程度的阳性表达,在癌旁正常组织中弱表达或不表达。结直肠癌原发灶中CXCR6的mIA在0.41~2.84之间,平均为1.54±0.04,其中同时性肝转移病例为1.63±0.05,无肝转移病例为1.41±0.08,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。以mIA值1.54为界,将病例划分为CXCR6低表达组(mIA<1.54)和CXCR6高表达组(mIA≥1.54)。CXCR6高表达患者的总生存率显著较低表达组差,两组差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Cox回归分析发现年龄(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.05)和同时性肝转移(P<0.01)为结直肠癌患者预后的独立危险因素,CXCR6为非独立危险因素。CXCR6表达与IV期肝转移患者预后无关(P>0.05),与I~III期结直肠癌患者预后呈负相关(P<0.01)。结论: CXCR6与结直肠癌肝转移的发生相关,它有望成为结直肠癌肝转移治疗的一个重要靶点。     

结直肠癌原发灶及淋巴结转移灶中SATB2表达及意义

目的：探讨富含AT序列特异性结合蛋白2(special AT-rich sequence-binding protein 2, SATB2)在结直肠癌组织及对应淋巴结转移灶中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。方法应用免疫组化EnVision法检测200例结直肠癌原发灶及80例淋巴结转移灶中SATB2蛋白表达。结果结直肠癌原发灶中SATB2高表达率为25．0%(50/200),中等强度表达率为36．0%(72/200),阴性率为39．0%(78/200)。对应淋巴结转移灶中SATB2高表达率为15．0%(12/80),中等强度表达率为28．8%(23/80),阴性率为56．2%(45/80)。 SATB2在结直肠癌原发灶中的表达与肿瘤大小、分化程度,浸润深度、淋巴结转移以及TNM分期显著相关(P<0．05),与患者年龄、性别及远处转移无相关性。 SATB2在结直肠癌淋巴结转移灶中表达显著低于原发灶(P<0．05),其在转移灶中的表达与临床病理因素无明显相关性。结论 SATB2低表达与结直肠癌的发生、发展相关,在肿瘤转移过程中表达明显降低,有望成为新型的结直肠癌分子靶标。     

48例广西结直肠癌p53基因突变分析

目的： 探讨广西地区结直肠癌p53基因突变范围。方法: 应用聚合酶链反应—单链构象多态技术和基因测序技术检测48例结直肠癌标本的p53基因,包括外显子2-11及外显子内含子剪切位点。结果: 31.25％(15/48)结直肠癌存在p53突变,共有13种突变类型,分别是：c.370T>G,c.524G>A,c.528C>G, c.529-546del18,c.536A>G,c.736A>G,c.743G>A,c.770-771del2,c.772G>T,c.814G>A, c.949delC, c.782+1G>A, 和c.919+1G>C。c.524G>A是最常见的突变类型,占18.75%（3/16）。60岁以上结直肠癌p53基因突变率是45.83%,明显高于60岁以下的16.27%(P<0.05)。直肠癌p53基因突变率是47.83%,明显高于结肠癌的16.00%(P<0.05)。结论: IARC TP 53突变数据库中（2006版本）未见c.370T>G突变,c.370T>G是个新突变。c.528C>G、c.949delC、c.782+1G>A 和c.919+1G>C突变在IARC TP 53结直肠癌突变数据库中（2006版本）未见报道,这些突变首次在结直肠癌中被发现。广西p53基因突变与其它地区有所不同。     

病理组织学生长方式对肝转移性结直肠癌患者术后3年无进展生存期的预测作用

目的探讨病理组织学生长方式对肝转移性结直肠癌患者肝转移瘤切除术后3年无进展生存期(PFS)的预测作用。方法收集2007年1月至2017年1月间北京大学人民医院收治的经病理确诊并进行手术完整切除的肝转移性结直肠癌患者111例的临床病理资料,排除不符合入组标准的病例,最后入组患者共80例。根据组织学生长方式国际专家共识标准,评估其肝转移瘤的组织学生长方式类型。通过χ²或Fisher确切检验分析组织学生长方式与其他临床病理因素的相关性。通过Kaplan-Meier生存曲线分析不同组织学生长方式的肝转移性结直肠癌患者3年PFS的差异,并通过单因素及多因素分析,确定影响其3年PFS的独立危险因素。结果共入组80例患者,其中促纤维组织增生型43例(54%)、替代型32例(40%)、推挤型3例(4%)、混合型2例(2%)。组织学生长方式与患者年龄、性别、转移瘤发生时间、肿瘤负荷、组织学分级、是否伴有黏液分化及微卫星不稳定性等临床病理特征无相关性(P>0.05)。促纤维组织增生型患者的3年PFS明显优于替代型患者,差异有统计学意义(χ²=6.107,P=0.013)。单因素及多因素分析均显示组织学生长方式为预后的独立影响因素。结论结直肠癌肝转移瘤组织学生长方式主要表现为促纤维组织增生型和替代型。组织学生长方式为肝转移性结直肠癌患者术后独立的预后因素,故组织学生长方式需要在病理报告中明确指出,以提示临床合理选择治疗策略。     

HLA-G and classical HLA class I expression in primary colorectal cancer and associated liver metastases

De novo expression of HLA-G has been demonstrated in colorectal cancer. HLA-G, amongst others, inhibits natural killer cell function, contributing to host immune defense evasion. Another mechanism to escape anti-tumor immunity is loss of HLA class I. Therefore, we determined HLA-G and HLA class I expression on primary colorectal tumors and associated liver metastases, in order to get insight in the metastasizing process regarding escaping anti-tumor immunity. HLA-G expression was evaluated using three mAbs; 4H84, MEM-G/1 and MEM-G/2. In total 81 colorectal cancer patients were evaluated. Formalin-fixed paraffin-embedded tissue sections of primary tumors and associated liver metastases, were immunohistochemically stained. A concordance between expression or loss/downregulation in the primary tumor and associated liver metastasis regarding HLA class I expression was observed in 80% of the cases. In contrast with the hypothesis of escaping NK cell-killing, we demonstrated for each HLA-G detecting mAbs used in this study, that the majority of the primary tumors that positively stained for HLA-G did not express HLA-G in the associated liver metastasis. Furthermore, we revealed the existence of non-specific binding and in addition we found that the different epitopes of HLA-G detected by 4H84, MEM-G/1 and MEM-G/2 mAbs were expressed differentially in colorectal tumor tissues.     

结直肠粘膜隐窝异常病灶K-ras、APC基因突变的研究

目的　分析隐窝异常病灶（aberrant crypt foci,ACF）的基因水平变化特点及其作为结直肠癌最早期形态变化的分子依据,探讨ACF与腺瘤之间的关系。方法　经微解剖分离提取15例正常粘膜腺体、34例ACF、15例腺瘤和35例结直肠癌组织进行DNA测序,检测K-ras第12、13、61密码子和APC第15外显子“突变密集区”的突变。结果　正常粘膜无K-ras和APC基因突变,ACF、腺瘤和癌组织K-ras突变率分别为17.6%（6/34）、13.3%（2/15）和14.3%（5/35）,3者突变率相近。4例ACF、腺瘤和癌组织的突变位于12密码子的第2碱基（GGT→GAT）,2例ACF突变发生在13密码子的第2碱基（GGC→GAC）。ACF中K-ras的突变特点与同来源的癌组织保持一致,即患者年龄较大,大体以隆起型为主,所有组织未发现有61密码子的突变。癌和腺瘤APC基因突变率相近,癌为22.9%（8/35）,腺瘤为26.7%（4/15）明显高于ACF的2.9%（1/34,P<0.05),癌组织APC与患者的年龄、肿瘤位置、大体类型、组织分化程度无关。结论　ACF可能是结直肠癌最早期的形态改变,ACF的形态学变化、部分基因的改变均有别于腺瘤,提示（1）ACF有可能是腺瘤前的形态改变;（2）结直肠癌的发生可能存在“正常上皮→ACF→癌变”这一途径。     

ERK5在结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌转移的关系

目的: 检测和分析细胞外信号调节激酶5(ERK5)蛋白在原发性结直肠癌组织和癌旁正常黏膜组织中的表达情况及其与结直肠癌临床病理参数的关系,探讨ERK5的临床意义。方法: 使用组织芯片和免疫组化的方法检测338例原发性结直肠癌癌组织和80例癌旁正常组织中ERK5的表达,分析ERK5表达与结直肠癌的临床病理参数及预后的相关性。结果:80例癌旁正常黏膜中,ERK5低表达59例(73.8%)、高表达为21例(26.2%);338例结直肠癌组织中ERK5低表达204例(60.4%)、高表达134例(39.6%);二者中的ERK5蛋白表达有显著差异(P<0.05)。在338例结直肠癌组织中,27例发生远处转移患者的癌组织中ERK5高表达率为63.0%,而311例未发生远处转移患者的癌组织中ERK5高表达率为37.6%,二者之间有显著差异(P<0.05)。但癌组织中ERK5的表达水平与患者性别、年龄、体重指数、肿瘤位置、T分期、N分期、TNM分期和分化程度无明显相关性(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示在结直肠癌组织中ERK5高表达的病人总体5年生存率与低表达组无明显差异(P>0.05)。结论:ERK5蛋白在癌组织中的表达较癌旁正常组织高;发生远处转移的结直肠癌组织中ERK5蛋白的表达水平明显高于未发生远处转移的癌组织中ERK5水平。ERK5可能是一个促进肿瘤远处转移的因子。     

Conversion therapy combined with individualized surgical treatment strategy improves survival in patients with colorectal cancer liver metastases

Objective: To explore surgical treatment strategies for patients with liver metastases from colorectal cancer (CRLM), and analyze the prognosis and influencing factors. Methods: The clinical data of 156 inpatients with CRLM admitted to our hospital from January 2009 to June 2019 were retrospectively analyzed. Patients were divided into initially resectable group (80 cases) and initially unresectable group (76 cases). For patients with initially unresectable CRLM, conversion therapy (chemotherapy plus targeted therapy) combined with individualized surgical treatment strategy was used. The individualized surgical treatment strategy mainly included hepatectomy combined with ablation. Portal vein ligation and staged resection were adopted according to the patients’ specific conditions. All patients were followed up until death. The Kaplan-Meier method and Log-rank test were used for survival analysis. Results: Median overall survival (OS) time of patients in the initially resectable group and initially unresectable group were 36 months and 17 months, respectively (P = 0.001). Median OS time of 24 patients who underwent surgical resection after successful conversion therapy was significantly longer than that of 52 patients with unsuccessful conversion therapy (20 months versus 15 months, respectively, P = 0.034). Univariate analysis showed that a maximum diameter of liver metastases < 6 cm and a number of metastases ≤ 4 were independent factors associated with successful conversion therapy. According to patients’ specific conditions, 6 cases accepted hepatectomy combined with ablation, and 1 case accepted portal vein ligation and staged resection. Conclusion: Treatment of patients with CRLM should follow the principles of standardization and individualization. For patients with initially unresectable CRLM, successful conversion therapy should be pursued whenever possible. The maximum size and number of liver metastases were significantly associated with successful conversion therapy. Surgical resection-based comprehensive treatment is key.     

Differential expression of hMLH1 in sporadic human colorectal cancer tumors and distant metastases

Somatic defects in the mismatch repair system constitute an important pathway in colorectal carcinogenesis. We have examined the expression of mismatch repair proteins in sporadic stage IV colorectal tumors and their derived metastases. Sporadic tumors were further examined for differences in expression between the tumor transition zone and the invasive front. Expression of hMSH2, hMLH1, and hPMS2 was screened immunohistochemically in 92 stage IV tumors and derived liver metastases. In cases with loss of mismatch repair protein expression, lymph node metastases were also examined. Clinicopathological parameters and Ki‐67 staining indexes were evaluated and compared. Four tumors displayed a complete loss of hMLH1/hPMS2 expression at the transition zone; however, three of these expressed both proteins at the invasive front and in liver and lymph node metastases. A further four were predominantly hMLH1/hPMS2 negative at the transition zone, but with distinct subclones of hMLH1/hPMS2‐expressing cells at the transition zone. All of these tumors expressed hMLH1/hPMS2 at the invasive front and in liver metastases, with three also expressing hMLH/hPMS2 in lymph node metastases. No significant difference in the proliferative index was observed for the hMLH1/hPMS2‐compromised group. In stage IV tumors re‐expression of hMLH1/hPMS2 occurred, leading to different patterns of expression within the primary tumor and between tumor and metastases. This may have functional importance for the chemosensitivity of metastases compared to the primary tumor.