缺血/再灌注过程中心肌细胞自噬研究进展

自噬是一种广泛存在于真核细胞中的生命现象,心肌细胞营养缺乏、缺血/再灌注损伤、心衰等均可诱发细胞自噬。缺血/再灌注过程中的心肌细胞自噬可以维持心肌细胞稳态、减少细胞缺失,但是自噬作用也可导致心肌细胞死亡。     

白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血/再灌注损伤的保护作用

目的观察白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法培养乳鼠心肌细胞,模拟I/R损伤,随机分为阴性对照组、缺血再灌组及白藜芦醇预处理组,采用台盼蓝穿透法及MTT比色法测定细胞活力,检测细胞培养液中LDH活性及心肌细胞Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-ATP酶活力。结果Res预处理可提高心肌细胞活力;稳定心肌细胞膜,抑制LDH释放;保护心肌细胞钠泵和钙泵功能,减轻再灌注损伤。结论白藜芦醇预处理对心肌缺血再灌注损伤有明显保护作用。     

抑肽酶对脑缺血再灌注大鼠c-Jun氨基末端激酶信号转导通路的影响

目的探讨抑肽酶对脑缺血再灌注大鼠c—Jun氨基末端激酶（c-Jun NH2 terminal kinases,JNK）信号转导通路的影响。方法将30只健康雄性SD大鼠完全随机分为假手术组、模型组、抑肽酶组,每组10只。采用4-VO法建立大鼠全脑缺血模型,在预定时间行灌注、固定、取脑、石蜡包埋切片;免疫组化法检测p-JNK的表达,DNA断端末端标记法检测CA1区凋亡细胞。结果p-JNK在模型组大鼠海马CA1区大量表达（239．17±2．74）,抑肽酶组p-JNK则无明显表达（176．53±O．36）,2组比较,差异有统计学意义（P〈0．05）;抑肽酶组细胞凋亡指数（27．06±3．16）明显低于模型组（62．13±1．04）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论JNK信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤中发挥重要作用,抑肽酶能够抑制JNK信号转导通路的激活,对脑缺血再灌注损伤导致的细胞损伤起到保护作用。     

萝卜硫素调控JAK2/STAT3信号通路抑制缺血再灌注心肌细胞损伤的保护机制

目的 探讨萝卜硫素对新生大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤（ischemia-reperfusion injury,IRI）的保护效应,并对其作用机制进行初步研究。方法 体外培养新生大鼠心肌细胞于缺氧24 h复氧1 h构建IRI细胞模型,观察细胞损伤情况;并将低、中、高剂量萝卜硫素（10,20,40 μg·ml^-1）及JAK2抑制剂（SAR302503）分别加入培养基中,与细胞共同处理24 h后,再置于上述缺氧复氧环境中培养,然后采用CCK8试剂盒检测萝卜硫素对心肌细胞增殖的影响,相关试剂盒检测萝卜硫素对细胞上清中乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量的影响,免疫印迹检测萝卜硫素对细胞中JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达水平的影响。结果 与正常对照组相比,IRI组细胞相对存活率显著降低（P<0.05）,LDH及MDA含量显著升高（P<0.05）,而SOD活力则显著降低（P<0.05）,并且JAK2和STAT3磷酸化水平显著升高（P<0.05）;相对于IRI组而言,细胞经过不同浓度萝卜硫素及SAR302503处理后,细胞相对存活率显著升高（P<0.05）,LDH及MDA含量显著降低（P<0.05）,SOD活力则显著升高（P<0.05）,并且JAK2和STAT3磷酸化水平显著降低（P<0.05）。结论 萝卜硫素对缺血再灌注诱导的心肌细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路活化有关。     

白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血/再灌注损伤的细胞凋亡的影响

目的观察白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血再灌注损伤的细胞凋亡的影响。方法培养乳鼠心肌细胞,模拟I/R损伤,随机分为阴性对照组、缺血再灌组及白藜芦醇预处理组,采用TUNEL染色法及Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测心肌细胞凋亡;底物酶解法检测caspase-3活性;免疫组织化学法结合计算机图像分析检测心肌细胞Bcl-2/Bax蛋白的表达。结果Res预处理使得心肌细胞凋亡率由(39.7±5.4)%降至(8.3±0.8)%,caspase-3的相对活性由5.9±0.7降至2.8±0.4,P<0.05。Res预处理可使Bcl-2表达的光密度值由99.5±4.8升至138.9±8.4,Bax表达的光密度值由140.7±8.6降至125.3±5.8,P<0.05。结论白藜芦醇预处理可通过促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、抑制促凋亡蛋白Bax的表达,抑制凋亡过程中关键酶caspase-3的活性,减少I/R引起的心肌细胞凋亡。     

白藜芦醇预处理对心肌细胞缺血／再灌注损伤保护作用的机制研究

目的研究白藜芦醇(Res)预处理对心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用的机制。方法培养乳鼠心肌细胞,模拟I/R损伤,随机分为阴性对照组、缺血再灌组及白藜芦醇预处理组,采用激光共聚焦显微术观察Res对细胞内钙的影响;采用比色法检测心肌细胞SOD和MDA活性。结果Res预处理使得心肌细胞培养液上清中超氧化物歧化酶(SOD)活性显著升高(29.28±1.24vs22.13±1.42NU/ml,P<0.05),丙二醛(MDA)活性显著降低(8.27±1.02vs13.55±1.69μmol/L,P<0.05)。Res预处理可以显著降低细胞内钙强度,P<0.05。结论白藜芦醇通过提高心肌细胞抗氧化损伤能力及降低细胞内钙超载,而缓解由于I/R产生的氧自由基损伤和钙超载所造成的损伤,从而发挥保护作用。     

血管内皮生长因子165通过抑制钙敏感性受体减少缺血/再灌注心肌细胞凋亡

目的:探讨血管内皮生长因子165(vascu-lar endothelial growth factor 165,VEGF165)在缺血/再灌注损伤中的抗细胞凋亡作用及与钙敏感性受体(calciumsensing receptor,CaSR)表达下调的关系。方法:新生鼠心肌细胞在模拟心肌缺血状态下孵育2 h,然后在标准培养液中再培养24 h,从而建立一个模拟心肌缺血/再灌注模型。通过末端脱氧核苷酰基转移酶介导性dUTP切口末端标记(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡。CaSR mRNA表达通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定。通过免疫印迹法(Westernblot)测定促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2含量。结果:模拟的缺血/再灌注后CaSR mRNA的表达(I/R组:2.6±0.4;对照组:1.0±0.3,P<0.01)和TUNEL阳性细胞增加(I/R组:15.3%±2.5%;对照组:2.9%±1.4%,P<0.01)。GdCl3、CaSR mRNA的表达(GdCl3组:4.5±0.6;I/R组:2.6±0.4,P<0.01)及TUNEL阳性细胞进一步增加(GdCl3组:25.4%±2.6%;I/R组:15.3%±2.5%,P<0.01),同时上调了Bax表达(GdCl3组:1.93±0.28;I/R组:1.50±0.21,P<0.01),下调了Bcl-2的表达(GdCl3组:0.82±0.18;I/R组:1.71±0.30,P<0.01)。VEGF165组Bax表达减少(GdCl3+VEGF165组:1.12±0.23;GdCl3组:1.93±0.28,P<0.05)和Bcl-2的表达增加(GdCl3+VEGF165组:2.56±0.54;GdCl3组:0.82±0.18,P<0.05),TUNEL阳性细胞减少(GdCl3+VEGF165组:11.8%±1.9%;GdCl3组:25.4%±2.6%,P<0.05),CaSR mRNA的表达下调(GdCl3+VEGF165组:1.5±0.4;GdCl3组:4.5±0.6,P<0.01)。结论:VEGF165通过抑制CaSR,促进Bcl-2和抑制Bax的表达来减少缺血/再灌注诱导的心肌细胞凋亡。     

舒芬太尼对心肌细胞缺血/再灌注细胞损伤的影响

目的 研究舒芬太尼通过miR-199a-3p调节线粒体自噬减轻心肌细胞缺血/再灌注损伤的机制。方法 以缺氧/复氧处理体外构建缺血/再灌注心肌细胞H9c2模型,实验分成对照组、模型组、实验组(0.4 ng·mL^-1舒芬太尼)、实验+anti-miR-NC组(0.4 ng·mL^-1舒芬太尼、inhibitor control)、实验+anti-miR-199a-3p组(0.4 ng·mL^-1舒芬太尼、miR-199a-3p inhibitor)。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应法检测miR-199a-3p表达,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,以蛋白质印迹法检测自噬蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达,以二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯法检测活性氧（ROS）,以JC-1法检测线粒体膜电位。结果 对照组、模型组、实验组、实验+anti-miR-NC组、实验+anti-miR-199a-3p组心肌细胞中miR-199a-3p表达水平为1.00±0.09,0.56±0.05,0.92±0.06,0.90±0.07,0.42±0.02,细胞凋...     

脂联素对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡及相关蛋白表达的影响

目的观察脂联素(adiponectin,APN)对大鼠缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)诱导的心肌细胞凋亡与凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响。方法将48只大鼠随机分成假手术组(sham group)、I/R组(I/R group)、脂联素预处理组(APN+I/R group),每组16只。结扎左冠状动脉前降支,建立大鼠心肌I/R模型。各组随机选取8只,采用Evans blue-TTC双染法测定心肌梗死面积;另外8只对心功能指标进行监测,实验结束后,采用透射电镜观察心肌组织损伤;原位末端标记(TUNEL)法观察心肌细胞凋亡情况;Western blot法测定心肌Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达。结果脂联素明显减小I/R所致的大鼠心肌梗死面积(P<0.05),改善心脏血流动力学(P<0.05),减轻透射电镜下心肌细胞形态、细胞膜、细胞核、线粒体等结构改变,减少细胞凋亡,增加Bcl-2表达(P<0.05),降低Bax与Caspase-3蛋白表达(P<0.05)。结论脂联素对I/R损伤的保护作用与抑制心肌细胞凋亡,从而减少心肌细胞损失、减轻心脏功能障碍有关,其抗凋亡作用机制可能与上调Bcl-2表达,下调Bax及Caspase-3表达有关。     

乳酸镁对心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究

心肌缺血再灌注损伤,随着介入性心脏治疗学的发展引起人们重视.为防止及减轻再灌注损伤,在再灌注之前或同时,可以应用细胞保护剂.镁制剂应用于心血管疾病的治疗,其疗效已得到了国内外学者的肯定,乳酸镁作为新的镁制剂,其心肌保护作用还需进一步研究.     

丹酚酸B镁盐对缺氧复氧内皮细胞内钙和一氧化氮的影响

目的:研究丹酚酸B镁盐对缺氧复氧引起的内皮细胞内钙升高和一氧化氮释放增加的影响.方法:培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304)暴露在95％ N_2 5％CO_2条件下缺氧30分钟,后在含5％CO_2的空气中复氧30分钟.内皮细胞的损伤用染料排除实验、SOD的活性和MDA的生成来评价.胞内游离钙浓度用钙荧光探针Fura 2-AM测定.一氧化氮含量用一氧化氮试剂盒测定.内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测.结果:缺氧复氧引起内皮细胞的活力由正常条件下(93.1±1.2)％降至(88±3)％(P<0.01),SOD的活性也由(0.24±0.07)kNU/L下降到(0.18±0.03)kNU/L(P>0.05),但其使内皮细胞MDA的生成由(1.12±0.06)mmol/L增至(3.78±0.03)mmol/L(P<0.01).丹酚酸B镁盐2.5,5,10 mg/L能明显降低缺氧复氧引起的内皮细胞MDA生成量的增加,并且显著提高细胞活力和SOD的活性.同时,缺氧复氧还增加内皮细胞的胞内游离钙浓度(F_(340)/F_(380)由 1.65±0.16增至 1.89±0.28)和一氧化氮释放[由(7.5±1.3)μmol/L增至(16±5)μmol/L],并上调其eNOS mRNA的表达,但降低iNOS mRNA的表达(P<0.05).但在无钙的条件下,缺氧复氧对内皮细胞的胞内游离钙浓度、一氧化氮含量、eNOSnRNA和iNOS mRNA表达     

Pharmacokinetics of magnesium lithospermate B after intravenous administration in beagle dogs

AIM: To develop a specific liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) method for the phar-macokinetic study of magnesium lithospermate B (MLB), and study the pharmacokinetics of MLB after iv administration in beagle dogs. METHODS: Each beagle dog was iv administered MLB 3, 6, and 12 mg/kg random. The serum drug concentration was determined by specific liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/ MS) assays. The pharmacokinetic parameters were calculated by Drug and Statistics version 1.0 program. RESULTS: The calibration curve for MLB was linear over a range of 16-4096μg/L with coefficients of correlation >0.999. The intra- and inter-day precisions (CV) of analysis were <10 %, and accuracy ranged from 90 % to 113 %. After iv administration of MLB at the doses of 3, 6, and 12 mg/kg, the C0 values for MLB were estimated to be of 24, 47, and 107 mg/L, respectively. The AUC increased with the increasing doses for iv administration, and the mean AUC0-t values were 109.3, 247.9, and 5     

黄芪注射液对脑缺血/再灌注大鼠海马组织JNK-3表达的影响

目的观察黄芪注射液对脑缺血/再灌注大鼠海马组织JNK3蛋白及其mRNA表达的影响。方法采用4VO法制备脑缺血/再灌注大鼠模型。设假手术组、模型组、黄芪注射液组和黄芪注射液溶剂对照组。除假手术组外,其余各组缺血30 min后再灌注,根据再灌注不同时间点再分为0、0.5、2、6、24、72和120 h 7个亚组。黄芪注射液组于缺血前30 min腹腔注射黄芪注射液[12 g(生药)·kg-1],其中24、72、120 h组手术后每隔24 h追加给药1次,黄芪注射液溶剂对照组腹腔注射与黄芪注射液等量的无菌去离子水。分别采用HE染色观察组织形态学变化;免疫组织化学法和Western blot法检测大鼠海马组织JNK3蛋白表达的变化;RT-PCR方法检测海马组织JNK3 mRNA的表达。结果 HE染色结果显示黄芪注射液可改善脑缺血/再灌注造成的大鼠海马神经元损伤;除120 h外,模型组各时间点海马组织JNK3蛋白及mRNA表达均较假手术组增加(P<0.05);与模型组相比,黄芪注射液组除120 h外各时间点JNK3蛋白及mRNA表达均降低(P<0.05),而黄芪注射液溶剂对照组在各个时间点与模型组相比差异均无显著性(P>0.05)。结论黄芪注射液可抑制脑缺血/再灌注大鼠海马组织JNK3蛋白及其mRNA表达,从而抑制脑缺血/再灌注引起的大鼠海马神经元凋亡。     

水杨酸镁对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：观察水杨酸镁对缺血再灌注造成的脑损伤的保护作用。方法：采用四动脉结扎法，制作大鼠全脑缺血再灌注模型。动物随机分成伪手术、再灌注、尼莫地平２ｍｇ／ｋｇ、水杨酸镁５ｍｇ／ｋｇ及１０ｍｇ／ｋｇ组共５组，于缺血前，再灌注前及再灌注过程中各ｉｖ给药１次。结果：缺血４０ｍｉｎ再灌注１ｈ后，脑水份从７９．０％升到８３．２％，脑钙含量由１７３升到２３９μｇ／ｇｄｗ，丙二醛含量从１５．６升到２４．６μｍｏｌ／ｇ蛋白质，乳酸脱氢酶含量由２０．７降到１１．２ＫＵ／ｇ蛋白质。尼莫地平和水杨酸镁均能减弱上述改变，并改善再灌注期间脑电图的改变。结论：水杨酸镁保护脑组织，其机制与其钙拮抗作用有关     

1,6-二磷酸果糖镁对大鼠脑缺血及再灌注损伤的保护作用(英文)

目的 :观察 1,6′ 二磷酸果糖镁 (FDP Mg)对大鼠短暂全脑缺血及再灌注损伤的影响。方法 :采用四血管 (即双侧颈总动脉 +双侧椎动脉 )闭塞法致全脑缺血及再灌注模型。结果 :与假手术组相比 ,生理盐水及FDP Mg组脑缺血再灌注后均出现不同程度的海马形态结构损伤及神经元细胞死亡。与生理盐水组相比 ,FDP Mg组再灌注 2 4h ,72h及 7d ,CA1区锥体细胞密度较生理盐水组正常形态的细胞数明显增多 (P <0 .0 1) ,海马周围胶质细胞浸润也明显减轻。结论 :FDP Mg对脑缺血后再灌注损伤有明显的保护作用     

丹酚酸B镁盐对兔洗涤血小板聚集和5-HT释放反应的影响(英文)

AIM: To study the effects and mechanism of magnesium lithospermate B(MLB) on rabbit platelet aggregation and 5-HT release. METHODS: The platelet aggregation was determined by Born's method. Release of serotonin (5-HT) and formation of thromboxane A2 (TXA2) were measured by fluorophotometry and radioimmunoassay (RIA) respectively. Cytoplasmic free Ca2+ concentration ([Ca2+]i) in platelets was measured by Fura 2-AM fluorescence technique. RESULTS: In washed platelets, thrombin (200 U/L) or arachidonic acid (AA) (30 mumol/L)-induced aggregation was inhibited by MLB 50-800 mg/L in a concentration-dependent manner. In addition, MLB had more inhibitory effects on platelet aggregation in the absence of extracellular calcium with IC50 of 102 mg/L than in the presence of CaCl2 1 mmol/L with IC50 of 194 mg/L. MLB concentration-dependently decreased the thrombin-activated release of 5-HT, whereas it did not affect the formation of TXA2 in platelets. Furthermore, MLB not only inhibited the rise of [Ca2+]i in thrombin stimulated platelets, but decreased the [Ca2+]i in resting platelets. CONCLUSION: MLB inhibited the aggregation and 5-HT release in rabbit platelets and it is probably by attenuating intracellular calcium concentration.     

隐丹参酮对脑缺血再灌注损伤神经元细胞凋亡的作用

目的 探讨隐丹参酮(CTs)抑制c-Jun氨基末端激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(JNK/p38 MAPK)信号通路对脑缺血再灌注损伤(CIRI)神经元细胞凋亡的作用.方法 将30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和实验组,每组10只,模型组和实验组参照改良Longa法制备CIRI模型.造模成功后,实验组腹腔注射CTs...     

11,12-EET对在体大鼠正常及再灌注心肌JNK1/JNK2表达的影响

目的　观察11, 12- 环氧二十碳三烯酸对再灌注心肌JNK1 /JNK2表达的影响,探讨其与心肌保护作用的关系。方法　制备大鼠缺血/再灌注心肌损伤模型,动态观察心功能的变化;实验后取心肌,用Western Blot法测定心肌JNK1 /JNK2的表达。实验分①正常组(Norm);②假手术组(Sham);③缺血再灌注组(I/R);④短阵缺血预处置组(SI+I/R);⑤11, 12 -EET预处置缺血/再灌注损伤组(EET+I/R)。结果　再灌注30min,I/R组+dp/dtmax、-dp/dtmax和LVDP均低于Sham组、SI+I/R组和EET+I/R组(P<0 .05);而I/R组大鼠心肌JNK1 /JNK2磷酸化表达高于Sham组、Norm组及EET+I/R组(P<0. 05 ),EET+I/R组与Sham组间;SI+I/R组与I/R组差异均无显著性(P>0 .05)。结论　11, 12- EET具有保护心功能的作用,这种保护作用可能是通过抑制JNK1 /JNK2的表达。     

丹参乙酸镁对人胚肾细胞内血红素加氧酶表达的影响

目的:以人胚肾细胞(HEK293T)为研究对象,进一步证实丹参乙酸镁(magnesium litho-spermate B,LAB)对氧化应激下细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)产生的影响;以血红素加氧酶-1(heme oxygenase,HO-1)为靶点,观察LAB对高糖诱导下HO-1表达的影响。方法:运用流式细胞仪检测细胞内ROS水平,RT-PCR和Western blotting分别检测高糖和LAB干预下,HEK293T细胞内HO-1基因mR-NA和蛋白表达水平。结果:高糖和H2O2可使HEK293T细胞内ROS产生明显增多,LAB能够明显抑制应激状态时HEK293T细胞内ROS产生。HEK293T细胞给予高糖刺激后,HO-1 mR-NA表达和蛋白质表达均上调,于24 h达到高峰。HEK293T细胞预先30 min给予10、50和100 mol/L 3个不同浓度的LAB干预后,与高糖对照组比较,HO-1 mRNA和蛋白质表达水平均有显著性的增加。结论:LAB不但可以直接清除氧化应激下细胞内过多的ROS,而且还可以通过激活下游基因HO-1的表达而发挥抗氧化作用。