结膜下注射Avastin抑制角膜新生血管的实验研究

目的:观察结膜下注射Avastin对实验性兔眼角膜新生血管(neovascularization,NV)的抑制作用,初步探讨作用机制。方法:应用5mm直径的加样器(末端附有棉片)吸入1mol/LNaOH接触新西兰兔右眼(20眼)中央角膜区烧灼30s,制作碱烧伤兔眼角膜NV模型。将实验兔随机分成2组,10眼(A组)碱烧伤后立即结膜下注射Avastin 2.5mg;其余10眼为对照组(B组),结膜下注射等量生理盐水。烧灼后次日每天裂隙灯观察角膜NV、角膜水肿情况,分别于3,7,14,21,28d裂隙灯照相并计算NV面积及NV抑制率。伤后7,28d各组随即处死5只实验兔,取角膜组织做石蜡切片行组织病理学检查及VEGF免疫组织化学检测。结果:两组兔眼伤后第1d角膜缘血管网明显扩张充血,3d时血管开始侵入角膜,7～14d时NV达到高峰,14～21d后NV稳定并逐渐回退。两组角膜NV长度、NV面积及角膜水肿程度存在差异(P<0.05);A组各时间点角膜NV抑制率为44.2%～55%。A组角膜上皮及实质层水肿较轻,NV较少,后弹力层基本完整,VEGF表达明显弱于B组。结论:结膜下注射Avastin对碱烧伤诱导的兔眼角膜NV形成及生长具有明显的抑制作用,可能通过下调VEGF表达发挥作用。     

姜黄素及Avastin抑制鼠角膜碱烧伤新生血管对比

目的:通过对比姜黄素与Avastin抑制大鼠碱烧伤后角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平的影响,进一步探讨姜黄素抑制CNV形成的机制。方法:选取SD大白鼠共30只,建立碱烧伤模型,随机将大鼠分成A,B两组,各15只,A组中右眼为实验组A1组,左眼为空白对照组A2;B组中右眼为实验组B1,左眼为空白对照组B2。A1组给予40μmol/L姜黄素配置成的滴眼液,A2组滴用生理盐水;B1组给予5g/LAvastin滴眼液,B2组滴用生理盐水。根据不同时间点取角膜组织进行病理切片研究、抽取房水进行ELISA测定,计算出每视野计数微新生血管及房水中VEGF含量。对以上指标进行对比分析研究。结果:两种药物均未发现在角膜水肿、角膜修复等方面的毒副作用。对新生血管的影响,两种药物CNV计数均明显低于空白对照组(P<0.01),两种药物之间对新生血管影响的对照,平均CNV计数无显著性区别。A1组与A2组对比、B1组与B2组对比,实验组VEGF均明显低于对照组,有高度显著性统计学意义(P<0.01),A1组与B1组对照,平均VEGF含量A1组高于B1组,有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素的VEGF抑制能力可能不如Avastin,但在整体抗CNV的能力上并不输于Avastin,说明姜黄素还参与了干预角膜碱烧伤CNV形成的其他机制。     

碱烧伤大鼠角膜新生血管模型的初步探索

目的:探索相对稳定可靠的碱烧伤大鼠角膜新生血管(CNV)动物模型。方法:随机将48只S-D大鼠分成4组,每组12只,采用浸润1mol/L氢氧化钠的3mm滤纸片,分别制作烧灼时间为15、30、40、60s的碱烧伤鼠眼模型,每天裂隙灯观察角膜新生血管、角膜溃疡及前房积血情况,并在3、7、14、21、28d记录上述指标。结果:伤后3d,新生血管开始侵入角膜;7d,新生血管生长活跃,向中央烧灼区侵入;14d,新生血管达到生长高峰;14d后新生血管逐渐回退。烧伤后7d,15、30、40和60s组CNV诱导率分别为16.7%、75%、100%、100%,各实验组角膜新生血管诱导率随着烧伤时间延长而增加。。15sCNV散在稀疏分布,长度较短。30s组CNV接近烧灼区边缘,分布局限。40s组CNV致密,连接成网状,生长均匀一致。30s组和40s组间CNV长度和面积差异均具有统计学差异(P<0.05)。40s组前房积血率16.7%,表现为虹膜血管点片状渗血;60s组前房积血率83.3%,积血量多严重影响到角膜新生血管观察,两组前房积血发生率具有统计学差异(P<0.05)。60s组角膜溃疡率50%,穿孔率33.3%。结论:采用浸润1mol/L氢氧化钠溶液的3mm滤纸片烧灼中央角膜40s的大鼠模型是研究化学性角膜新生血管较理想的动物模型。     

阿柏西普对碱烧伤大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的探讨阿柏西普对大鼠角膜碱烧伤后新生血管的抑制作用。方法制备SD大鼠角膜碱烧伤动物模型,随机分成4组,每组各9只,A组、B组与C组分别给予20 g·L^-1、25 g·L^-1、30 g·L^-1的阿柏西普滴眼液,D组为生理盐水组(给予生理盐水),每组每天2次滴眼治疗,共14 d。分别于碱烧伤后第3天、7天、14天,观察角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)情况并计算CNV面积。碱烧伤后第14天,处死全部小鼠,进行组织学和免疫组织化学检测各组CD34、VEGF蛋白表达情况。结果碱烧伤后第3天、7天和14天,A组、B组与C组的CNV面积均小于D组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);B组与C组在各时间点上CNV面积差异均无统计学意义(均为P>0.05);但B组和C组与A组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。HE染色及免疫组织化学染色结果显示:角膜碱烧伤后第14天,各组角膜CD34和VEGF蛋白表达增强,与A组、B组、C组比较,D组CNV旺盛致密,CD34和V...     

螺内酯抑制大鼠角膜碱烧伤新生血管形成的作用

目的:观察螺内酯(spironolactone,SL)对大鼠角膜碱烧伤后角膜新生血管(corneal neovascularization,CRNV)形成的抑制作用。方法:健康SD大鼠42只随机分为3组,6只6眼为正常组,其余36只36眼建立碱烧伤诱导的大鼠CRNV模型后随机分为实验组和对照组,每组18只。实验组给予SL(100mg/kg)灌胃,对照组给予等量生理盐水灌胃,1次/d。术后第4,7,14d在裂隙灯显微镜下观察CRNV的面积。结果:对照组在碱烧伤后4d,大鼠角巩膜缘处有新生血管芽成刷状生长,生长速度迅速,至14d新生血管交织成网状,几乎布满整个角膜。实验组大鼠CRNV管径细、分布生长速度缓慢。在碱烧伤后4,7和14d实验组CRNV面积均明显小于对照组(P<0.01)。     

人羊膜匀浆提取液对角膜碱烧伤后新生血管PEDF和VEGF表达及角膜新生血管的影响

目的:探讨人羊膜匀浆提取液对角膜碱烧伤后新生血管形成过程中色素上皮衍生因子(PEDF)和血管内皮生长因子(VEGF)表达及角膜新生血管的影响.方法:选取2015-06/2016-06在佛山爱尔眼科医院治疗的角膜碱烧伤患者32例37眼,随机分为A、B两组.其中A组17例19眼,采用40mg/L人羊膜匀浆提取液治疗,B组15例18眼,采用3g/L泼尼松龙滴眼液治疗.在治疗不同的时间点(1、4、7、14、21、28d)观察角膜新生血管的生长,同时检测新生血管形成过程中PEDF及VEGF的表达水平.结果:A组患者在使用人羊膜匀浆提取液治疗后,PEDF表达水平显著高于B组,差异有统计学意义(P=0.001),在治疗28d后,PEDF表达水平达到了0.721依0.314,而B组患者PEDF表达水平仅有0.538依0.253,两组患者PEDF表达水平间的差异具有统计学意义( P<0.05 );A组VEGF表达水平在不同的时间点检测时均低于B组,在治疗28 d后,A组患者VEGF 表达水平为0.152依0.020,B 组患者VEGF表达水平为0.302依0.031,两组患者VEGF表达水平间的差异具有统计学意义(P<0.05);A组患者角膜新生血管数量显著低于B组患者,差异有统计学意义( P<0郾05 ).结论:人羊膜匀浆提取液可以促进患者角膜碱烧伤后新生血管形成过程中PEDF表达,抑制VEGF的表达和角膜新生血管的增殖.     

Avastin抑制兔角膜新生血管的实验研究

目的探讨Avastin对角膜新生血管（NV）的抑制作用。方法日本大耳白兔20只,以角膜缝线法制作角膜新生血管模型,观察4周。在角膜缝线1周后,实验组以浓度为4mg／mL的Avastin溶液滴眼,对照组以注射用水滴眼,均为每日2次,共28d。记录角膜新生血管出现的时间、生长的长度和数量。结果两组角膜新生血管的出现时间分别为（3．43±0．53）d和（3．14±0．69）d（P〉0．05）;在缝线后14d、21d、28d,实验组角膜新生血管的面积均明显小于对照组（P〈0．05）。且实验组角膜新生血管在用药后明显变细。两组角膜荧光素染色在观察期间均未发现明显着色。结论Avastin滴眼能够有效抑制角膜新生血管的生长,并能在一定程度上使已有的新生血管消退,且未发现明显的毒副作用。     

大鼠角膜碱烧伤后新生血管基因治疗作用的研究

目的观察白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)基因对大鼠角膜碱烧伤后新生血管(CNV)的治疗作用.方法建立角膜碱烧伤后CNV模型,以pcDI质粒作为IL-1ra基因的表达载体,通过结膜下注射进行基因治疗.Wistar 大鼠随机分为5组,其中3组为不同剂量基因质粒治疗组,以及地塞米松组和生理盐水对照组.利用裂隙灯显微镜观察和角膜灌注铺片法观察记录(CNV)的生长情况;利用半定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测角膜内血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的表达.结果基因质粒治疗组和激素组CNV的生长均受到明显抑制.与阴性对照组相比,在烧伤后第7、14、28天,50 μg质粒基因治疗组CNV面积抑制率分别为34.7%、37.5%、43.7%,差异有显著性(P<0.01),而不同剂量基因治疗组间差异无显著性(P＞0.05).烧伤后24 h,VEGF mRNA水平上升至高峰,为正常角膜的5.30倍;第4天为正常角膜的2倍;第7天恢复至正常.50 μg质粒基因治疗组VEGF mRNA的表达水平受到明显抑制,24 h时下降了48.7%(P<0.01);烧伤后4天,下降了27.2%(P<0.01).结论 pcDI-hIL-1ra基因质粒对CNV具有抑制作用,其机制与抑制VEGF mRNA的上调有关.     

角膜碱烧伤后大鼠角膜新生血管的细胞学研究

背景微血管壁由周细胞和血管内皮细胞组成,以往人们对血管系统的研究主要集中于血管内皮细胞,而对血管周细胞的研究较少。目的观察角膜碱烧伤后新生血管形成过程中的血管内皮细胞和周细胞的变化,探讨周细胞对新生血管生长的影响。方法36只健康成年SPF级sD大鼠,浸有1mol／LNaOH的4mm自制涂药器放置于右眼角膜中央3s,制作碱烧伤动物模型,3只正常sD大鼠作为正常对照。分别于角膜烧伤后1、2、3、5、7、10d各处死6只大鼠获取平行于角膜缘的环形切片,采用双重免疫荧光染色法检测CD31和α—SMA在角膜组织的表达,以分别评估血管内皮细胞和周细胞的分布,观察角膜碱烧伤后二者在角膜组织中的动态变化。光学显微镜下分别计数抗Ot—SMA阳性的周细胞数和抗CD31阳性的内皮细胞数,以二者的比值作为周细胞包裹指数（PCI）,定量分析角膜碱烧伤后新生血管对周细胞的募集情况。结果角膜碱烧伤后1dCD31即可在角膜浅基质层表达,呈红色荧光,随着角膜碱烧伤时间的延长,CD31在角膜组织中的表达逐渐增加并进入深基质层,至角膜碱烧伤后7d表达的细胞数减少。呈绿色荧光的α一SMA在角膜碱烧伤2d于角膜浅基质层表达,在实验观察期内表达量均少于CD31,至碱烧伤后7d,残留的CD31阳性细胞被α—SMA阳性细胞包裹,未被包裹的CD31阳性细胞多数发生消退。碱烧伤后1、2、3、5、7、10d的PCI分别为0、16．07％、11．95％、43．84％、73．97％、86．21％,呈现递增的趋势。结论大鼠角膜碱烧伤后周细胞对血管内皮细胞的包绕可能对新生血管的成熟与稳定发挥重要作用。     

雷帕霉素滴眼液对碱烧伤角膜新生血管的影响

目的探讨雷帕霉素（Rapamycin）滴眼液对兔碱烧伤后角膜新生血管的抑制作用。方法48只新西兰白兔右眼碱烧伤制成新生血管模型,随机分成A组（0．1％雷帕霉素滴眼液组）,B组（0．5％雷帕霉素滴眼液组）,C组（1％雷帕霉素滴眼液组）,D组（赋形剂对照组）。烧伤后每天滴眼4次。观测角膜浑浊、融解情况和新生血管生长并测量长度。角膜组织HE染色观察病理改变,炎性细胞计数,免疫组化检测角膜内皮生长因子（VEGF）的表达。结果碱烧伤后各组角膜均出现不同程度的角膜浑浊、融解,随时间延长,对照组角膜浑浊、融解明显,角膜基质内大量炎性细胞浸润和粗大新生血管形成。治疗组的角膜浑浊、融解减轻,伤后7d、14dB、C组炎症细胞计数、角膜新生血管面积及VEGF表达均小于对照组（P〈0．05）。各组角膜新生血管面积与角膜炎性细胞数及VEGF表达呈正相关。结论0．5％及1％雷帕霉素滴眼液可有效抑制碱烧伤引起的角膜免疫炎症反应,抑制角膜新生血管的生长,为眼碱烧伤后角膜新生血管的治疗提供了新的选择。     

贝伐单抗治疗角膜新生血管的研究现况

贝伐单抗(bevacizumab)(商品名Avastin)是一种重组人源化单克隆IgG抗体,它与血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)高亲合力结合,抑制新生血管的生成,最初用于直肠癌的治疗,近几年用于眼部新生血管的治疗。我们对Avastin治疗角膜新生血管的基础研究及临床应用作一综述。     

Avastin不同给药途径对兔角膜新生血管及超微结构的影响

目的研究阿瓦斯汀不同给药途径对兔角膜新生血管及超微结构的影响。方法健康新西兰大白兔50只,随机选取48只兔左眼制作碱烧伤角膜新生血管动物模型,造模成功后随机分为局部滴眼组(A组)、结膜下注射组(B组)、角膜基质注射组(C组)和模型对照组(D组),每组12只,未造模2只兔双眼为空白对照,于碱烧伤后第1天、第4天、第11天、第18天、第32天观察兔眼结膜充血、角膜混浊、新生血管生长情况,并进行眼前节照相,同时计算各实验兔眼角膜新生血管面积;第11天、第18天、第32天每组各处死4只兔,即刻抽取左眼房水检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)含量,取新生血管生长最旺盛的角膜组织分别固定,待做电镜、免疫组织化学等检测。结果角膜新生血管在碱烧伤后11d内生长迅速,第18天时有所消退,第32天时趋于相对稳定,A组、B组、C组角膜新生血管面积与D组在各个时间点之间比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。碱烧伤后各时间点房水中VEGF浓度均高于正常水平,碱烧伤后11d内房水中VEGF浓度逐渐升高,至第18天时达到高峰,第32天时有所下降并趋于较稳定的水平。CD31在正常兔眼角膜组织中未见表达,A组、B组、C组阳性细胞数明显少于D组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。A组、B组、D组角膜超微结构在第11天、第18天、第32天时除碱烧伤损伤外无明显其他改变,在第18天、第32天时C组角膜超微结构损伤重于A组、B组、D组。结论局部滴眼、结膜下注射、角膜基质注射三种给药途径均对角膜新生血管有较好的抑制作用。局部滴眼与结膜下注射给药途径简单安全、效果稳定,未见对角膜超微结构产生明显影响;角膜基质注射虽短期效果显著,但对角膜超微结构产生了较明显的影响。     

Avastin在眼科应用的研究进展

Avastin是第一个被美国FDA批准的通过抑制血管生成发挥抗癌作用的新药,是现行几种抗血管生成制剂之一,可抑制血管内皮生长因子(VEGF)的生成,近年研究表明,该药在治疗眼部新生血管性以及渗出性病变中疗效显著,而且价格便宜,应用前景十分广阔。     

乙酰半胱氨酸对角膜新生血管形成过程中瘦素和PEDF表达的调节

目的　观察大鼠碱烧伤后不同时期角膜组织病理学变化、瘦素和色素上皮衍生因子（ｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍｄｅｒｉｖｅｄｆａｃｔｏｒ,ＰＥＤＦ）的表达以及乙酰半胱氨酸对瘦素和ＰＥＤＦ表达的影响,探讨他们与角膜新生血管（ｃｏｒｎｅａｌｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ,ＣＮＶ）的关系。方法　使用碱烧伤诱导大鼠ＣＮＶ模型,采用浸润１ｍｏｌ?Ｌ－１ＮａＯＨ溶液,直径为３．０ｍｍ的单片滤纸,准确置于大鼠右眼角膜中央２３ｓ制作ＣＮＶ模型。７５只大鼠随机分成３组,每组２５只,左眼为正常对照眼。Ａ组自烧伤之日起每天滴注ＰＢＳ液;Ｂ组每天滴注乙酰半胱氨酸;Ｃ组烧伤后７ｄ之内每天滴注ＰＢＳ液,７ｄ后每天加滴乙酰半胱氨酸。用裂隙灯显微镜观察ＣＮＶ,分别计算ＣＮＶ长度和面积,并行ＨＥ染色和免疫组织化学检测。结果　Ｂ组ＣＮＶ生长趋势与Ａ组、Ｃ组基本相似,但较Ａ组、Ｃ组生长迟缓,Ｃ组比Ａ组缓慢,但稍快于Ｂ组。Ｃ组角膜病理变化与Ａ组相似,较Ｂ组稍重。除４ｄ时Ａ组和Ｃ组间ＣＮＶ长度及面积差异均无统计学意义（均为Ｐ＞０．０５）外,余时间点组间两两比较差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。免疫组织化学检测显示角膜碱烧伤后,瘦素和ＰＥＤＦ的表达开始增高。伤后７ｄ,各组瘦素表达:Ａ组、Ｂ组、Ｃ组分别为０．２７６１±０１１４４、０２３２２±０．０７４９、０．２６９２±０．０６４６,ＰＥＤＦ表达分别为０．３５２１±０．１０７４、０．３８９９±０．０７２１、０．３５６１±０．１２３３,三组瘦素、ＰＥＤＦ表达总体比较差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）;两两比较显示,Ａ组与Ｂ组、Ｂ组与Ｃ组瘦素、ＰＥＤＦ表达差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。伤后１４ｄ,各组瘦素与ＰＥＤＦ的表达总体比较差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）;各组间两两比较显示,瘦素、ＰＥＤＦ表达差异均有统计学意义（均为Ｐ＜０．０５）。结论　瘦素和ＰＥＤＦ表达水平与ＣＮＶ的生成具有相关性,乙酰半胱氨酸能有效降低瘦素的表达,提高ＰＥＤＦ的表达。     

多西环素与地塞米松抑制碱烧伤大鼠角膜新生血管的对比研究

目的 对比多西环素、地塞米松对碱烧伤大鼠角膜新生血管的抑制作用.方法 健康SD大鼠48只,随机分为对照组、多西环素组、地塞米松组,每组各16只.建立角膜碱烧伤模型后,分别予眼液溶媒、5g·L-1 多西环素眼液、1g·L-1地塞米松眼液点眼,每天4次.于碱烧伤后3d、7d、14 d、21 d裂隙灯显微镜下观察,计算炎症指数和角膜新生血管面积.结果 3d、7d多西环素组、地塞米松组结膜充血、角膜水肿较对照组轻,炎症指数多西环素组分别为0.45±0.03、0.22±0.14,地塞米松组分别为0.50±0.14、0.22 ±0.07,炎症指数均明显低于对照组(均为P＜0.05),多西环素组、地塞米松组间差异无统计学意义(P ＞0.05);14 d、21 d地塞米松组炎症指数分别为0.44±0.30、0.47±0.19,显著高于多西环素组(0.04±0.06、0.19±0.11),差异均有统计学意义(均为P＜0.05).多西环素组、地塞米松组各时间点角膜新生血管面积小于对照组(均为P＜0.05),3d、7d地塞米松组角膜新生血管面积小于多西环素组(均为P＜0.05),14 d、21 d两组比较差异均无统计学意义(均为P＞0.05).地塞米松组前房出血12.5％,对照组为43.8％,多西环素组为6.3％.对照组角膜溃疡5眼,地塞米松组为8眼,多西环素组为1眼.除多西环素组无一眼发生眼内炎外,余两组均有眼内炎发生.结论 碱烧伤后短期内地塞米松抑制大鼠角膜新生血管的作用强于多西环素,但长期效果后两者无显著差异.     

Bevacizumab对大鼠角膜新生血管的抑制作用

目的：评价Bevacizumab抑制大鼠角膜新生血管的效果。 方法：碱烧伤诱导角膜新生血管模型,对20只wistar大鼠40眼随机平均分4组。角膜碱烧伤后分别给予结膜下注射药物溶剂和不同剂量Bevacizumab。比较并计算角膜新生血管生长面积。16d后角膜标本行HE检验和免疫组织化学检测VEGF的表达。 结果：各用药组与对照组新生血管面积比较差异有统计学意义;治疗组间新生血管面积比较差异没有统计学意义。组织学发现各药物治疗组炎性细胞浸润、新生血管形成均明显轻于对照组。新生血管对照组VEGF染色明显增强,药物注射组表达明显减弱。 结论：结膜下注射一定浓度的Bevacizumab对大鼠角膜碱烧伤形成的新生血管有抑制作用。     

组织工程上皮移植对碱烧伤角膜新生血管的影响

目的：评价组织工程上皮移植在碱烧伤角膜缘干细胞缺乏症中对角膜新生血管的抑制作用。

方法：回顾性非随机的病例研究。2006/2011年我院收治的19例(23眼)完全性角膜缘干细胞缺乏症的碱烧伤患者, 10例13眼行组织工程上皮移植,9例10眼行羊膜移植。所有患者在手术前后均用裂隙灯观察角膜新生血管情况,在术后第21,60d对角膜新生血管进行评分比较。

结果：术后第21d和术后第60d组织工程上皮移植组和羊膜移植组角膜新生血管均较术前明显减少( P<0.05),在术后两个评价时间点,组织工程上皮移植组平均角膜新生血管分数明显低于羊膜移植组。

结论：对碱烧伤所致角膜缘干细胞缺乏的患者,组织工程上皮移植抑制角膜新生血管的作用明显好于羊膜移植。