杭菊黄酮醇合酶基因的原核表达与重组蛋白体外活性研究北大核心CSCD

从杭菊转录组数据库中筛选并通过RACE技术克隆出1条黄酮醇合酶基因（暂命名Cm FLS）,简单序列分析表明Cm FLS基因全长1 235 bp,包含1个1 008 bp的开放阅读框（ORF）,编码335个氨基酸。预测得到的Cm FLS编码的蛋白相对分子质量为37.96 k Da,等电点（p I）为5.41,构建进化树发现Cm FLS与菊科其他种植物同源性很高。利用原核表达技术成功诱导出大小43 k Da左右的重组融合蛋白,同时使用Ni-NTA树脂分离纯化出重组融合蛋白,并确定使用含250 mmol·L-1咪唑的Ni-native buffer洗脱效果最好。将纯化后的重组融合蛋白进行体外催化反应,然后将反应的产物萃取后进行HPLC分析,结果显示Cm FLS重组融合蛋白在特定缓冲液及反应条件下能够将二氢槲皮素催化生成槲皮素,表明Cm FLS编码的功能性蛋白在杭菊黄酮生物合成途径中具有双加氧酶活性。以上研究结果为进一步研究Cm FLS的功能、阐明FLS酶的功能机制奠定了基础,同时为从分子水平调控杭菊黄酮醇成分代谢及体外催化合成黄酮醇提供新思路。     

桑黄鲨烯环氧酶基因原核表达及过表达载体的构建

目的构建桑黄三萜生物合成途径中的关键酶——鲨烯环氧酶(squalene epoxidase,SE)基因的原核表达和过表达载体。方法将克隆到的桑黄SE基因构建到原核表达载体p ET-32a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3),使用异丙基硫代-β-D-呋喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达2~10 h后,通过SDS-PAGE进行检测。根据Gen Bank中提交的香菇3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(gpd)启动子序列设计引物,利用PCR技术克隆获得香菇gpd启动子片段,以植物双元表达载体p CAMBIA1301为基础载体,通过酶切、连接等方法将其中的35 S启动子替换为香菇gpd启动子,再将SE基因编码区序列构建到gpd启动子下游,构建桑黄SE基因的过表达载体。结果成功构建了SE基因的原核表达载体p ET-32a-SE,SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约为55 000,与预测的蛋白相对分子质量基本一致。PCR检测、酶切鉴定和测序分析可知,成功构建了适宜食用菌遗传转化的中间载体p CAMBIA1301-gpd-gpd及SE基因的过表达载体p CAMBIA1301-gpd-gpd-SE。结论为后期研究SE基因在桑黄三萜生物合成方面所发挥的功能奠定基础。     

天花粉蛋白突变体的构建及其与重组天花粉在原核系统中的表达和纯化

目的:对天花粉蛋白(TCS)的第120-123位氨基酸进行缺失突变,并在原核系统中对其进行表达和纯化。方法:利用重叠延伸PCR的方法得到TCS突变体cDNA,并克隆入原核表达载体pET-28(a+)。酶切和测序鉴定后,将突变体质粒pET-28(a+)-mTCS转化BL21(DE3)表达菌,经IPTG诱导表达后,对表达产物用Ni2+-NTA亲和层析柱进行纯化和Western-blot鉴定。结果:利用重叠延伸PCR成功获得突变天花粉蛋白的编码序列,并构建pET-28(a+)-mTCS原核表达质粒。在BL21(DE3)菌中,突变体蛋白(mTCS)可被IPTG诱导性表达,并被Ni2+-NTA树脂有效纯化。结论:本实验成功获得一种突变体TCS,并建立该突变TCS的原核表达和纯化的实验方法。     

梅花鹿骨钙素的原核表达与活性研究

目的利用基因工程技术表达纯化梅花鹿骨钙素重组蛋白(Bone gla protein,BGP)并初步研究其活性,为研究梅花鹿茸生长发育提供技术支撑。方法通过PCR技术获取BGP基因,构建p GEX-BGP-His表达载体,并转化至Rosseta(DE3)宿主菌中,IPTG诱导表达。经Ni Sephrose 6 Fast Flow分离纯化,SDS-PAGE鉴定纯化产物。MTT法分析BGP对鹿茸软骨细胞chon-sv40的生物活性。结果经双酶切、测序证实p GEX-BGP-His表达载体构建成功;成功诱导表达相对分子量33.5 KDa的重组蛋白;以37℃,0.1 mmol/L IPTG诱导5 h条件下重组蛋白表达量较高;蛋白纯化后纯度可达95%;重组蛋白对鹿茸软骨细胞chon-sv40具有明显促增殖作用。结论骨钙素与鹿茸软骨细胞chon-sv40的增殖密切相关,为后续BGP在骨代谢机制以及鹿茸有效成分的研究奠定基础,对鹿茸生长机制的研究具有重要意义。     

白木香AsMAPK3基因的原核表达及其在洋葱表皮瞬时表达体系中的定位研究

目的构建国产沉香基原植物白木香AsMAPK3基因的原核表达载体,诱导重组蛋白正确表达,并研究AsMAPK3的亚细胞定位情况,为抗体制备准备材料,为筛选其互作蛋白及进一步研究其功能奠定基础。方法通过PCR方法克隆AsMAPK3基因的部分编码序列,构建重组原核表达载体pET-28a-AsMAPK3,并诱导蛋白表达。克隆AsMAPK3基因全长编码区,构建绿色荧光蛋白(GFP)瞬时表达载体pAN580-AsMAPK3,通过基因枪法转化洋葱表皮,荧光显微镜观察GFP的发光情况。结果含有重组表达载体的大肠杆菌BL21(DE3)在37℃经0.5 mmol/L异丙基硫代β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导4 h后,可获得相对分子质量约为39 000的融合蛋白,该融合蛋白在上清和包涵体中均有表达。瞬时转化洋葱表皮的GFP荧光观察发现,AsMAPK3主要在细胞核和质膜表达。结论成功实现了AsMAPK3的体外表达和纯化,明确了AsMAPK3的亚细胞定位,为后续开展其功能研究奠定了基础。     

桔梗PgHMGS和PgHMGR基因克隆与原核表达分析

目的 从桔梗植物的根中克隆羟甲基戊二酰辅酶A合酶(HMGS)和3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)基因,并进行生物信息学及原核表达分析。方法 依据桔梗转录组数据中筛选的基因序列信息,通过RT-PCR从桔梗根中克隆得到桔梗PgHMGS和PgHMGR基因;通过生物信息学分析软件预测PgHMGS和PgHMGR的蛋白性质,构建蛋白的三级结构模型,进行系统进化分析;构建重组表达载体pET-28a(+)-PgHMGS和pET-32a(+)-PgHMGR,在Ecoli.BL21(DE3)中诱导表达。结果 克隆获得的PgHMGS、PgHMGR ORF长度分别为1 401、1 749 bp,分别编码466、582个氨基酸。通过在线软件预测PgHMGS、PgHMGR分别定位于线粒体膜和内质网,均为酸性蛋白。二级结构预测结果显示PgHMGS、PgHMGR主要由α-螺旋组成。跨膜结构域预测PgHMGS不包含跨膜结构域,PgHMGR在54～76、96～118 aa分别有两个跨膜结构域。结构功能域分析PgHMGS的4～466 aa具有PLN02577(羟甲基戊二酰辅酶A合酶)家族的保守结构域,PgHM...     

山楂鲨烯合酶CpSQS1,CpSQS2的基因克隆及原核表达分析

为认识山楂三萜成分生物合成途径中鲨烯合酶基因结构特征,克隆获得山楂鲨烯合酶基因并进行生物信息学分析和原核表达分析。通过RT-PCR方法从山楂果实中克隆获得2条鲨烯合酶CpSQS1,CpSQS2的基因,其ORF长度分别为1239,1233 bp,分别编码412,410 aa。使用在线工具预测CpSQS1,CpSQS2均为稳定的酸性蛋白,二级结构主要由α-螺旋结构组成,利用同源建模对三级结构进行预测;结构功能域分析表明,CpSQS1和CpSQS2的35~367 aa都具有反式异戊烯基焦磷酸合酶的保守结构域;跨膜结构域分析预测CpSQS1,CpSQS2均具有2个跨膜结构域;序列分析表明山楂、丹参、甘草SQS基因编码的氨基酸序列具有较高的同源性;系统进化树分析显示CpSQS1,CpSQS2与蔷薇科的苹果MdSQS1,MdSQS2聚为一支,与系统进化规律一致;构建原核表达载体pGEX-4T-1-CpSQS1,pGEX-4T-1-CpSQS2转化至大肠杆菌Transetta(DE3)进行诱导表达,在65 kDa处均能成功表达出目的蛋白;基因表达分析结果显示,CpSQS2的基因表达水平在山楂的3个不同发育时期均明显高于CpSQS1。该研究首次克隆并分析了山楂SQS1,SQS2基因,为进一步研究山楂三萜生物合成途径奠定基础。     

野三七鲨烯环氧酶基因的克隆及原核表达

目的:对野三七中可能参与三萜皂苷合成的关键酶鲨烯环氧酶基因(Pvf SE)进行克隆,并对其进行生物信息学分析和原核表达。方法:采用Trizol法提取野三七根的总RNA并反转录为c DNA第一链,基于野三七的转录组数据,设计Pvf SE基因序列特异性引物,克隆基因全长,利用相关软件对该基因进行生物信息学分析,构建p Mal-c2X-Pvf SE原核表达载体,在大肠埃希菌中诱导表达重组蛋白。结果:Pvf SE开放阅读框为1 887 bp,编码628个氨基酸,蛋白相对分子质量为68. 8 k Da,理论等电点为9. 28,脂肪系数为95. 18,亲水性系数为-0. 060,不稳定指数为40. 36,属于不稳定蛋白。生物信息学分析表明,Pvf SE具有2个跨膜结构域,无信号肽,可能定位在叶绿体或细胞质膜上,具有FAD/NAD(P)结合域和鲨烯环氧酶结构域,属于混合型蛋白。Pvf SE与西葫芦和芒柄花中参与三萜皂苷合成的鲨烯环化酶(Cp SE1,Cp SE3,Os SE1,Os SE2)亲缘关系较近。此外,在大肠埃希菌BL21(DE3)中成功表达Pvf SE的重组蛋白。结论:克隆得到Pvf SE基因,并在大肠埃希菌中成功表达其重组蛋白,为进一步研究Pvf SE的功能和解析野三七中三萜皂苷生物合成途径奠定了基础。     

丹参二萜合酶基因CPS4的原核表达体系优化及活性蛋白纯化

目的:优化丹参柯巴基焦磷酸合酶基因家族新基因CPS4的原核表达体系并对重组蛋白进行纯化。方法:对2种原核表达菌株进行比较。对诱导条件,包括异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、诱导时宿主菌的密度(A600)和诱导时间进行正交试验。利用HisTrap HP蛋白纯化柱对重组蛋白进行纯化。结果:Escherichia coli Tuner(DE3)表达菌株能诱导产生更多的可溶重组蛋白。最佳诱导表达条件为诱导时宿主菌的A600值0.7,IPTG浓度0.2 mmol·L-1,诱导表达时间10 h。HisTrap HP蛋白纯化柱纯化时梯度洗脱能得到纯度高的重组蛋白。结论:利用此优化体系可得到足量用于后续研究的重组蛋白,为其他二萜类合酶基因的原核表达提供参考。     

枸骨法尼基焦磷酸合酶IcFPS2基因克隆与原核表达分析

目的 克隆枸骨Ilex cornuta三萜皂苷生物合成途径中关键酶法尼基焦磷酸合酶（farnesyl diphosphate synthase,FPS）基因,对其进行组织特异性表达分析,构建原核表达载体并进行重组蛋白诱导表达,探究其参与调控三萜皂苷生物合成的功能。方法 结合枸骨转录组数据设计特异性引物,采用PCR技术从枸骨叶中扩增得到了IcFPS2基因的c DNA序列,对其进行生物信息学分析;通过实时荧光定量进一步分析其组织表达特异性,构建原核表达载体pET32a-IcFPS2,并转化至大肠杆菌E. coli BL21(DE3)pLysS感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白的表达。结果 IcFPS2基因长1259 bp,开放阅读框为1050 bp,编码350个氨基酸,其蛋白质相对分子质量和等电点分别为40 200、5.54。氨基酸序列比对分析表明枸骨与栀子、杜仲、甘草、绞股蓝、竹节参的FPS氨基酸序列具有较高的同源性。系统进化树分析显示,IcFPS2蛋白与西洋参、人参、竹节参FPS蛋白聚为一支,表明枸骨FPS蛋白可能与双子叶植物五加科FPS蛋白在功能上较为...     

金黄色葡萄球菌肠毒素E的克隆表达及其生物活性研究

 目的克隆金黄色葡萄球菌肠毒素E(SEE)基因,获得重组SEE蛋白(rSEE),并对rSEE进行生物活性分析。方法通过PCR从金黄色葡萄球菌FR1326菌株基因中得到肠毒素SEE的成熟肽基因,将其克隆至融合表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌进行表达并对融合蛋白进行亲和色谱纯化,通过MTF法研究其生物活性。结果成功构建了SEE的表达载体,并得到高纯度的重组蛋白。MTY法结果表明,rSEE具有良好的促淋巴细胞增殖的能力以及肿瘤细胞的杀伤活性。结论具超抗原活性和高纯度的rSEE,为进一步研究该蛋白的抗肿瘤机制,构建靶向抗肿瘤融合蛋白奠定了基础。     

北葶苈子GGPS基因的克隆、序列分析与原核表达

目的:获得北葶苈子(Lepidium apetalum)中牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶(geranylgeranyl pyrophosphate synthase,GGPS)的编码基因,进行生物信息学分析,在大肠杆菌中表达该蛋白。方法:根据北葶苈子转录组测序结果中的GGPS基因序列,设计特异性引物,通过PCR扩增得到北葶苈子GGPS的c DNA序列,进行TA克隆、测序及序列分析,构建原核表达载体并于大肠杆菌中表达北葶苈子GGPS蛋白。结果:得到北葶苈子GGPS c DNA全长1 146 bp,编码381个氨基酸;序列分析表明北葶苈子GGPS基因编码的氨基酸序列包含类异戊二烯合成酶结构域,氨基酸序列进化关系表明北葶苈子GGPS与拟南芥(Arabidopsis thaliana)和白芥(Sinapis alba)亲缘关系最近;成功构建了p ET-32a-La GGPS原核表达载体,并在大肠杆菌BL21菌株中成功诱导表达。结论:首次克隆得到北葶苈子GGPS基因,并在大肠杆菌中成功表达了北葶苈子GGPS蛋白,为纯化该蛋白并研究其结构和功能奠定了基础。     

Antiangiogenic Activity of Xanthomicrol and Calycopterin,Two Polymethoxylated Hydroxyflavones in Both In Vitro and Ex Vivo Models

Our previous studies had shown xanthomicrol and calycopterin, two plant‐derived flavonoids, to have selective antiproliferative activity against some malignant cell lines. The present study is focused on the investigation of antiangiogenic potential of these two flavonoids, using in vitro and ex vivo models. Xanthomicrol and calycopterin were found to have potent inhibitory effects on microvessel outgrowth in the rat aortic ring assay. Xanthomicrol was able to completely block microvessel sprouting at 10 µg/mL, and calycopterin suppressed microvessel outgrowth by 89% at 5 µg/mL. Suramin and thalidomide, used at 20 µg/mL as positive controls, inhibited microvessel formation by 23% and 64%, respectively. The flavones also inhibited endothelial cell tube formation and human umbilical vein endothelial cell proliferation at 0.5, 5, and 10 µg/mL. In order to delineate the underlying mechanisms of antiangiogenic activity of these flavones, we investigated the influences of xanthomicrol and calycopterin on expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and basic‐fibroblast growth factor (b‐FGF) in endothelial cells. These flavones were able to inhibit VEGF expression at 0.5, 5, and 10 µg/mL, but they had little or no effect on b‐FGF expression. These findings suggest that xanthomicrol and calycopterin possess potent antiangiogenic activities, which may be due to their inhibitory influences on VEGF expression. Copyright © 2014 John Wiley & Sons, Ltd.     

水提取法和仿生提取法研究菲牛蛭不同炮制品的体外抗凝活性

目的:采取不同的提取方法研究菲牛蛭炮制前后抗凝活性变化。方法:分别采用水提取法及模拟胃肠道环境的仿生提取法提取菲牛蛭活体冻干品、清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的活性成分,测定活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性4个凝血指标,并采用Lorry法测定其蛋白含量,综合评价2种提取方法下的菲牛蛭及其炮制品的抗凝活性。结果:无论是水提取法,还是仿生提取法,APTT、PT、TT均显示炮制后抗凝活性降低,抗凝活性顺序为活体冻干品>清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品,此结果与抗凝血酶活性及蛋白含量顺序一致。结论:高温炮制方法会降低菲牛蛭的抗凝活性。     

垂序商陆PaAACT基因克隆和表达分析

目的:从垂序商陆根中克隆了商陆皂苷甲生物合成过程中关键酶乙酰乙酰辅酶A转移酶(acetoacetyl-CoA transferase,AACT)基因,进行生物信息学分析和原核表达。方法:提取垂序商陆根的总RNA,然后逆转录合成c DNA,在分析垂序商陆转录组数据的基础上,设计Pa AACT基因的特异性引物,聚合酶链式反应(PCR)扩增Pa AACT基因的c DNA序列,通过构建原核表达载体p ET-32a-PaAACT,诱导表达并且纯化目的蛋白。结果:Pa AACT基因开放阅读框为1 254 bp,编码417个氨基酸。生物信息学分析显示Pa AACT蛋白的分子式为C1 914H3 120N538O576S17,推测其相对分子质量为43. 43 k Da,理论等电点8. 90,不稳定系数32. 27,属于稳定蛋白质。根据生物信息学分析结果,Pa AACT蛋白属于硫解酶家族成员,在C末端含有硫解酶家族的1个保守位点和1个活性位点。Pa AACT蛋白可能位于细胞质中、不含信号肽、没有跨膜区。系统进化分析显示Pa AACT蛋白与甜菜等廖科植物AACT蛋白亲缘关系较近。经IPTG诱导,在大肠埃希菌BL21 (DE3)菌株中表达了Pa AACT重组蛋白,利用Ni2+亲和色谱获得了纯化的目的蛋白。结论:该研究从垂序商陆中克隆Pa AACT基因,为下一步测定Pa AACT酶催化活性、制备抗体奠定基础,也为研究其在商陆皂苷甲生物合成途径中的作用提供理论依据。     

家鸡MDH2基因克隆、生物信息学分析及原核表达载体构建

目的 初步探索家鸡苹果酸脱氢酶2编码基因MDH2的序列特征、组织表达及原核表达情况。方法 采用克隆技术与测序技术获取家鸡MDH2基因互补脱氧核糖核酸（cDNA）全长,使用多种在线软件对其进行生物信息学分析,利用实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）技术检测该基因在不同组织中的表达情况,利用同源重组技术构建pET32a（+）-MDH2表达载体,使用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导蛋白表达。结果 从新鲜家鸡砂囊内壁中成功克隆到MDH2基因,序列长度1120 bp,其开放阅读框（ORF）为1014 bp,编码337个氨基酸;MDH2蛋白相对分子质量为35.95 kDa,理论等电点9.17,属于稳定碱性疏水性蛋白。MDH2蛋白含25个磷酸化位点;二级结构主要包括α-螺旋、β-螺旋、无规则卷曲,无信号肽和跨膜结构域。MDH2基因在心、肝、脾、肺、肾、砂囊内壁中都有表达,其中心、肾、砂囊内壁中表达量较高,pET32a（+）-MDH2重组蛋白主要是以包涵体的形式存在。结论 MDH2基因在家鸡体内广泛表达,但其在各组织/器官中表达趋势不同,提示其功能可能具有广泛性与多重性。     

黄柏和附子及其单体成分对CYP3A活性的影响

目的考察黄柏、附子及其单体成分小檗碱、中乌头碱、次乌头碱对肝代谢酶CYP3A活性的影响。方法利用氯化钙沉淀法制备大鼠肝微粒体,采用红霉素脱甲基法检测大鼠CYP3A活性的变化。结果附子、黄柏的粗提物在低浓度时对CYP3A有不同程度的诱导作用,附子、黄柏在浓度为0.25,0.50 mg/ml时,其诱导作用有显著性差异;附子单体成分次乌头碱在2.5μg/ml时诱导作用最强,在25μg/ml又呈现一定的抑制作用;中乌头碱对CYP3A的诱导作用随浓度增加而增强;小檗碱作用比较缓和。结论药物粗提物及相应单体对CYP3A活性的作用趋势基本上是相同的,一定浓度黄柏和附子能增强CYP3A活性。     

薯蓣皂苷元衍生物的合成和抗肿瘤活性研究

目的合成薯蓣皂苷元衍生物并研究其体外抗肿瘤活性。方法以薯蓣皂苷元为原料,选择性地合成一系列运用AutoDock4.2对接设计的薯蓣皂苷元衍生物。采用噻唑蓝(MTT)法考察了目标化合物对人恶性黑色素瘤细胞A375、人肺腺癌细胞A549、人肝癌细胞HepG-2以及人慢性髓原白血病细胞K562进行体外抗肿瘤活性试验。结果合成12个新化合物,其结构经1H-NMR和13C-NMR确定,药理实验结果表明,大部分化合物有一定的抗肿瘤活性。结论大部分化合物有良好的抗肿瘤活性而对正常细胞无毒或低毒性。     

不同产地连翘挥发油主要成分分析及抗菌活性研究

目的:进行不同产地连翘挥发油的主要成分气相测定及其体外抗菌作用的比较研究。方法:采用水蒸气蒸馏法提取不同产地16批连翘果实中的挥发油,利用气相色谱分析检测其主要成分及含量,采用K-B纸片扩散法比较分析其抗菌活性。色谱条件为HP-5毛细管色谱柱(0.25 mm×30 m,0.25μm),程序升温为初始温度50℃,以5℃·min~(- 1)的速率升至86℃,保持3 min,再以20℃·min~(- 1)的速率升至220℃保持1 min,进样口温度230℃,检测器温度250℃。结果:α-蒎烯,莰烯,β-蒎烯,月桂烯,对伞花烃,柠檬烯和α-松油醇的线性关系良好(r均0.999 7),线性范围分别为0.016 5~0.988 8,0.005~0.300,0.038 1~2.286 0,0.003 2~0.192 0,0.000 8~0.048 0,0.008 2~0.492 0,0.002 4~0.144 0μg;稳定性、重复性试验的RSD均3.0%;加样回收率为99.0%~103.4%(RSD3.0%);不同产地连翘挥发油中主要成分含量有差异,其对5种试验菌均有不同程度抑制作用。结论:所建立的连翘挥发油多成分GC测定方法简便、准确,可用于连翘药材的质量评价;抗菌实验结果可靠,可用于连翘药材的抗菌作用评价。     

Antifungal Activity of Ellagic Acid In Vitro and In Vivo

Ellagic acid (EA) has been shown to have antioxidant, antibacterial, and anti‐inflammatory activities. In Uighur traditional medicine, Euphorbia humifusa Willd is used to treat fungal diseases, and recent studies suggest that it is the EA content which is responsible for its therapeutic effect. However, the effects of EA on antifungal activity have not yet been reported. This study aimed to investigate the inhibitory effect of EA on fungal strains both in vitro and in vivo. The minimal inhibitory concentration (MIC) was determined by the National Committee for Clinical Laboratory Standards (M38‐A and M27‐A2) standard method in vitro. EA had a broad spectrum of antifungal activity, with MICs for all the tested dermatophyte strains between 18.75 and 58.33 µg/ml. EA was also active against two Candida strains, with MICs between 25.0 and 75.0 µg/ml. It was inactive against Candida glabrata. The susceptibility of six species of dermatophytes to EA was comparable with that of the commercial antifungal, fluconazole. The most sensitive filamentous species was Trichophyton rubrum (MIC = 18.75 µg/ml). Studies on the mechanism of action using an HPLC‐based assay and an enzyme linked immunosorbent assay showed that EA inhibited ergosterol biosynthesis and reduced the activity of sterol 14α‐demethylase P450 (CYP51) in the Trichophyton rubrum membrane, respectively. An in vivo test demonstrated that topical administration of EA (4.0 and 8.0 mg/cm²) significantly enhanced the cure rate in a guinea‐pig infection model of Trichophyton rubrum. The results suggest that EA has the potential to be developed as a natural antifungal agent. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.