熊果酸对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用

目的:通过复制糖尿病肾病大鼠模型,探讨熊果酸(ursolic acid,UA)对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的保护作用及其机制。方法:SPF级大鼠采用链脲霉素(streptozocin,STZ)及高糖高脂饲料联合复制糖尿病肾病大鼠模型,实验分为正常组,模型组,阳性药组(厄贝沙坦,15 mg·kg-1),UA高剂量组(UA-H,60 mg·kg-1)和UA低剂量组(UA-L,30 mg·kg-1);观察大鼠血糖、尿蛋白量、肾指数的变化,苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法和过碘酸-希夫(periodic acid-schiff,PAS)染色法观察肾脏病理变化,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清和肾脏中的肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量,试剂盒检测肾脏组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性和丙二醛(malonaldehyde,MDA)含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织足细胞裂孔膜CD2相关蛋白(CD2-associated protein,CD2AP)和podocin蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠的血糖,24 h尿蛋白量,血清和肾脏IL-1β,IL-6及TNF-α含量,肾脏组织中MDA含量,肾指数均显著增加,体质量,肾脏组织SOD活性,肾脏中podocin,CD2AP蛋白表达量均显著降低(P0.01);与模型组比较,UA明显降低血糖值和尿蛋白量,肾指数,肾脏MDA含量,血清和肾脏IL-1β,IL-6及TNF-α水平,能够升高模型组大鼠体质量,肾脏SOD活性,肾脏中podocin,CD2AP蛋白的表达(P0.05,P0.01),逆转糖尿病所致大鼠肾小球病变。结论:UA可通过保护肾脏足细胞作用及调节裂孔膜蛋白CD2AP和podocin表达而抑制高血糖对肾脏的病理损害、降低尿蛋白和保护肾功能。     

车前子不同炮制品抗大鼠膜性肾病的比较

目的:比较车前子生品和盐炙品水煎液抗大鼠膜性肾病的活性。方法:热回流法提取车前子不同炮制品;选用改良的Border法应用阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)建立大鼠膜性肾病模型,在给药的第6周末检测大鼠24 h尿蛋白定量(UTP)及血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),总蛋白(TP),尿素氮(BUN),肌酐(SCr)水平;采用电镜和光镜观察肾脏病理形态学变化,免疫组化法检测各组大鼠肾组织肿瘤坏死因子(TNF)-α,白细胞介素(IL)-1β,转化生长因子(TGF)-β1,核转录因子-κB(NF-κB)p65的表达情况。结果:与空白组比较,模型组大鼠的尿蛋白、肾指数、血清生化指标、肾脏免疫调节因子具有极显著差异(P0.01),肾脏病理形态变化明显;与模型组比较,贝那普利组、盐炙品3个剂量组和生品高剂量组均可显著降低模型大鼠尿蛋白、肾指数(P0.05,P0.01),使血清生化指标呈显著差异(P0.05,P0.01),病理形态结果显示,大鼠肾脏病变有明显的改善,4种细胞因子表达显著降低(P0.01,P0.05);与生品高剂量组比较,贝那普利组和盐炙品高、中剂量组尿蛋白量显著降低(P0.05,P0.01),贝那普利组和盐炙品高剂量组肾指数显著降低(P0.05),贝那普利组、盐炙品高、中剂量组血清中BUN,SCr,TC,TG的含量显著低于生品高剂量组(P0.05,P0.01),低剂量组仅BUN显著低于生品高剂量组(P0.05),贝那普利组、盐炙品高、中剂量组血清中TP显著升高(P0.05),贝那普利组对肾脏4种免疫调节因子的表达显著降低(P0.01),盐炙品3个剂量组中TNF-α,IL-1β的积分吸光度(IA)显著降低(P0.01),盐炙品高剂量组TGF-β1,NF-κB p65的IA表达显著低于生品高剂量组(P0.05,P0.01)。结论:车前子盐炙品对膜性肾病大鼠的肾保护作用和对肾脏中免疫调节因子的调节作用均优于生品,可继续深入车前子盐炙品的物质基础和药效机制研究。     

抗纤灵方对肾纤维化大鼠TGF-β1/Smad信号通路表达的影响

目的:研究抗纤灵方对5/6肾切除所致肾纤维化大鼠的治疗效果,并探讨其分子作用机制。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组(n=10),假手术组(n=10),5/6肾切除肾纤维化造模组(n=30)。将造模成功的大鼠随机分为模型组、抗纤灵组、氯沙坦钾组。氯沙坦钾组、抗纤灵方组每日分别给予氯沙坦钾(33. 3 g·kg-1)及抗纤灵方(21 g·kg-1)灌胃治疗,其余组都用等体积的生理盐水。持续8周灌胃后处死,检测各组大鼠血肌酐(SCr),尿素氮(BUN),24 h尿蛋白(24 h-Pro);苏木素-伊红(HE)染色观察肾脏组织病理学改变;马松(Masson)染色观察肾脏纤维化程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)分别检测肾脏转化生长因子-β_1(TGF-β_1),Smad2,Smad3,Smad7蛋白和mRNA在肾脏组织中的表达。结果:与正常组和假手术组比较,模型组大鼠的SCr,BUN,24 h-Pro上升,纤维化面积和肾脏损伤评分增加,TGF-β_1,Smad2,Smad3 mRNA与蛋白表达升高,Smad7 mRNA与蛋白表达显著下降(P 0. 01)。与模型组相比,氯沙坦钾组、抗纤灵方组可减少纤维化面积,降低肾脏损伤评分,SCr,BUN,24 h-Pro,TGF-β_1,Smad2,Smad3 mRNA与蛋白的表达水平,Smad7mRNA与蛋白表达显著上调(P 0. 01),但低于正常组与假手术组的水平。结论:中药抗纤灵方可通过抑制TGF-β_1/Smad通路来延缓肾纤维化。     

附子理中汤灌肠对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠 NF-κB,TNF-α,IL-1β表达的影响

目的:观察附子理中汤灌肠对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜核因子-κB(NF-κB),血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法:48只SPF级Wistar大鼠共分为6组,分别为正常组、模型组、附子理中汤低、中、高剂量组及柳氮磺胺吡啶(SASP)组,每组8只:附子理中汤高、中、低剂量组分别为14.06,7.03,3.51 g·kg-1,柳氮磺吡啶组予柳氮磺吡啶0.46 g·kg-1;空白组及模型组以等体积生理盐水,每天给药1次,从造模后第3天开始用药,持续灌肠给药15 d。观察附子理中汤灌肠对脾肾阳虚型UC大鼠NF-κB,TNF-α及IL-1β表达的影响。结果:与正常组相比,模型组大鼠肠黏膜炎症面积和损伤评分明显升高,较模型组而言不同剂量附子理中汤组大鼠肠黏膜炎症面积和损伤评分明显下降(P0.05);与正常组相比,模型组大鼠肠黏膜NF-κB的含量以及血清TNF-α,IL-1β的含量明显增多(P0.05);与模型组比较不同剂量的附子理中汤均能不同程度降低大鼠肠黏膜NF-κB的含量以及血清TNF-α,IL-1β的含量(P0.05)。结论:附子理中汤灌肠对脾肾阳虚型UC大鼠肠黏膜具有抗炎和修复作用,其机制可能与其抑制NF-κB的激活,下调TNF-α,IL-1β的表达有关。     

新降糖颗粒对2型糖尿病大鼠肾脏保护作用及其机制探讨

目的:探讨新降糖颗粒对2型糖尿病(T2DM)大鼠肾脏保护作用及其作用机制。方法:50只雄性SD大鼠分为正常组(8只,普通饲料),其余大鼠采用高脂饲料喂养4周后,一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)40 mg·kg-1建立2型糖尿病模型大鼠,随机分为模型组,二甲双胍组(0.15 g·kg-1),新降糖颗粒高、低剂量组(12.64,6.32 g·kg-1),每天ig给药1次。干预8周后,检测大鼠体重,血清中空腹血糖(FBG),尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C),低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C);肾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),过氧化氢酶(CAT)的表达量及RT-q PCR检测转化生长因子-β1(TGF-β1),纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)的表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,BUN,SCr,TC,TG,LDL-C,肾脏MDA水平及PAI-1,TGF-β1mRNA表达量明显升高(P0.01),大鼠体重明显降低,HDL-C及肾脏SOD,GSH-Px,CAT水平明显降低(P0.01);与模型组比较,新降糖颗粒能显著降低大鼠FBG,BUN,SCr,TC,TG,LDL-C,肾脏MDA水平及PAI-1,TGF-β1mRNA表达量(P0.05,P0.01);增加大鼠体重,升高HDL-C及肾脏SOD,GSH-Px,CAT水平(P0.05,P0.01)。结论:新降糖颗粒能有效改善糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)大鼠的症状,推测其机制可能与新降糖颗粒抑制TGF-β1,PAI-l mRNA的表达、减轻肾脏氧化应激、改善肾功能等多因素相关。     

五色梅总黄酮对佐剂诱导大鼠关节炎的作用

目的:观察五色梅总黄酮对风湿性关节炎的治疗作用。方法:采用完全弗氏佐剂(CFA)诱导关节炎大鼠模型,设正常组,模型组,阳性药地塞米松组(0.15 mg·kg-1),五色梅总黄酮高、低剂量组(100,25 mg·kg-1)。ig给药各组每天1次,连续16 d,观察造模后第3,8,16,21,24天大鼠足跖肿胀率及关节炎指数,测定大鼠炎性组织液和血清中的白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。小鼠二甲苯耳廓肿胀法和大鼠棉球肉芽肿法观察五色梅总黄酮的抗炎作用;小鼠热板法和醋酸扭体法观察五色梅总黄酮的镇痛作用。结果:与模型组比较,五色梅总黄酮100 mg·kg-1剂量组能降低佐剂性关节炎大鼠足肿胀率并降低关节炎指数(P0.05),并能降低佐剂性关节炎大鼠炎性组织液和血清中IL-1β,TNF-α水平(P0.05);五色梅总黄酮140,70 mg·kg-1剂量组均能显著抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀程度,100 mg·kg-1剂量组能显著抑制大鼠棉球肉芽组织质量(P0.05,P0.01);五色梅总黄酮140,70 mg·kg-1剂量组均能显著减少醋酸引起小鼠的扭体反应次数和增加小鼠热板痛阈值(P0.05)。结论:五色梅总黄酮有效改善类风湿性关节炎大鼠关节炎症状,同时具有显著的抗炎镇痛作用,其机制可能与降低炎性组织液和血清中IL-1β,TNF-α水平有关。     

三七多糖对糖尿病肾病大鼠炎症反应及脂质代谢调节作用的实验研究

目的:观察三七多糖对糖尿病肾病大鼠的治疗效果及其对炎症反应和脂质代谢的调节作用。方法:60只大鼠随机分为正常组、模型组和三七多糖组,每组20只。模型组和三七多糖组给予高脂饲料喂养4周后,进行链脲佐菌素(STZ,50 mg/kg)注射造模,糖尿病肾病造模成功后,三七多糖组予以三七多糖(250 mg/kg·d-1)灌胃,正常组、模型组大鼠予以相同体积生理盐水灌胃,分别在6、12周时处死大鼠各半,采血测定血糖(BG)、胰岛素(INS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),并检测大鼠肾功能指标(BUN、SCr)及血脂水平,ELISA法测定血清炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量。取肾组织,HE染色,光镜观察病理变化,分别用RT-q PCR和Western blot方法进行SREBP-1c(固醇调节元件结合转录因子-1c)、ACCα(乙酰辅酶A羧化酶α)基因和蛋白表达的测定。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清BG、INS、BUN、SCr、IL-1β、IL-6、TNF-α、TG、TC和LDL-C含量均明显升高(P0.05),HOMA-IR明显升高;肾组织SREBP-1c、ACCαmRNA和蛋白表达明显增强(P0.05)。三七多糖给药6周后,上述指标下降明显(P0.05),且肾脏组织中SREBP-1c、ACCαmRNA和蛋白表达下调(P0.05);给药12周后,上述指标改善更显著。结论:三七多糖可能通过减轻炎症、改善脂质代谢紊乱起到保护肾脏、改善DN的作用。     

参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎大鼠结肠组织NF-κB p65，IκBα，IκKβ蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织核转录因子-κB(NF-κB)抑制蛋白激酶(IκK)/NF-κB抑制蛋白(IκB)/NF-κB信号通路的影响,探讨参苓白术散改善UC的作用机制。方法:将48只Wistar大鼠按照随机数字表法分为正常组、模型组、参苓白术散(15.6 g·kg-1)组、奥沙拉嗪钠(0.68 g·kg-1)组,每组12只,脾虚湿困型UC大鼠模型采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠结合环境与饮食干预法复制,给药组连续灌胃14 d。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-1β(IL-1β)含量,免疫组化和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠结肠组织中NF-κB p65,IκBα,IκKβ蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组大鼠结肠组织NF-κB p65,IκBα,IκKβmRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TNF-α,IL-6及IL-1β含量均显著升高(P0.01),结肠组织NF-κB p65,IκKβ蛋白和mRNA表达显著升高(P0.01),IκBα蛋白和mRNA表达显著降低(P0.01);与模型组比较,参苓白术散组和奥沙拉嗪钠组大鼠血清TNF-α,IL-6及IL-1β水平均显著下降(P0.01),结肠组织NF-κB p65,IκKβ蛋白和mRNA均显著下降(P0.01),IκBα蛋白和mRNA表达显著升高(P0.01)。结论:参苓白术散能明显下调脾虚湿困型UC大鼠结肠组织NF-κB p65,IκKβ,蛋白和mRNA表达,上调IκBα蛋白和mRNA表达;参苓白术散抑制UC大鼠IκK/IκB/NF-κB信号通路活化是其发挥肠黏膜保护作用的重要机制。     

四黄片对糖尿病肾病模型大鼠的保护作用研究

目的:观察四黄片对糖尿病肾病模型大鼠的保护作用。方法:SPF级Wistar大鼠,行右侧肾脏切除术,2周后大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制作糖尿病肾病模型,造模72 h后测定血糖,以血糖大于11.1 mmol/L为造模成功。造模成功后分组给药8周,观察各组大鼠体质量、血糖、24 h尿量、尿蛋白、血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)的变化,进行肾组织免疫组化,检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的变化。结果:模型组与正常组比较,空腹血糖、肾指数、尿量、尿蛋白、SCr、BUN明显升高(P0.01);与模型组比较,各治疗组空腹血糖、肾指数、尿量、尿蛋白、SCr、BUN明显改善(P0.05),模型组TGF-β1表达明显增高,阳性目标总个数明显高于正常组(P0.05),提示模型组大鼠肾组织TGF-β1表达增高,治疗各组均明显抑制肾脏组织细胞的TGF-β1表达,各组比较作用程度有所不同,高剂量组作用最为明显。结论:四黄片对糖尿病肾病模型大鼠具有明显的保护作用。     

当归-红芪超滤膜提取物对糖尿病肾病大鼠肾组织TGF-β1表达的影响

目的:研究当归-红芪超滤膜提取物对糖尿病肾病(DN)大鼠肾组织转化生长因子-β_1(TGF-β_1),Smad信号通路的调控作用,探讨其对DN大鼠的作用及产生该作用可能的机制。方法:采用一次性大剂量(60 mg·kg-1)腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱导建立DN大鼠模型。将DN大鼠随机分为正常组、模型组、厄贝沙坦组及当归-红芪超滤膜提取物低、中、高剂量组,之后开始灌胃给药,每天1次,8周后测空腹血糖(FBG),尿素氮(BUN),血肌酐(SCr),24 h尿蛋白;光镜观察肾组织结构变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠TGF-β_1,Smad2/3含量;免疫组化法检测肾组织TGF-β_1,Smad2/3蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)法检测肾组织TGF-β_1,Smad2/3的mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,BUN,SCr,24 h尿蛋白水平明显升高,ELISA检测大鼠TGF-β_1,Smad2/3含量明显升高,肾组织病理结构异常较为明显,TGF-β_1,Smad2/3蛋白量表达明显升高(P0.05,P0.01);与模型组比较,当归-红芪超滤膜提取物各组均不同程度降低了DN大鼠FBG,BUN,SCr,24 h尿蛋白水平(P0.05);ELISA检测大鼠TGF-β_1,Smad2/3含量降低(P0.05),肾组织病理结构异常得到改善,TGF-β_1,Smad2/3蛋白量表达减少(P0.05,P0.01),TGF-β_1,Smad2/3 mRNA表达减少(P0.05,P0.01)。结论:当归-红芪超滤膜提取物可改善DN大鼠肾功能病变,延缓DN慢性病理进展,其机制可能与其抑制TGF-β_1/Smad信号通路有关。