预测的SARS冠状病毒刺突蛋白S2亚基B细胞表位肽在大肠杆菌中的表达及其抗原性的鉴定

目的研究预测的SARS冠状病毒刺突蛋白S2亚基B细胞表位肽在大肠杆菌中的表达及其模拟S2蛋白的抗原性。方法用DNAStar软件对S2亚基序列进行分析,预测B细胞表位所在肽段。通过4轮PCR反应人工搭建预测表位cDNA序列并克隆到含有伴侣10基因的pET28a( )载体中,构成重组载体pET28-chap10-S2epi。重组蛋白Chap10-S2epi在E.coliBL21(DE3)中表达并以SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定。用纯化的chap10-S2epi免疫家兔制备抗血清,并通过ELISA判断Chap10-S2epi的抗原性。结果成功构建并在大肠杆菌中表达了Chap10-S2pei融合蛋白。Chap10-S2epi免疫的抗血清能识别真核细胞表达的SARS冠状病毒全长S2刺突蛋白。结论预测的SARS冠状病毒S2刺突蛋白B细胞表位肽能够诱导家兔产生针对S2蛋白的抗体,为研制抗SARS病毒基因工程疫苗奠定了基础。     

基于生物信息学的ECSM2胞外区B细胞表位预测

目的预测内皮细胞特异分子-2(endothelial cell-specific molecule-2,ECSM2)胞外区B细胞表位。方法以ECSM2胞外区氨基酸序列为基础,应用公共的生物信息学工具,分析ECSM2的序列特异性、二级结构,以及极性、亲水性、柔韧性、表面可及性等参数,然后借助专业的B细胞表位预测工具预测潜在的B细胞表位,最后对获得的数据综合分析,评判ECSM2胞外区最有可能的B细胞表位。结果综合分析多种生物信息学工具获得的数据表明,ECSM2胞外区69-93位氨基酸区段包含了4个相互重叠的潜在表位,具有极大的B细胞表位可能性。结论应用生物信息学预测出的ECSM2胞外区B细胞表位,为直接利用该表位从抗体库或杂交瘤细胞库中筛选出血管内皮细胞靶向的特异抗体提供了理论依据。     

严重急性呼吸综合征T细胞亚群Meta分析

目的：研究严重急性呼吸综合症（SAPS）患者T细胞亚群变化。方法：检索2003年2月-2004年1月有关SAPS患者T细胞亚群计数研究的论文，汇合成大样本资料，借助先进的RevMan4．2分析软件对这些资料进行二次分析以探讨该病患者T细胞亚群变化。结果：SAPS病程〈14天期间，患者与正常对照比较，CD3^＋细胞、CD4^＋细胞、CD8^＋细胞均显著降低（均P〈0．01）。其中，重症病人（包括重型和极重型）比非重症病人（包括轻型和普通型）降低更显著（均P〈0．01）。病程〉14天恢复期病人与病程〈14天病人比较，CD3^＋细胞虽然有了上升，但无显著差异（Z=1．56，P=0．12）。CD4^＋细胞、CD8^＋细胞均恢复性上升，差异显著（均P〈0．01）。病程〉14天恢复期病人与正常对照比较，CD3^＋细胞、CD4^＋细胞仍然显著降低（均P〈0．01）。两者的CD8^＋细胞有差异（Z=2．28，P=0．02）。结论：①SAPS患者整个病程中都存在CD3^＋细胞、CD4^＋细胞、CD8^＋细胞数量暂时性、严重性、可逆性降低；②患者T细胞亚群数量的下降以重症病人为甚；③这种降低是可逆性的，随着病程进入恢复期，患者T细胞亚群开始恢复性上升。     

旋毛虫抗原分子克隆及其T细胞和B细胞表位预测

目的 克隆旋毛虫肌幼虫Mr21 000抗原蛋白基因(Ts21),预测其T细胞和B细胞表位.方法 旋毛虫(河南地理株)感染小鼠后收集肌幼虫,提取肌幼虫总RNA,应用RT-PCR技术获取目的基因Ts21,构建重组质粒pUC18-Ts21并测序,应用生物信息分析软件预测其T细胞和B细胞表位.结果 成功构建克隆载体pUC18-Ts21.旋毛虫Mr21 000抗原的T细胞表位位于第9～23、135～150位氨基酸位点;B细胞表位位于第31～35、53～56、98～104、124～130、133～157、160～172位氨基酸位点.结论 成功克隆了旋毛虫河南地理株肌幼虫Mr21 000抗原的编码基因,T细胞和B细胞表位预测结果表明该抗原蛋白具有较好的抗原性,可作为旋毛虫病免疫诊断和预防的候选抗原.     

Pre—S（2）蛋白B细胞表位的精细特异性

采用我室建立的短肽点免疫结合试验确定Ｐｒｅ－Ｓ（２）蛋白Ｂ细胞表位的精细特异性。结果发现Ｐｒｅ－Ｓ（２）蛋白的Ｂ细胞识别部位（１４－２４）可进一步区分为两个部分交叠的表位：１４－２１和１８－２４，从而绘出了Ｐｒｅ－Ｓ（２）蛋白Ｂ细胞表位图谱。这对设计新一代疫苗及诊断试剂有指导意义。     

SARS病毒基因组所编码的E蛋白的二级结构和B细胞表位预测

目的：预测SARS病毒E蛋白的B细胞表位和二级结构。方法：以SARS病毒基因组序列为基础，采用Garnier-Robson方法、Chou-Fasman方法和Karplus-Schuhz方法预测E蛋白质的二级结构；用Kyte-Doohttle方案预测蛋白质的亲水性；用Emini方案预测蛋白质的表面可能性；用Jameson-Wolf方案预测氨基酸的抗原性指数。综合评判，预测SAPS病毒E蛋白的B细胞表位。结果：在SARS病毒E蛋白N-端的第1～6、13～19、39～43、47～64区段和第73～76区段有β-折叠中心；第6～12区段和第67～69区段可能形成转角或无规则卷曲，是柔性区域。E蛋白N端第2～13区段和第61～74区段为B细胞优势表位区域。结论：用多参数预测SARS病毒E蛋白的二级结构和B细胞表位，为实验方法探索SARS冠状病毒E蛋白的B细胞表位提供理论依据。     

人Izumo蛋白的二级结构及B细胞抗原表位预测

目的:预测人Izumo蛋白的二级结构及B细胞抗原表位.方法:以人Izumo基因序列为基础,按Chou-Fasman和Gamier-Robson方法预测其编码蛋白的二级结构,采用Karplus-Schulz方法预测Izumo蛋白骨架区的柔韧性;按Kyte-Doolittle方法预测其亲水性、Emini方法预测蛋白质表面可能性及Jameson-Wolf方法预测抗原性指数.结果:Chou-Fasman及Gamier-Robson两种方法预测的结果均表明,Izumo蛋白含较多的α螺旋,蛋白第6～17、30～40、88～99、103～120、153～160、173～188、249～260、283～297、334～338和339～346区段可能是α螺旋中心,第21～25、198～200、245～248和320～323区段可能是β折叠中心.用Kyte-Doolittle、Emini和Jameson-wolf方法分别对Izumo蛋白B细胞抗原表位进行预测结果表明,蛋白质第36～42、62～66、94～99、118～122、129～132、151～154、161～164、173～177、205～208、212～216、256～265、271～276、283～288、314～318和336～350区段附近很可能为B细胞表位优势区域.结论:该研究结果有助于确定Izumo蛋白的B细胞优势表位及发挥免疫避孕的活性部位.     

SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究

目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并...     

广东地区严重急性呼吸综合征(SARS)患者血清的IFA检测

目的：证实新分离出的冠状病毒与SARS患者的关糸。方法：应用IFA诊断试剂做免疫荧光染色，检测2003-02-04-04-13期间，广东地区3所医院临床诊断为SARS的72例患者血清特异性抗体，以及直接参加救治SARS患者但末发生感染的109名医护人员的血清标本，并以疾病流行期间70例健康体检者作为正常对照组。结果：72例SARS患者中，62例血清特异性：IgG呈阳性；而109例密切接触但末发生感染的医护人员及70例SARS流行期间健康体检者，血清特异性IgG和IgM均呈阴性。结论：SARS冠状病毒是引发广东地区SARS的病原体。     

严重急性呼吸综合症特异性记忆T细胞的研究进展

严重急性呼吸综合症（SARS）冠状病毒可以同时诱导出体液免疫应答和细胞免疫应答。对SARS康复者血清中特异性抗体水平检测表明,其随时间推移明显降低。特异性细胞免疫应答在机体清除病毒的过程中发挥着重要的作用,尤其是特异性记忆T细胞在抵御病毒再次入侵时,能迅速产生免疫应答有效保护机体。     

鼠Mincle蛋白B细胞抗原表位预测及多克隆抗体制备

目的预测鼠Mincle蛋白的B细胞抗原表位及制备其多克隆抗体。方法以鼠Mincle蛋白氨基酸序列为基础,利用signalP3.0和TMHMM Server在线软件分析其信号肽和跨膜结构,利用DNAstar软件预测其二级结构、蛋白骨架区的柔韧性、亲水性、表面可能性及表面抗原性指数;融合表达PET30a(+)/Mincle蛋白并通过镍层析柱纯化后,免疫兔获得Mincle多克隆抗体。结果 Mincel蛋白是一种跨膜蛋白质,N末端第1-22号氨基酸可能位于蛋白的表面并可能为抗原表位;成功构建了重组载体PET30a(+)/Mincle,转化大肠杆菌BL21后表达包涵体融合蛋白,利用镍亲和层析得到了无生物活性的高纯度重组蛋白,纯化蛋白免疫兔,制备了滴度达1:128 000的多克隆抗体;Western-blot检测显示抗体特异性高。结论 Mincle蛋白N端即胞外区的第1-22氨基酸可作为Mincle蛋白的主要抗原表位区以制备Mincle多克隆抗体。     

严重急性呼吸综合症特异性记忆T细胞的研究进展

严重急性呼吸综合症(SARS)冠状病毒可以同时诱导出体液免疫应答和细胞免疫应答.对SARS康复者血清中特异性抗体水平检测表明,其随时间推移明显降低.特异性细胞免疫应答在机体清除病毒的过程中发挥着重要的作用,尤其是特异性记忆T细胞在抵御病毒再次入侵时,能迅速产生免疫应答有效保护机体.     

Per—S（2）蛋白T细胞识别的精细特异性

本文采用合成交叠肽扫描的方法在６种不同Ｈ－２单位型小鼠确定了ｄ／ｙ二种亚型Ｐｒｅ－Ｓ（２）蛋白的Ｔ细胞识别部位。发现：（１）在所观察的６种同类系小鼠均存在对Ｐｒｅ－Ｓ（２）蛋白反应的亚型特异性，这可能与Ｐｒｅ－Ｓ（２）蛋白分子的末端的多态性有关；（２）Ｐｒｅ－Ｓ（２）蛋白的Ｔ细胞识别部位在５种同类系小鼠位于Ｃ末端３２个氨基酸残基顺序内，在另一种同类系小鼠则位于Ｎ末端顺序，这与我们先前的理论观测结果     

应用合成的SARS病毒S蛋白重叠肽筛选B细胞表位

目的筛选SARS病毒S蛋白的B细胞表位。方法使用SARS-CoV S DNA疫苗免疫BALB／c小鼠，获得SARS病毒S蛋白的免疫血清。人工合成包含169条部分氨基酸序列重叠的SARS-CoV S蛋白的多肽库。将多肽片段包被ELISA板，利用免疫小鼠血清，通过抗体结合试验来筛选SARS病毒S蛋白的线性B细胞表位。并将筛选结果与使用B细胞表位分析软件预测的结果进行比较。结果使用重叠肽合成法筛选到SARS．CoV蛋白两条多肽片段S335—352和S442—458．能与免疫动物血清特异性结合，与使用Bcipep数据库预测B细胞表位的结果相一致。结论鉴定了两个新的SARS病毒S蛋白B细胞表位。     

人类偏肺病毒F蛋白的B细胞表位预测

目的 预测人类偏肺病毒F蛋白的B细胞表位。方法综合分析二级结构、亲水性、表面可及性与抗原性指数，预测F蛋白的抗原表位。结果B细胞表位位于F蛋白N段15-28、88-102、161-189、195-202、206-213、245-257、290-299、302-309、318-334、410-419、515-526区段。结论应用多参数预测F蛋白的B细胞表位，为进一步研究蛋白特征、单克隆抗体制备及表位疫苗研制奠定了基础。     

一株变异SARS冠状病毒N蛋白的原核表达及活性测定

目的 :克隆编码严重急性呼吸综合征冠状病毒 (SARS CoV)N蛋白的DNA ,构建原核表达质粒pGEX 2T/N ,并诱导表达。方法 :采用RT PCR方法从病毒培养液中获得N基因片段 ,并克隆入T EASY载体中。经PCR、双酶切鉴定后 ,测序。将N蛋白基因序列定向插入原核表达载体pGEX 2T中 ,表达融合蛋白。用表达产物与抗SARS CoV抗体阳性血清做Westernblot。结果 :N蛋白DNA测序的结果与GenBank比对缺失 2 0个bp。GST N融合蛋白以可溶形式表达。Westernblot检测表明 ,其与抗SARS CoV抗体阳性血清的反应呈阳性。结论 :成功地构建原核表达质粒pGEX 2T/N ,并表达GST N融合蛋白 ,为下一步的研究奠定了基础。     

E血清型沙眼衣原体主要外膜蛋白B细胞表位的预测

基于E血清型沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,CT)主要外膜蛋白(Major outer membrane protein, MOMP)氨基酸序列,采用Hopp-Woods的亲水性方案、Emini表面可及性方案、Jameson-Wolf 抗原指数方案和Janin可及性方案等,辅以对MOMP蛋白的二级结构中的柔性区域及跨膜区域的分析,预测CT MOMP蛋白的B细胞表位.推测最有可能的B细胞表位位于MOMP蛋白N端第73～81区段、217～225区段、第377～386区段、第261～270区段和第161～175区段内或它们的附近.用多参数预测CT MOMP蛋白的B细胞表位,为进一步研究蛋白特性及表位疫苗研制奠定了基础.     

人乳头瘤病毒外壳蛋白B—细胞表位的研究进展

本文以HPV16的L1及L2为中心 ,就HPV外壳蛋白B 细胞表位研究的一般方法、实验方法与B 细胞表位确定的关系、交叉反应与共同表位之间的关系以及B 细胞构像表位位点的确定等四个方面 ,综述了国外近些年关于L1和L2蛋白B 细胞表位的研究现状。     

BPI N端优势抗原表位的模拟合成及其抗血清的制备

目的通过生物信息学模拟合成杀菌/渗透增强蛋白氨基端(BPIN端)优势抗原表位肽,免疫动物获得相应抗血清。方法利用生物信息学分析BPIN端(1-199)氨基酸序列的抗原性、亲水性、可塑性、表面可及性和二级结构等理化特性,据此设计合成TA/IK两条多肽,将其与钥孔戚血蓝素(KLH)偶联后,免疫家兔获得相应抗血清;采用间接ELISA法鉴定多肽的抗原性、测定血清抗体效价,Westernblot鉴定抗血清特异性。结果人工合成BPIN端TA/IK两个B细胞表位肽;ELISA检测证实TA/IK抗原肽能与商品化兔抗人BPI55多克隆抗体结合;所获TA/IK抗血清效价分别为1∶51200和1∶25600;Westernblot证实TA/IK抗血清能与BPI55标准品特异性结合。结论模拟合成的TA/IK抗原肽确为BPIN端优势抗原表位,相应抗血清可用于BPIN端功能性片段的检测鉴定。