萝卜硫素介导Wnt/β-catenin信号通路诱导胃癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨萝卜硫素对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响及其对Wnt/β-连锁蛋白（Wnt/β-catenin）信号通路活化的影响。[方法]采用CCK8实验检测10、20、40 μmol/L萝卜硫素对SGC-7901细胞增殖的影响,流式细胞仪分析萝卜硫素对SGC-7901细胞凋亡的影响,荧光素酶报告基因实验检测萝卜硫素对Wnt/β-catenin通路中淋巴增强因子/淋巴腺黏连因子（TCF4/LEF）转录活性的影响,Western Blot方法检测萝卜硫素对SGC-7901细胞中β-catenin、糖原合成激酶3β（GSK-3β）、c-Myc及半光天冬酶3（Caspase3）蛋白表达水平的影响。[结果]与对照组相比,萝卜硫素组SGC-7901细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,呈现出时间、剂量依赖性;萝卜硫素组SGC-7901细胞凋亡率相比对照组显著增高（P<0.05）,并且萝卜硫素还能明显抑制TCF4/LEF报告质粒的荧光素酶活性（P<0.05）;萝卜硫素组SGC-7901细胞内β-catenin及c-Myc蛋白表达呈浓度依赖性降低,而GSK-3β及Caspase3蛋白表达呈浓度依赖性增高（P<0.05）。[结论]萝卜硫素能明显抑制SGC-7901细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活化有关。     

石见穿多糖通过Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤细胞的迁移和侵袭

目的探讨石见穿多糖通过Wnt/β-catenin信号通路调控骨肉瘤细胞的迁移和侵袭。方法不同浓度石见穿多糖(0、0.25、0.5、1 mg/mL)处理人OS MG63细胞24 h,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,RT-PCR检测人OS细胞β-catenin mRNA表达,Western blot检测人OS MG63细胞Vimentin、E-cadherin蛋白表达。结果石见穿多糖抑制细胞迁移、侵袭(P<0.01),降低β-catenin mRNA及Vimentin蛋白表达(P<0.05,P<0.01),促进E-cadherin蛋白表达(P<0.01),且上述作用呈现剂量依赖性。结论石见穿多糖能抑制人OS MG63细胞的迁移和侵袭能力,这种作用可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而阻断EMT过程而引起的。     

黄芪丹参颗粒药对干预肾纤维化Wnt/β-catenin信号通路的实验研究

目的：观察黄芪丹参颗粒药对对肾纤维化信号通路Wnt/β-catenin 的影响,并初步明确其量效关系。方法：40 只雄性SD 大鼠,随机分为5 组,即正常组,模型组,黄芪丹参颗粒药对（1:1）低剂量治疗组,黄芪丹参颗粒药对（1:1）中剂量治疗组,黄芪丹参颗粒药对高剂量（1:1）治疗组。除正常组外,其余大鼠均建立单侧输尿管梗阻（UUO）模型。各组给予相应药物治疗,收集尿液检测24 h 尿蛋白、琢1-微球蛋白（ɑ1-Microglobulin,ɑ1-MG）的含量,光镜观察肾组织病理;Western Blot 技术检测肾组织Wnt4 和β-catenin蛋白表达。结果：①24 h 尿蛋白和ɑ1- MG 检测结果,与正常组比较,模型组24 h 尿蛋白和ɑ1- MG 均明显升高（P＜0.05）;与模型组比较,各治疗组24 h 尿蛋白和ɑ1-MG 明显降低（P＜0.05）;与颗粒低剂量组比较,颗粒中、高剂量组24h 尿蛋白均明显降低（P＜0.05）,各剂量组之间ɑ1-MG 差异无显著性。②HE 染色结果,各治疗组病理变化较模型组均有明显改善,与颗粒低剂量组比较,颗粒中、高剂量组评分明显减少（P＜0.05）。③肾组织Wnt4 和β-catenin 免疫印迹检测结果,与正常组比较,模型组和各剂量组大鼠肾组织Wnt4 和β-catenin 具有明显有升高趋势,各治疗组均有不同程度下降,尤以颗粒中、高剂量组下降明显。结论：黄芪丹参（1:1）颗粒药对可以保护UUO 大鼠肾小管功能,一定程度改善UUO 大鼠肾脏病理改变,其机制可能与干预Wnt/β-catenin 信号通路有关。黄芪丹参颗粒药对可以干预UUO 大鼠肾组织中Wnt4、β-catenin 的表达,并存在一定的量效关系。     

姜黄素抑制Wnt/β-catenin信号通路诱导乳腺癌细胞凋亡的机制研究

目的研究姜黄素对人乳腺癌细胞株BT549细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法取对数生长期BT549细胞,制成单细胞悬液,计数并接种于96孔培养板,每孔约5 000个细胞,24 h后加浓度分别为0,10,20,40,80μmol/L的姜黄素,培养12,24,48 h后采用MTT实验检测BT549细胞增殖抑制率;分别用0,10,20,40,80μmol/L姜黄素处理细胞,48h后采用TUNEL染色法检测细胞凋亡指数;分别用0,10,20,40,80μmol/L姜黄素处理细胞,48 h后采用Western blot实验检测细胞增殖、凋亡相关蛋白的表达量。结果 MTT结果显示,随培养时间延长,姜黄素0,20,40,60,80μmol/L组BT549细胞增殖抑制率逐渐增高(P均0.05),且同时间点内姜黄素0,20,40,60,80μmol/L组细胞增殖抑制率随剂量增加逐渐增高(P均0.05)。TUNEL染色结果显示,姜黄素0,20,40,60,80μmol/L组BT549细胞凋亡指数随剂量增加逐渐增加(P均0.05)。Western blot实验结果显示,随着姜黄素浓度的增加,总蛋白中β-catenin的表达不受影响(P0.05),而细胞核中β-catenin的表达逐渐减少(P0.05)。结论姜黄素通过Wnt/β-catenin信号传导通路抑制乳腺癌细胞株BT549细胞的增殖和诱导其凋亡,并呈现时间、剂量依赖性。     

Klf4抑制Wnt/β-catenin信号通路调控软骨细胞增殖的研究

目的探讨Klf4基因对大鼠软骨细胞增殖影响及相关机制。方法从出生24 h SD幼鼠的股骨头提取软骨细胞,细胞免疫荧光鉴定Col2a1和Sox9基因的表达。转染慢病毒载体PCDH-GFP-Klf4和辅助质粒PSPAX2及PMD2.0G至293ft细胞中产生慢病毒,48 h后收集病毒上清,用其感染大鼠软骨细胞作为Klf4组,用PCDH-GFP慢病毒感染细胞作为对照组。采用CCK8法检测2组细胞生长增殖变化;采用Western blot方法,分别检测2组细胞中Klf4基因表达、增殖相关基因PCNA和CyclinD1蛋白表达、Wnt/β-catenin信号通路上下游基因表达情况。结果原代培养软骨细胞均强表达Col2a1和Sox9基因。慢病毒PCDH-GFP-Klf4和PCDH-GFP成功感染软骨细胞,Klf4基因在软骨细胞过表达。Klf4组软骨细胞生长明显受到抑制,PCNA和CyclinD1蛋白表达和Wnt/β-catenin信号通路相关基因表达均明显下调。结论过表达Klf4基因可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路相关分子的表达而抑制软骨细胞增殖。     

姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路抑制晶状体上皮细胞增殖的实验研究

[目的]探讨姜黄素通过Wnt/β-catenin信号通路对人晶状体上皮细胞(LECs)增殖的影响及其可能的作用机制,为晶状体后囊膜混浊(PCO)的临床治疗提供新的靶点。[方法]人LECs系SRA 01/04细胞为研究对象,实验分为3组:Wnt3a组,姜黄素组和对照组。Wnt3a组采用脂质体介导转染技术将Wnt3a c DNA表达载体瞬时转染入人SRA 01/04细胞中,构建PCO的细胞模型。姜黄素组在转染Wnt3a c DNA表达载体48 h后加入20μmol/L姜黄素,对照组转染pc DNA3-HA表达载体。采用Western blot技术验证载体在转染细胞中的表达,CKK-8实验检测姜黄素对SRA 01/04细胞增殖能力的影响,采用免疫细胞化学法检测Wnt3a过表达后增生细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的变化;Western blot法检测Wnt3a过表达对Wnt/β-catenin下游信号分子cyclin D1和c-Myc蛋白表达的影响;应用免疫荧光法检测Wnt3a过表达后β-catenin表达的定位变化。[结果]Western blot检测证实,转染pc DNA3-HA表达载体后,SRA 01/04细胞内Wnt3a蛋白表达明显升高。CKK-8检测表明,姜黄素组SRA 01/04细胞的增殖率明显低于Wnt3a组(t=2.782,P=0.049)。姜黄组SRA 01/04细胞PCNA蛋白表达阳性率为23.6%±4.0%,明显低于Wnt3a组的43.4%±5.4%,差异有统计学意义(t=2.951,P=0.018)。转染后48 h,β-catenin蛋白密集分布于Wnt3a组细胞核和细胞质中,而在对照组仅出现于细胞之中,姜黄素组β-catenin蛋白主要分布于细胞核中,少量分布于细胞质中。Western blot检测姜黄素组Wnt/β-catenin信号通路靶蛋白Cyclin D1和c-Myc蛋白表达明显低于Wnt3a组。[结论]在SRA01/04细胞中,姜黄素抑制Wnt3a过表达诱导的Wnt/β-catenin信号通路活化,下游靶蛋白Cyclin D1和c-Myc表达下调,抑制人LECs的增生。     

灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法灵芝三萜(10、50、100μg/mL)作用HepG2人肝癌细胞24、48、72 h,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡。100μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,Western blot检测c-myc、cyclinD1、caspase-3、caspase-8、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达。分别以20μmol/L XAV-939、20 mmol/L LiCl及100μg/mL灵芝三萜联合20 mmol/L LiCl干预HepG2细胞,MTT和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡。结果灵芝三萜(10、50、100μg/mL)抑制HepG2细胞增殖(P<0.05),诱导细胞凋亡(P<0.05)。100μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,细胞caspase-3、caspase-8蛋白表达上调(P<0.05),而c-myc、cyclinD1、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达下调(P<0.05)。20μmol/L XAV-...     

基于Wnt/β-catenin通路研究三物白散对胃癌AGS细胞凋亡的影响

目的 研究三物白散对胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响并基于Wnt/β-catenin通路探讨其机制。方法 SPF级雄性SD大鼠28只,随机分为对照组及三物白散高、中、低剂量组,每组7只。三物白散高、中、低剂量组分别按0.125、0.0625、0.03125g·kg^-1·d^-1剂量灌胃,对照组以等剂量生理盐水灌胃。每日灌胃1次,连续7d。末次给药后45min经腹主动脉取含药血清。CCK-8法检测三物白散含药血清对胃癌AGS细胞活性的影响;流式细胞术检测细胞凋亡;实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测细胞Wnt1、β-catenin、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3 mRNA的表达;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测细胞Wnt1、β-catenin、Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果 与对照组相比,5%、10%、15%、20%高浓度组含药血清可呈浓度—时间依赖性抑制AGS细胞活性。细胞凋亡检测结果显示高浓度组AGS细胞凋亡率显著高于对照组(P<0....     

中药复方调控Wnt/β-catenin信号通路防治骨质疏松症研究进展

骨质疏松症,是一种骨强度与骨密度降低以及骨脆性增加的全身代谢性骨病。成人的骨质由成骨细胞的骨形成和破骨细胞的骨吸收共同维持,当骨吸收超过骨形成时,则易形成骨质疏松症。Wnt/β-catenin信号通路与成骨细胞增殖、分化和骨形成有关,在调节骨质方面至关重要。近年来,Wnt/β-catenin信号通路调节骨质疏松症的作用机理逐步明确,基于Wnt/β-catenin信号通路的中药复方也取得较好疗效。研究发现,中药复方通过调控Wnt/β-catenin信号通路发挥防治骨质疏松症的作用。因此,从Wnt/β-catenin信号通路入手,探讨中药复方防治骨质疏松症的作用机制,为临床防治骨质疏松提供新思路。     

黄芪甲苷通过Wnt/β-catenin途径影响HepG-2细胞的增殖和凋亡

目的:分析黄芪甲苷(Astragaloside IV,AS-IV)对HepG2细胞作用后产生的效应及其具体机制。方法:使用不同浓度AS-IV(25、50、100 nmoL/L)干预HepG2细胞,采用Trans-well法、细胞划痕实验和免疫荧光法分析HepG2细胞系的侵袭和迁移情况。Westeblot检测Caspase-3、Caspase-9、VEGF、MMP-14、E-cadherin、N-cadherin、Wnt、β-catenin和TCF-4等蛋白的表达的变化。结果:CCK-8法检测显示AS-IV刺激HepG2细胞时可抑制HepG2细胞的生长,促进细胞凋亡。细胞划痕实验以及Trans-well实验显示AS-IV能明显抑制HepG2细胞的侵袭和迁移。Western blotting检测显示AS-IV干预HepG2细胞后,VEGF和MMP-14蛋白水平、N-cadherin和vimentin的表达量降低(P<0.05),Caspase-3和Caspase-9表达量上升。同时,AS-IV还可抑制HepG2细胞的Wnt、β-catenin和TCF-4蛋白的表达。结论:黄芪甲苷通过调节Wnt/β-catenin途径影响HepG-2细胞的生物学过程。     

当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎软骨细胞氧化应激损伤与炎症反应

目的:研究当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路对骨关节炎软骨细胞的氧化应激损伤及炎症反应的影响。方法:在大鼠膝关节中注射碘乙酸建立关节炎模型,3 mg/只,对照组注射等量的0.9%氯化钠溶液; 将关节炎模型大鼠分为模型组和当归多糖组。给药3周后,采用酶联免疫吸附法测定SD大鼠血清中炎症因子水平、氧化应激参数水平[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)]、膝关节软骨中基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA表达水平和c-Fos蛋白表达水平。采用酶标仪测定当归多糖处理48 h后的IL-1β,损伤SW1353细胞8 h后的细胞活性。通过PCR法检测MMP-13 mRNA、β-catenin mRNA、ADAMTS4 mRNA的表达水平。通过Western blot法测定β-catenin、MMP-13蛋白表达水平。结果:当归多糖治疗后,IL-1β、TNF-α、MDA、SOD、CAT水平及MMP-13 mRNA和c-Fos蛋白均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。在IL-1β刺激的SW1353损伤模型中,经过10、50、100 μg/ml当归多糖处理后,SW1353细胞活性较模型组增加,组间比较差异有统计学意义(均P<0.05); Wnt 4a、GSK-3β、β-catenin、ADAMTS4 mRNA和MMP-13 mRNA蛋白表达均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。结论:当归多糖通过Wnt/β-catenin信号通路抑制骨关节炎软骨细胞的氧化应激损伤与炎症反应。     

臭牡丹总黄酮介导Wnt/β-catenin信号转导诱导人肝癌细胞HepG2的凋亡

目的:探讨臭牡丹总黄酮诱导肝癌细胞凋亡的作用及机制。方法:体外培养HepG2细胞,流式细胞术检测臭牡丹总黄酮对细胞凋亡的影响;RT-PCR法检测臭牡丹总黄酮作用于HepG2细胞48 h后对β-catenin、Tcf-4、CD44v6 mRNA表达的影响。结果:流式细胞术结果显示:随着臭牡丹总黄酮剂量的增加,细胞凋亡比例亦相应增加。PT-PCR结果显示不同剂量臭牡丹总黄酮作用下β-catenin、Tcf-4、CD44v6 mRNA的表达均降低,与对照组相比具有统计学意义。结论:臭牡丹总黄酮诱导HepG2凋亡,能下调β-catenin、Tcf-4、CD44v6基因的表达,其作用机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路并抑制其关键基因有关。     

Wnt/β-catenin信号通路在治疗骨质疏松中的研究进展

 目的 对Wnt/β-catenin信号通路促进骨形成和调节骨吸收的研究成果以及Wnt信号拮抗物对骨量的影响作用进行综述,并探讨Wnt信号分子作为靶点治疗骨质疏松的应用前景。方法 通过对近年来国外相关文献进行归纳并进行分析和评述。结果 Wnt/β-catenin信号通路在维持骨稳态中具有重要调节作用,Wnt信号水平的高低决定其对骨形成促进或抑制。结论 经典的Wnt信号小分子抑制剂和中和抗体在用于治疗骨质疏松药物的研制和开发中具有广泛应用前景。     

中医药调控Wnt/β-catenin信号通路防治肝纤维化的研究进展

肝纤维化是多种肝脏慢性疾病的共同病理过程，且被认为是肝硬化、肝癌的必经阶段，因此，抗肝纤维化治疗对患者的预后具有重要的现实意义。Wnt/β-catenin信号通路是调控许多肝脏疾病的关键信号通路之一，可通过调控炎症反应、细胞凋亡、氧化应激干预肝纤维化的进程，而靶向干预该通路，如DDK1、Niclosamide、ICG-001、PRI-724、PSH等拮抗剂的长期有效性和负面作用尚未证实。大量研究表明中医药在抗肝纤维化的地位日益受到关注。基于肝纤维化虚实夹杂的中医病因病机，中药以补虚、解毒、化瘀和标本兼治等治法多靶点、多层次调节Wnt/β-catenin信号通路发挥肝保护作用。本文就Wnt/β-catenin通路与肝纤维化的关系阐述中医药延缓肝纤维化的潜在作用，以期为防治肝纤维化提供策略。     

黄芪丹参颗粒药对干预肾纤维化Wnt/β-catenin信号通路的实验研究

目的：观察黄芪丹参颗粒药对对肾纤维化信号通路Wnt/β-catenin的影响,并初步明确其量效关系。方法：40只雄性SD大鼠,随机分为5组,即正常组,模型组,黄芪丹参颗粒药对（1：1）低剂量治疗组,黄芪丹参颗粒药对（1：1）中剂量治疗组,黄芪丹参颗粒药对高剂量（1：1）治疗组。除正常组外,其余大鼠均建立单侧输尿管梗阻（UUO）模型。各组给予相应药物治疗,收集尿液检测24 h尿蛋白、α1-微球蛋白（α1-Microglobulin ,α1-MG）的含量,光镜观察肾组织病理;Western Blot技术检测肾组织Wnt4和β-catenin蛋白表达。结果：淤24 h尿蛋白和α1- MG检测结果,与正常组比较,模型组24 h尿蛋白和α1- MG均明显升高（〈0.05）;与模型组比较,各治疗组24 h尿蛋白和α1-MG明显降低（〈0.05）;与颗粒低剂量组比较,颗粒中、高剂量组24h尿蛋白均明显降低（〈0.05）,各剂量组之间α1-MG差异无显著性。于HE染色结果,各治疗组病理变化较模型组均有明显改善,与颗粒低剂量组比较,颗粒中、高剂量组评分明显减少（〈0.05）。盂肾组织Wnt4和β-catenin免疫印迹检测结果,与正常组比较,模型组和各剂量组大鼠肾组织Wnt4和β-catenin具有明显有升高趋势,各治疗组均有不同程度下降,尤以颗粒中、高剂量组下降明显。结论：黄芪丹参（1：1）颗粒药对可以保护UUO大鼠肾小管功能,一定程度改善UUO大鼠肾脏病理改变,其机制可能与干预Wnt/β-catenin信号通路有关。黄芪丹参颗粒药对可以干预UUO大鼠肾组织中Wnt4、β-catenin的表达,并存在一定的量效关系。     

Wnt/β-catenin信号通路在骨质疏松症中的作用研究进展

本文就Wnt/β-catenin信号通路在骨质疏松症中的作用研究进展综述如下，以期对于骨质疏松症的临床防治、深入科研有所裨益。     

Wnt/β-catenin信号通路在骨肉瘤防治中的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路是调节细胞发育和生长的一个关键途径[1]。在正常情况下对胚胎发育和器官的形成和功能起着重要的调节作用,此通路的失调参与人类多种肿瘤的发病过程[2]。骨肉瘤是儿童和青少年长骨干骺端常见的原发性恶性骨肿瘤,以产生骨样基质为病理特征,具有高度异质性、高复发率、多药耐药性、早期易肺转移等特点[3]。以外科手术联合甲氨蝶呤、顺铂等新辅助化疗的应用,使骨肉瘤患者的5年生存率提高到75%左右[4],但却不能有效地降低总病死率和改善整体预后,出现转移或复发的患者5年生存率<20%[5]。研究表明Wnt/β-catenin信号通路参与骨肉瘤细胞的生长、侵袭和转移,并有效诱导骨肉瘤的耐药和再生,是介导骨肉瘤发生和发展的一个重要因素[6]。     

中药调节Wnt/β-catenin信号通路防治骨质疏松症研究进展

骨质疏松症(Osteoporosis,OP)是一种常见的全身性代谢性骨疾病,随着中国人口老龄化的加剧,其患病率呈上升趋势。Wnt/β-catenin信号通路对维持机体骨重建的动态平衡发挥着重要作用,目前被广泛用于OP的研究。大量分子生物学实验表明,中药单体及中药复方可通过调节Wnt/β-catenin信号通路,影响成骨细胞和骨髓间充质干细胞的增殖、分化及活性等,增加骨形成,从而发挥治疗OP的作用。综述近年来中药单体与中药复方经Wnt/β-catenin信号通路治疗OP的相关研究成果,以期为中药研发及临床防治提供思路。     

Wnt/β-catenin信号通路在类风湿关节炎中的表达

类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是以滑膜炎为主要病理表现的系统性疾病,目前已有研究证实,Wnt/β-catenin信号通路是类风湿关节炎发生发展的关键环节。一方面Wnt/β-catenin信号通路活化促进成骨细胞增殖分化,促进骨组织修复;另一方面,成纤维样滑膜细胞中Wnt/β-caten in通路上调,促进成纤维样滑膜细胞增殖,加重软组织增生,破坏骨关节。因此如何通过调节Wnt/β-catenin通路抑制成纤维样滑膜细胞增殖的同时促进骨修复对RA治疗具有重要研究意义。