赤芝菌丝体活性多糖的分离、纯化及结构研究

赤芝(Ganoderma lucidum)固体发酵菌丝体经水堤、乙醇沉淀得总菌丝体多糖,药理实验表明,总多糖具有明显的增强免疫和抗肿瘤活性。总多糖经DEAE-Sephadex柱层析分离、脱色、脱盐得多糖 GLMB_0。总多糖经硼酸型DEAE-Cellulose柱层析分离、脱色、脱盐得多糖GLMB_1。Sephadex柱层析法和旋光法测定了两多糖的纯度。GLMB_0为肽杂多糖,GLMB_1为杂多糖。笔者通过IR、完全酸水解、GC、Smith降解、酶解、β-消除反应、CNMR对GLMB_1、GLMB_0进行了结构研究。     

五味子多糖的分离、纯化及结构表征

[目的]通过对五味子多糖的分离纯化、结构表征,以期为五味子的进一步开发利用提供科学研究数据.[方法]采用水提醇沉法得五味子粗多糖,通过分级醇沉及葡聚糖凝胶G-150进一步分离纯化得五味子多糖组分.采用苯酚-硫酸法测定多糖的含量,高效分子排阻色谱联用多角度激光光散射检测器和示差检测器(HPSEC-MALLS-RID)的方...     

灵芝免疫活性多糖的化学研究

从灵芝中分离得到免疫活性多糖BN₃B,进一步分离纯化得到4个多糖均一体,对其中主要成分BN₃B₁及BN₃B₃进行化学研究证明,BN₃B₁为含β-(1→6)及(1→3)甙键的葡聚糖,BN₃B₃为含β-(1→6)及(1→3)甙键的阿拉伯半乳聚糖。     

白及多糖BSP-1的分离纯化、结构表征及抗肿瘤活性研究

目的从白及Bletillastriata块茎中分离纯化多糖BSP-1,并对其结构和抗肿瘤活性进行研究。方法将提取的粗多糖经DEAE-cellulose柱色谱分离得到3个多糖组分BP-1、BP-2、BP-3。BP-1通过SephadexG-200柱色谱纯化后得到组分BSP-1。采用HPGPC、IR、GC、GC-MS、甲基化及~1H-、~(13)C-NMR等方法对该多糖的结构进行表征,并考察BSP-1抗肿瘤活性。结果测得BSP-1相对分子质量为4.72×10~5,由葡萄糖和甘露糖组成。主链由β-1,4甘露糖,侧链由末端连接的葡萄糖组成,其物质的量比为8∶1。体外肿瘤细胞活性实验表明,BSP-1能抑制肝癌Hep G2细胞的增殖。BSP-1体内可显著抑制裸鼠的瘤质量,抑制率为66.42%。结论 BSP-1的结构确定为进一步阐明和开发白及中多糖类成分提供了一定的参考。     

不同方法提取海螵蛸多糖及结构表征

目的 采用水提法和碱提法提取江苏连云港产海螵蛸中多糖.方法 海螵蛸粉末先以乙醇浸提、盐酸脱钙后,残渣以热水浸提得到水提多糖,水提后残渣以碱提法即氢氧化钠溶液再次提取获得海螵蛸碱提多糖.结果 确定了水提多糖较佳工艺条件为提取温度80℃,液固比4∶1,提取时间6h,多糖量约为1‰.碱提多糖的较佳工艺条件为:提取温度80℃,氢氧化钠溶液质量浓度1.5 mol/L,提取时间6h,多糖提取率为7.008‰.以IR数据对多糖结构进行了表征.海螵蛸水提粗多糖和碱提粗多糖均具有多糖红外光谱特征峰.结论 以水提法和碱提法从传统中药海螵蛸中获得了多糖,确定了较佳工艺条件,对传统中药的深入研究有一定的应用价值.     

粗茎秦艽多糖GCP-1的分离纯化、结构表征及抗炎活性评价

目的 从粗茎秦艽Gentiana crassicaulis中分离纯化多糖,初步分析其结构特征并研究其体外抗炎活性.方法 采用热水浸提粗茎秦艽粗多糖(Gentiana crassicaulis polysaccharide,GCP),再经Cellulose DE-52纤维素离子交换柱、SephadexG-100柱进行分离...     

枳壳多糖CALB-1的提取、分离纯化及免疫调节活性研究

目的从枳壳粗多糖中分离纯化得到精制枳壳多糖(CALB-1),并对其结构和免疫调节活性进行研究。方法采用热水提取法提取获得枳壳粗多糖(CALB),通过阴阳离子交换树脂、离子交换琼脂糖凝胶等方法对CALB进行分离纯化,得到CALB-1。采用高效液相色谱法(HPLC)测定CALB-1的相对分子质量。综合运用红外(IR)光谱、高碘酸氧化、Smith氧化降解、甲基化、扫描式电子显微镜(SEM)和原子力显微镜(AFM)等方法考察CALB-1的结构及分子形态。采用体外脾细胞增殖实验及在体对小鼠单核细胞吞噬作用的影响实验测定CALB-1的免疫调节活性。结果经HPLC测定CALB-1为均一多糖,其相对分子质量为3.28×107。综合化学手段和IR光谱分析得到CALB-1为多支结构的酸性多糖,其主链主要由阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)和半乳糖(Gal)构成,且主要以1→、1→4键型存在。分子形态考察结果显示CALB-1为非晶态固体。CALB-1具有促进小鼠脾细胞增殖的作用,并可提高免疫低下模型小鼠的廓清指数(K)值和吞噬指数(α)。结论 CALB-1为多支结构的均一相对分子质量的酸性多糖,且具有较好的免疫调节作用,为枳壳多糖进一步的深入研究奠定了理论基础。     

连钱草多糖的结构表征及抗补体活性研究

目的分离纯化具有抗补体活性的连钱草均一多糖并表征其结构。方法水提醇沉得连钱草粗多糖,DEAE-52、SephadexG-100柱色谱抗补体活性导向分离得到均一多糖,采用HPGPC、IR、GC、甲基化及核磁等方法对均一多糖进行结构表征,并测定均一多糖的抗补体活性。结果分离所得连钱草均一多糖GLP-1和GLP-2,相对分子质量分别为5370和20 040,均主要由阿拉伯糖和半乳糖组成的杂多糖,阿拉伯糖和半乳糖的物质的量比分别为1∶6.3和1∶4.9,GLP-1和GLP-2均具有较强的抗补体活性。结论连钱草均一多糖的结构表征为进一步阐明其抗补体活性的药效物质基础提供了研究基础,同时也为筛选天然补体抑制剂提供了基础。     

灵芝菌发酵培养基的优化及灵芝胞外多糖的分离纯化

用正交法研究了不同条件对灵芝菌生长影响,从中选出了灵芝 菌液体深层发酵的优化 培养基：葡萄糖 3.6%,蛋白胨 0.4%,pH 6.0,酵母膏 0.2%,KH2PO40.1%,MgSO 4· 7H2O 0.05%,Vit B1 0.005%,每升发酵液产干菌丝体 15.6 g,粗多糖 0.72 g。 经葡 聚糖凝胶层析对灵芝胞外多糖进行了分离纯化,共有 5 个组分,并用红外光谱、紫外光谱 ,气相色谱等手段进一步分析了灵芝胞外多糖的组成,结果表明灵芝胞外多糖系由甘露糖、 果糖、葡萄糖通过糖 β-D 糖苷键构成。     

灵芝多糖肽GL-PPSQ_2结构研究及其应用

目的从灵芝Ganoderma水提物中分离纯化活性多糖肽,对其进行结构研究,并作为对照品用于灵芝产品中多糖肽含量测定。方法采用热水提取、膜超滤技术和凝胶过滤色谱等方法进行分离纯化,根据理化测定及波谱数据分析鉴定化合物结构。检测多糖肽含量采用高效液相色谱仪附紫外检测器,以水作为流动相,体积流量为1mL/min。结果灵芝多糖肽相对分子质量为5.0×10~4,质量分数97%以上,得率为0.49%,多糖含量达87.17%,单糖组成以葡萄糖为主和少量甘露糖组成的多糖,其物质的量比为31.85∶1.00,含有16种氨基酸,氨基酸总量为5.04%。依据甲基化、一维和二维核磁谱图,GL-PPSQ2结构重复单元为主链由→3)-β-D-Glcp-(1→构成,每4个→3)-β-D-Glcp-(1→在O-6位连接一个长支链,该支链由α-D-Glcp-(1→、→4,6)-β-D-Glcp-(1→、→4)-β-D-Glcp-(1→和→6)-β-D-Glcp-(1→依次相连构成。结论通过膜技术和凝胶色谱分离纯化得到活性多糖肽,该方法简便、快速,为灵芝提取物及其产品中多糖肽质量控制提供了科学依据。     

灵芝多糖肽中单糖的组成

目的从灵芝Ganoderma lucidum子实体中分离得到的GL-PPT2、GL-PPT3和GL-PPT43种多糖肽,对其单糖组成和摩尔比进行比较。方法多糖肽经三氟乙酸水解后,用1-苯基-3-甲基-5-吡啶啉酮(PMP)衍生化,在高效液相245nm紫外检测,使用KH2PO4(pH5.0)-乙腈(83.5∶16.5)等度洗脱,9种单糖的色谱峰分离清晰,大多呈基线分离。结果经实验确定GL-PPT2、GL-PPT3和GL-PPT4均由甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖和葡萄糖醛酸等9种单糖组成。结论灵芝子实体活性成分多糖肽中的核糖系属首次报道。     

灵芝一共生真菌的脑苷类成分研究

目的：为了从灵芝Ganoderma lucidum中寻找新的天然抗肿瘤活性产物，对其次生代谢产物进行了较系统的研究。方法：利用柱层析和制备RP－HPLC从灵芝一共生真菌（Calcarisporium arbuscula)的发酵菌丝体中分得4个脑苷类化合物。结果：通过光谱分析鉴定，分别为：（4E，8E，3‘E,2S,3R,2‘R)-2‘-羟基－3‘-十六烯酰基－1－O－D－吡喃葡萄糖基－9－甲基－4，8－二氢鞘氨二烯醇（I),(4E,8E,2S,3R,2‘R)-2‘-羟基十六烷酰基－1－O－β－D－吡喃葡萄糖基－9－甲基－4，8－二氢鞘氨二烯醇（Ⅱ），（4E,8E,3‘E,2S,3R,2‘R)-2‘-羟基－3‘-十八烯酰基－1－O－D－吡喃葡萄糖基－9－甲基－4，8－二氢鞘氨二烯醇（Ⅲ，2－（2－羟基二十四烷酰氨基）－1，3，4－十八烷三醇（Ⅳ）。结论：I－Ⅳ均首次从齿梗孢属真菌中分离得到。     

基于UPLC-QTOF-MS和多元统计分析的赤芝道地性研究

目的 研究不同产地、不同栽培方式对赤芝中三萜类成分的影响,为赤芝的道地性研究提供依据。方法 采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱法（UPLC-QTOF-MS）对120批赤芝样品进行化学成分分析。将赤芝样品按照浙产/非浙产、浙产段木/非浙产段木、浙产段木/浙产野生、不同发育时期进行模式分类,应用正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）对赤芝样品进行多元统计分析,用变量重要性投影（VIP）值、t检验筛选出组间差异显著的指标性成分。结果 从供试样品中鉴定出13种响应高、分离度好的灵芝酸类成分。筛选发现,浙产赤芝中灵芝酸D、灵芝烯酸D显著高于非浙产赤芝,可作为浙产赤芝的标志性成分;浙产段木赤芝中灵芝酸D、灵芝酸B、灵芝酸C₁、灵芝酸G的含量显著高于非浙产段木赤芝;段木赤芝中灵芝酸A等6个成分均显著高于野生赤芝;随着赤芝子实体逐渐成熟（现蕾期→开伞期→成熟期→采摘期）,多数灵芝酸含量呈现下降趋势,但部分样品采摘期（喷孢后）灵芝酸含量较成熟期（喷孢前）高,值得进一步研究。结论 浙产与非浙产赤芝成分差异较明显,且浙产段木赤芝与非浙产段木赤芝成分也存在明显差异,可能与生态环境、种植方式有关。     

不同产地赤芝药材的质量分析

目的 对不同产地批次赤芝Ganoderma lucidum进行全面的质量评价,为灵芝药材质量标准的完善及优质赤芝原料药的筛选提供依据。方法 收集15批次各GAP基地的灵芝药材,参照《中国药典》2020年版方法及行业通用方法,考察其水分、灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物,分别采用比色法、柱前衍生高效液相色谱法（PMP-HPLC）、高效凝胶渗透色谱法（HPGPC）测定多糖含量并进行比较;采用比色法测定三萜甾醇含量,HPLC法进行灵芝酸A一测多评;同时对15批赤芝的HPLC指纹图谱进行差异比较。结果 15批赤芝药材均符合《中国药典》2020年版的质量标准要求,指纹图谱聚类分析和主成分分析（principal component analysis,PCA）结果表明山东聊城产赤芝能明显区别于其他批次样品。结论 15批赤芝药材均符合《中国药典》质量标准,说明国内赤芝GAP基地种植质量良好;同时山东聊城产赤芝能显著区别于其他产地批次赤芝样品,主要体现在三萜甾醇等有效成分的含量更高。     

镉胁迫对灵芝菌丝体生长及代谢产物积累的影响

目的研究镉(Cd)胁迫对灵芝菌丝生长及代谢产物积累的影响,探讨Cd胁迫影响生长和代谢产物积累的机制,为灵芝生产栽培过程中控制Cd元素提供依据。方法在Cd质量浓度分别为0、0.5、1.0、4.0、10.0、40.0 mg/L下培养灵芝菌丝体,对其生物量积累、胞内活性氧(ROS)水平、膜氧化损伤、抗氧化酶活性及ROS调控相关酶表达量进行分析。结果 Cd质量浓度达到4.0 mg/L时,抑制菌丝生长;胞内ROS水平、H2O2及丙二醛(MDA)含量显著上升,分别提升了76%、46%、325%,且随着Cd质量浓度的增加呈上升趋势;NADPH氧化酶基因(NOXA)、超氧化物歧化酶基因(SOD1,SOD4)、过氧化氢酶基因(CAT)表达量显著上调。Cd质量浓度达到10.0mg/L时抑制效果显著,菌落生长直径及发酵菌丝干质量抑制率分别为26.15%、32.78%,灵芝总三萜抑制率为33.7%,对总蛋白合成的抑制率为30.3%,对多糖抑制不显著。Cd质量浓度达到40.0 mg/L时,抗坏血酸过氧化物酶基因(APX)及谷胱甘肽过氧化物酶基因(GPX)表达量显著上调。随着Cd质量浓度的增加,SOD、CAT、APX、GPX酶活性都呈先上升后下降趋势,Cd质量浓度达到1.0mg/L时,GPX酶活性下降,APX酶活性上升显著。外源添加diphenyleneiodonium chloride(DPI)、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)、维生素C(VC)对Cd胁迫灵芝胞内清除ROS水平及降低MDA含量作用显著。结论 Cd胁迫造成灵芝菌丝产量及代谢物积累下降,可能是由于Cd离子抑制GPX酶活性下降,造成H2O2积累,引起ROS水平上升及膜氧化损伤,抑制菌丝生长及代谢产物积累,同时调控NOXA基因表达量上调,造成抗氧化酶活性及表达量上升来提高机体对活性氧的清除。因此在灵芝的生产过程中要控制Cd元素质量浓度小于1 mg/L。     

光质对灵芝生长及抗氧化酶系统的影响

目的 以飞船搭载的灵芝Ganoderma lucidum菌株为材料,研究不同光质对灵芝生长形态及抗氧化酶活性的效应,找出适于灵芝生长的最佳光质,为光质选择提供理论依据.方法 栽培灵芝时进行不同光质处理,在灵芝不同生长发育时期观测其形态变化,并测定抗氧化酶体系中主要酶活性.结果 不同光质处理的弹孢前期灵芝菌盖厚度与菌盖表面环纹数与对照差异显著.不同光质处理对灵芝子实体产量和灵芝孢子粉产量均有影响.红色、蓝色光质处理提高了过氧化物酶( POD)、过氧化氢酶(CAT)活性.蓝色光质处理提高了可溶性蛋白量,并且使丙二醛(MDA)在生长末期保持相对较低水平,从而延缓了灵芝子实体衰老.绿色、黄色光质抑制了抗氧化酶活性,导致灵芝子实体可溶性蛋白量下降及MDA量上升,加速了灵芝子实体的衰老过程.结论 蓝色光质可以使灵芝子实体维持较高的抗氧化酶水平,促进可溶性蛋白合成,从而增强灵芝代谢,延缓灵芝衰老.     

赤芝FPS基因酵母单杂交文库构建及其上游转录因子的筛选

目的筛选赤芝三萜合成途径中法尼基焦磷酸合酶(farnesyl diphosphate synthase,FPS)基因的上游调控转录因子。方法首先克隆了FPS基因启动子,并连接至pAbAi质粒构建诱饵载体pAbAi-FPS。将pAbAi-FPS转化Y1H酵母感受态细胞构建诱饵菌。采用SMART技术构建赤芝酵母单杂交cDNA文库,再将纯化的双链cDNA、pGADT7-Rec共转化诱饵菌株,筛选FPS上游的转录调控因子。结果构建了含pAbAi-FPS的诱饵载体并筛选出诱饵菌株,构建了cDNA文库并转化诱饵菌株,筛选出阳性克隆37个,得到作用FPS基因上游的转录调控因子18个,包括转录因子3个、核糖体蛋白5个及其他家族蛋白10个。结论筛选出转录因子GlSNF2、GlMHR和GlZn2Cys6为调控FPS表达的候选基因,为深入研究FPS基因的表达调控机制奠定了研究基础。     

灵芝孢子粉多糖研究进展

灵芝Ganoderma lucidum为多孔菌科灵芝属药食两用真菌,是我国具较高药用价值的传统珍贵药材。灵芝孢子粉多糖是灵芝中的主要活性成分,现已证实其具有多种生物活性,在医药领域中有广阔的应用前景。对近15年来国内外灵芝孢子粉多糖结构、提取工艺和生物活性方面的研究进展进行综述,为其保健功能与药用价值的开发提供重要参考。     

光质对灵芝菌丝体生长及三萜酸量影响的研究

目的 研究光质对灵芝菌丝体生长及三萜酸量和组分的影响。方法 采用新型LED冷光源设置不同光质处理,动态观测灵芝菌丝体生长、总三萜酸量及三萜酸组分的变化情况。结果 不同光质处理灵芝菌丝体形态、生长速度、生物量和总三萜酸量及单体三萜酸在组分、相对量及各组分间的比例都有所变化。蓝光处理菌丝体在整个培养期始终保持稳定增长;红光处理菌丝体前期生长速度及生物量最大,但是中后期生长速度显著下降,生物量增加缓慢,次于蓝光;绿光处理菌丝体前中期生长速度及生物量均最小,然而培养后期增加明显,干物质迅速积累。灵芝三萜酸在菌丝体培养第7天时已大量产生,随培养时间延长种类增多,组分量降低。绿光和蓝光处理对提高灵芝菌丝体三萜酸种类和量均有明显优势。结论 光质对灵芝菌丝体生长及三萜酸量和成分均有显著影响,蓝光对促进灵菌丝体生长及三萜酸积累综合优势明显。