远志皂苷对β淀粉样蛋白片段1-40诱导PC12细胞凋亡的抑制作用

目的探讨远志皂苷抑制β淀粉样蛋白片段1-40(Aβ1-40)诱导的PC12细胞凋亡的作用机制。方法采用聚集状的Aβ1-40 25μmol·L-1诱导PC12细胞凋亡,然后将处理后的PC12细胞分为Aβ1-40模型组和远志皂苷50,100和200μmol·L-1组,同时设正常细胞对照组。采用MTT比色法检测细胞存活率;膜联蛋白-Ⅴ和PI双染法检测细胞凋亡率;免疫细胞化学法检测细胞凋亡基因Bcl-2和Bax及细胞色素c(Cyt c)表达阳性的细胞百分率;Western印迹法检测PC12细胞中Cyt c的表达水平。结果与正常对照组比较,Aβ1-40模型组PC12细胞的存活率明显降低(P<0.01),为(31±7)%;Bcl-2阳性表达细胞率降低(P<0.01),为(23.9±1.9)%;Bax和Cyt c阳性表达细胞率升高(P<0.01),分别为(79.0±3.7)%和(49.2±3.6)%,Bcl-2/Bax阳性表达细胞比值为0.30。与模型对照组比较,远志皂苷50,100和200μmol·L-1作用24 h后,细胞存活率分别升高至(51±13)%,(64±7)%和(84±10)%(P<0.01);Bcl-2阳性率升高至(38.7±0.9)%,(53.7±1.6)%和(60.3±0.8)%(P<0.01),Bax阳性率分别降低为(60.8±1.9)%,(41.5±2.2)%和(32.7±1.4)%(P<0.01),Bcl-2/Bax比值亦分别上升为0.64,1.29和1.84;Cyt c阳性率分别降低至(45.4±3.4)%,(30.2±2.2)%和(27.5±1.0)%(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比较,模型组PC12细胞凋亡率和Cyt c蛋白表达水平亦明显升高(P<0.01);远志皂苷50,100和200μmol·L-1作用24h,PC12细胞凋亡率和Cyt c表达水平较模型组均降低(P<0.01)。结论远志皂苷对Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡具有明显的抑制作用,其作用机制可能是抑制Bax和Cyt c表达,增加Bcl-2表达和Bcl-2/Bax比值,从而阻断内源性细胞凋亡通路。     

darbufelone对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡的影响

目的观察环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂dar-bufelone对胃癌SGC-7901细胞生长的影响。方法MTT法测定darbufelone对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;TUNEL法检测细胞凋亡;RT-PCR法分析SGC-7901细胞中5-LOX和COX-2 mRNA的表达;免疫细胞化学法检测胃癌SGC-7901细胞中5-LOX和COX-2蛋白质的表达。结果dar-bufelone以时间剂量依赖的方式抑制SGC-7901细胞增殖;1.5×10-5、1.0×10-5和5×10-6mol.L-1darbufelone作用72 h后,细胞凋亡率分别为(30.3±2.1)%、(23.0±2.0)%和(15.0±1.5)%,均高于对照组(0.6±0.1)%(P<0.01);1.5×10-5、1.0×10-5和5×10-6mol.L-1darbufelone处理胃癌SGC-7901细胞72 h后,5-LOX和COX-2 mRNA及其蛋白质表达均减少(P<0.05)。结论环氧合酶-2/5-脂氧合酶双重抑制剂darbufelone对人胃癌SGC-7901细胞株有抑制增殖、诱导凋亡的作用。     

姜黄素对MPP~+诱导PC12细胞凋亡的影响

目的观察姜黄素对MPP+诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法采用透射电镜,hoechst染色和流式细胞仪(FCM)观察PC12细胞凋亡,间接免疫荧光流式细胞术检测PC12细胞bcl2的表达。结果PC12细胞自然凋亡率为(15±01)%,05mmol·L-1、1mmol·L-1和2mmol·L-1MPP+作用24h后,PC12细胞凋亡率分别为(441±38)%、(549±21)%和(822±26)%;20μmol·L-1和40μmol·L-1姜黄素对PC12细胞作用24h后无明显凋亡诱导作用,但可分别使05mmol·L-1MPP+处理组细胞凋亡率由(441±38)%下降到(341±38)%和(179±15)%(P<001);PC12细胞经20μmol·L-1姜黄素处理24h后,其bcl2表达率由正常对照的(3643±790)%增加到(7673±860)%(P<001)。结论姜黄素可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制之一可能与促进bcl2的表达有关。     

二氨基肉豆蔻酸活化胱天蛋白酶依赖的线粒体途径诱导HL-60细胞凋亡

目的探讨二氨基肉豆蔻酸(D-82)诱导HL-60细胞凋亡的作用及与线粒体途径活化的关系。方法 D-821.5,3和6mg·L-1处理HL-60细胞6h,或D-826mg·L-1处理细胞6,12及24h后,锥虫蓝染色法检测细胞存活率;AO-EB染色分析凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测DNA损伤;罗丹明123染色流式细胞术检测线粒体膜电位变化;比色法测定胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9活性;Western印迹法检测胞浆和线粒体细胞色素c(Cytc)及细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 D-82的浓度和作用时间与HL-60细胞存活率密切相关,相关系数分别为0.938(P<0.01)和0.809(P<0.05)。D-821.5,3和6mg·L-1处理HL-60细胞6h,细胞存活率分别为(81±11)%,(70±9)%和(56±11)%;D-826mg·L-1作用HL-60细胞12和24h,存活率降至(36±7)%和(24±9)%。D-821.5,3和6mg·L-1诱导HL-60细胞出现凋亡形态学改变及DNA阶梯状条带,凋亡率从正常对照组的(2±2)%上升至(18±4)%,(40±11)%和(75±11)%(n=3,P<0.05)。D-823和6mg·L-1组,罗丹明平均荧光强度由正常对照组的24±5降至20±5及12±4(n=3,P<0.05),说明线粒体膜电位降低;D-823和6mg·L-1组胱天蛋白酶3活性分别增加39%和125%,胱天蛋白酶9活性分别增加61%和145%(P<0.05,P<0.01)。与正常对照组比,D-823和6mg·L-1组线粒体Cytc表达分别降低22%和38%(P<0.05,P<0.01),胞浆中Cytc表达分别升高22%和65%(P<0.05);Bax表达分别增加45%和116%(P<0.05,P<0.01),Bcl-2表达分别减少27%和40%(P<0.01)。结论 D-82通过活化胱天蛋白酶依赖的线粒体途径诱导HL-60细胞凋亡。     

吡格列酮对淀粉样β蛋白片段25-35致大脑皮质神经元损伤的保护作用

目的观察吡格列酮(Pio)对淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ25-35)所致培养皮质神经元损伤是否具有保护作用。方法培养7 d的乳大鼠大脑皮质神经元,先加入Pio0.01,0.1,1和10μmol.L-1作用1 h,然后加入Aβ25-3520μmol.L-1作用24 h;或先加入GW9662 10μmol.L-1作用30 min后,加入Pio1μmo.lL-1作用1 h,然后加入Aβ25-35作用24 h。MTT法测定细胞存活率;Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变及细胞凋亡率;Western印迹法检测磷酸化丝裂原激活蛋白激酶的激酶4(MKK4)水平、磷酸化c-Jun氨基端激酶1(JNK1)水平和Bcl-2蛋白表达水平。结果 MTT结果显示,Aβ25-35可使体外培养神经元存活率明显降到(66.8±1.2)%,Pio 0.1,1和10μmol.L-1可明显对抗Aβ25-35诱导的培养神经元存活率下降,分别为(81.2±2.9)%、(87.9±2.2)%和(98.1±1.9)%,且呈明显浓度依赖性;GW9662能部分拮抗Pio的这种抑制作用。Hoechst33258核染色结果显示,正常培养神经元细胞核荧光染色均匀,只见到极少量细胞出现核固缩,凋亡率为(11.8±1.1)%。Aβ25-35作用24 h后,神经元出现核固缩或核碎裂的数目明显增多,凋亡率增加到(64.6±2.3)%,Pio 0.1,1和10μmol.L-1可明显抑制Aβ25-35引起的培养神经元凋亡率增加,凋亡率分别为(58.3±1.2)%、(52.6±1.3)%和(41.5±1.5)%。Western印迹结果显示,与正常对照组相比,Aβ25-35可使神经元Bcl-2蛋白表达水平明显降低,磷酸化MKK4表达及磷酸化JNK1表达水平明显增加,Pio能上调Bcl-2的表达水平,对抗Aβ25-35诱导的磷酸化MKK4和磷酸化JNK1表达水平增加。结论 Pio能够明显抑制Aβ25-35引起体外培养神经元的损伤作用,这种作用可能与激活过氧化物酶体增殖物激活受体γ、上调Bcl-2蛋白表达和抑制MKK4/JNK信号转导通路有关。     

IGF对大鼠平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响

目的　研究胰岛素样生长因子 (IGF)对培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞骨桥蛋白表达的影响。方法　大鼠平滑肌细胞被随机分为对照组 ,IGF I不同浓度 (5、10、2 0、3 0μg·L-1)及时间 (3、2 4、48h)干预组 ,用RT PCR及Western blotting技术结合光密度扫描分析 ,观察IGF I对培养的大鼠胸主动脉平滑肌细胞内骨桥蛋白基因表达的影响。结果　IGF I 2 0 μg·L-1即能刺激平滑肌细胞内骨桥蛋白的表达 ,RT PCR结果分析骨桥蛋白与 β actinmRNA比值 3h干预组 1 0 2 9± 0 0 60 ,2 4h干预组 1 0 3 2± 0 0 71和 48h干预组1 13 2± 0 190分别较对照组提高了 3 9 70 % ,40 44 %和5 4 0 5 % ;Western blotting分析 3h干预组骨桥蛋白量 19 5 1± 16 983 ,2 4h后 167 98± 15 780和 48h后 175 64±9 913分别较对照组提高 5 3 3 0 %、1 15倍和 1 2 5倍。结论　说明IGF I能在基因水平上刺激大鼠平滑肌细胞内骨桥蛋白的表达     

肝细胞生长因子预处理对过氧化氢诱导大鼠神经干细胞凋亡的保护作用

目的研究肝细胞生长因子(HGF)对神经干细胞(NSC)凋亡的保护作用及其作用机制,为HGF用于NSC移植提供实验基础。方法分离培养大鼠NSC。细胞分为正常对照、模型(H2O2100μmo.lL-1)、HGF+H2O2(HGF15,30及60μg.L-1预处理24h后,再加入H2O2100μmol.L-1处理4h),LY294002(PI3K/Akt通路抑制剂)+HGF+H2O2(先加入LY29400220μmol.L-1处理30min,再加入HGF60μg.L-1处理24h,最后再加入100μmo.lL-1H2O2培养4h)组。MTT法检测细胞存活率;TUNEL法检测细胞凋亡率;比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性;Western印迹分析Bcl-2,Bax蛋白表达。结果MTT检测发现,随着HGF浓度的增加,NSC细胞的存活率也增加。与模型组〔(63.5±2.4)%〕比较,HGF15,30及60μg.L-1预处理组细胞存活率明显升高〔(79.1±7.5)%,(83.8±6.1)%和(86.6±8.2)%;n=3,P<0.05〕。TUNEL法检测发现,HGF预处理组凋亡细胞明显减少,模型组的凋亡率为(43.5±6.2)%,HGF预处理组则分别为(34.2±8.6)%,(21.7±3.8)%及(19.4±4.0)%。Caspase-3活性检测表明,与模型组相比,HGF预处理组细胞caspase-3活性降低。Western印迹分析结果显示,与模型组比较,HGF预处理使细胞的Bcl-2蛋白表达升高,但Bax蛋白表达不受影响;HGF的抗凋亡效应可被PI3K/Akt通道阻滞剂LY294002阻断。结论HGF可减轻H2O2所诱导的大鼠NSC凋亡,且呈一定的浓度依赖关系,其作用机制可能与NSC的PI3K/Akt通路激活和Bcl-2表达增强有关。     

孕酮对Aβ_(25-35)诱导的阿尔采末病模型神经元凋亡的影响

目的研究神经甾体孕酮(PROG)对Aβ25-35诱导的AD模型神经元凋亡的影响。方法将原代培养的大鼠皮质神经元分为对照组、模型组及3个浓度PROG处理组。采用四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞存活率,Hoechest 33342核染色法检测神经元凋亡,Western blot检测胞质caspase-3蛋白表达水平。结果与模型组比较,PROG能剂量依赖地对抗Aβ25-35引起的大鼠神经元存活率的降低;且细胞凋亡率及胞质caspase-3表达水平均降低,细胞凋亡率分别为(53.0±4.2)%(P>0.05)、(31.8±2.1)%(P<0.01)和(11.8±1.2)%(P<0.01),caspase-3表达水平分别为(5.80±0.27)(P>0.05)、(4.98±0.48)(P<0.01)和(3.58±0.21)(P<0.01);其中0.1μmol.L-1 PROG处理组的细胞凋亡率及胞质caspase-3表达水平均与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 PROG能通过抑制神经元凋亡对抗Aβ诱导的神经元损伤,产生保护作用。     

长春瑞滨诱导人肺癌Calu-3细胞凋亡及机制

目的　观察长春瑞滨 (VRB)诱导人肺癌Calu 3细胞凋亡时Bcl 2和半胱天冬酶 3的表达有无变化。方法　以不同浓度的VRB( 2 0 ,40和 60 μmol·L-1)作用于体外培养的人肺癌Calu 3细胞 2 4h后 ,TUNEL法和吖啶橙染色法观察肺癌细胞凋亡形态学特征 ;流式细胞仪检测肺癌细胞凋亡率和肺癌细胞Bcl 2蛋白表达水平 ;以半胱天冬酶 3荧光分析检测试剂盒测定肺癌细胞半胱天冬酶 3活性。结果　VRB( 2 0 ,40和60 μmol·L-1)处理细胞 2 4h ,TUNEL法及吖啶橙染色均观察到典型的凋亡细胞形态学特征。流式细胞仪检测VRB处理的肺癌细胞凋亡率分别为 ( 3 .1±0 .6) % ,( 7.8± 1 .2 ) %和( 1 9.6± 4.3 ) % ,较对照组 (凋亡率为 0 )显著增高且呈剂量依赖性 (P <0 .0 1 ) ;Bcl 2蛋白阳性表达细胞率分别为 ( 3 7.6±6.9) % ,( 2 5 .4±6.2 ) %和( 8.4±2 .5 ) % ,较对照组 ( 4 8.3±7.1 ) %显著降低且呈剂量依赖性 (P <0 .0 5 ) ;肺癌细胞半胱天冬酶 3活性分别为 ( 3 3 2± 1 6) ,( 4 1 7± 1 1 )和 ( 63 1± 2 7)μmol·L-1·h-1,较对照组 ( 1 95±1 2 ) μmol·L-1·h-1显著增高且呈剂量依赖性(P <0 .0 1 )。结论　VRB可以诱导肺癌细胞凋亡 ,抑制Bcl 2表达及增强半胱天冬酶 3活性     

牛耳枫生物碱F21对HepG-2细胞的抑制作用及机制

目的探讨牛耳枫生物碱F21对HepG-2增殖的影响及抗肿瘤作用机制。方法 F21 6.25～100 mg.L-1作用24,48和72 h,MTT法检测细胞抑制率并计算IC50。F21 10～100 mg.L-1作用48 h,瑞姬氏染色光学显微镜下观察细胞形态,琼脂糖凝胶电泳观察DNA的梯形条带,流式细胞仪检测细胞凋亡。F2110,30 mg.L-1+Z-VAD-FMK(胱天蛋白酶抑制剂)20μmol·L-1作用48 h,MTT法检测抑制率。结果 F21可明显抑制HepG-2细胞增殖,其于24,48和72 h的IC50值分别为5.3±0.1,1.3±0.1和(0.13±0.1)mg.L-1,且具有量效(F=232.39,P<0.05)和时效(F=65.59,P<0.05)关系。F21 10～30 mg.L-1可使HepG-2细胞体积增大、胞质内细胞核周围出现大量空泡、细胞膜完整、细胞核破碎甚至细胞形态消失。琼脂糖凝胶电泳未观察到典型的凋亡细胞DNA梯形条带。流式细胞术分析显示,与正常对照组比较,F21 10,30和100 mg.L-1处理HepG-2细胞48 h后,晚期凋亡率分别(17.34±0.01)%,(25.45±0.01)%和(43.67±0.03)%(P<0.05)。Z-VAD-FMK可明显抑制星形孢菌素诱导的细胞死亡。F21 10和30 mg.L-1组的增殖抑制率分别为(18.42±0.09)%和(42.77±0.01)%,而F21 10,30 mg.L-1+Z-VAD-FMK组的增殖抑制率分别为(16.46±0.01)%和(44.01±0.01)%,与相应的F21组相比无统计学差异。结论 F21在体外对HepG-2细胞具有显著的抑制作用,其作用机制并非通过激活胱天蛋白酶途径而诱导肿瘤细胞的凋亡。     

β-蜕皮甾酮对高糖诱导的大鼠成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响

目的探讨β-蜕皮甾酮对高糖诱导的大鼠成骨细胞增殖、分化和凋亡的影响及分子机制。方法将大鼠成骨细胞随机分为空白组(5.5 mmol·L-1葡萄糖)、模型组(25 mmol·L-1葡萄糖)、低、中、高剂量实验组(1,5,25μmol·L-1β-蜕皮甾酮+25 mmol·L-1葡萄糖)、p38 MAPK激活组(10μmol·L-1 anisomycin+25μmol·L-1β-蜕皮甾酮+25 mmol·L-1葡萄糖)、阴性对照组(与anisomycin等量的PBS+25μmol·L-1β-蜕皮甾酮+25 mmol·L-1葡萄糖)。细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹法检测Run相关基因2(RunX2)、碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)和磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)蛋白表达。结果空白组、模型组、低、中、高剂量实验组、阴性对照组、p38 MAPK激活组大鼠成骨细胞活性分别为(102.41±5.34)%,(68.57±5.25)%,(75.36±7.06)%,(79.13±8.24)%,(83.20±8.89)%,(83.17±8.93)%,(71.11±6.16)%;细胞凋亡率分别为(4.23±0.56)%,(18.57±1.96)%,(13.08±1.34)%,(10.30±0.95)%,(8.25±1.08)%,(8.36±1.12)%,(16.48±1.56)%;RunX2蛋白表达水平分别为0.81±0.07,0.31±0.04,0.45±0.06,0.55±0.04,0.61±0.08,0.63±0.07,0.41±0.05;ALP蛋白表达水平分别为0.75±0.08,0.38±0.05,0.49±0.07,0.59±0.05,0.65±0.08,0.68±0.07,0.44±0.06;OCN蛋白表达水平分别为0.69±0.05,0.28±0.03,0.34±0.05,0.47±0.04,0.45±0.05,0.46±0.05,0.31±0.04;p-p38 MAPK蛋白表达水平分别为0.22±0.04,0.84±0.09,0.59±0.06,0.41±0.04,0.32±0.04,0.32±0.07,0.74±0.07;模型组与空白组相比,低、中、高剂量实验组与模型组相比,p38 MAPK激活组与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论β-蜕皮甾酮可能通过抑制p38 MAPK信号通路促进大鼠成骨细胞增殖、分化,抑制细胞凋亡。     

柚皮素对Aβ25-35损伤PC12细胞丝裂原激活蛋白激酶/细胞外信号调节蛋白激酶通路的调控效应研究

目的探讨柚皮素对体外培养的Aβ_25-35损伤PC12细胞的保护作用及相关信号通路的调控机制。方法将生长至对数期的PC12细胞接种于培养瓶培养24 h,弃掉旧培养液后,随机分为空白组(培养液)、模型组(150μmol·L-1 Aβ_25-35)、实验组-1(4×10-1 μmol·L-1柚皮素+150μmol·L-1 Aβ_25-35)和实验组-2(10μmol·L-1 U0126+4×10-1 μmol·L-1柚皮素+150μmol·L-1 Aβ_25-35),使每组细胞浓度为20μmol·L-1(除空白组),给药24 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法检测各组细胞B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关蛋白(Bax)、半胱氨酸天冬氨酸-3(Caspase-3)和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-ERK1/2)的蛋白表达量。结果空白组、模型组、实验组-1、实验组-2的细胞总凋亡率分别为(4.13±0.55)%,(34.70±1.66)%,(11.26±0.77)%,(23.52±0.80)%;Bax蛋白表达量分别是0.24±0.06,0.76±0.03,0.21±0.02,0.68±0.04;Bcl-2蛋白表达量0.61±0.04,0.20±0.04,0.55±0.03,0.34±0.02;Caspase-3蛋白表达量0.13±0.03,0.40±0.03,0.21±0.04,0.31±0.02;p-ERK1/2蛋白表达量0.86±0.03,0.48±0.06,0.78±0.04,0.50±0.07。模型组与空白组、实验组与模型组和实验组-2与实验组-1比较,上述指标差异均有统计学意义(P<0.01)。结论柚皮素可通过丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)/细胞外信号调节蛋白激酶(extracellular-signal regulated protein kinase, ERK)信号通路改变Bax、Caspase-3、Bcl-2和p-ERK1/2蛋白表达量,抑制细胞凋亡,对Aβ_25-35损伤的PC12细胞有保护作用。     

1,25(OH)2D3对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞功能的影响

目的观察1,25-双羟维生素D3(1,25(OH)2D3)通过miR-124-3p调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/AKT)通路对肺炎链球菌(SP)感染的肺泡上皮细胞功能的影响,探讨其作用机制。方法体外培养肺泡上皮细胞A549,肺炎链球菌刺激后,随机分为10,20,40,80,160 ng·mL^-11,25(OH)2D3组、Control组、1,25(OH)2D3组、1,25(OH)2D3+anti-miR-NC组、1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p组和1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p+LY294002组。以细胞计数(CCK-8)法试剂盒法、流式细胞仪检测各组细胞增殖、凋亡,以蛋白质印迹(WB)法检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、PI3K/AKT通路的相关蛋白表达,以反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测miR-124-3p的表达。结果10,20,40,80,160 ng·mL^-11,25(OH)2D3处理A549细胞72 h,细胞活力分别为(83.20±1.92)%,(75.73±3.70)%,(64.40±5.10)%,(47.13±3.56)%,(33.93±5.27)%;细胞凋亡率分别为(8.14±0.96)%,(12.26±1.00)%,(14.37±0.88)%,(16.44±0.96)%,(18.12±1.15)%,最终选择160 ng·mL^-11,25(OH)2D3进行后续实验。Control组、1,25(OH)2D3组、1,25(OH)2D3+anti-miR-NC和1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p组的miR-124-3p相对表达量为1.00±0.11,1.69±0.05,1.71±0.13,1.12±0.09,细胞活力分别为(100.00±9.67)%,(34.83±2.44)%,(37.70±1.50)%,(68.80±2.45)%,细胞凋亡率分别为(7.20±0.85)%,(18.59±0.82)%,(19.06±0.60)%,(13.44±2.15)%。与Control组对比,其他组miR-124-3p、细胞活力和细胞凋亡率均有统计学意义,CyclinD1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白表达降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Control组、1,25(OH)2D3组、1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p组和1,25(OH)2D3+anti-miR-124-3p+LY294002的细胞活力分别为(100.00±9.64)%,(40.13±7.13)%,(74.40±6.54)%,(42.93±1.82)%,细胞凋亡率分别为(5.51±1.11)%,(15.90±0.24)%,(9.35±0.86)%,(14.24±0.84)%,与Control组相比,1,25(OH)2D3对肺泡上皮细胞A549的增殖、凋亡及CyclinD1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白表达的作用,以及抑制下游PI3K/AKT通路的作用,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论1,25(OH)2D3通过抑制miR-124-3p负向调控PI3K/AKT通路,促进肺泡上皮细胞的增殖,并诱导凋亡。     

大黄酸对体外大鼠皮质神经元突起长度及微管相关蛋白2mRNA表达的影响

目的研究大黄酸(RH)对大鼠皮质神经元的营养作用,并初步探讨其相关机制。方法体外DMEM/F12+0.4%B27培养新生大鼠皮质神经元,应用神经元特异性烯醇化酶(NSE)和微管相关蛋白2(MAP2)免疫细胞化学染色法鉴定神经元。神经元细胞加入RH 2,4和8μmol·L-1作用72 h,计算神经元平均突起长度;或分别同时加入Trk受体拮抗剂K252a 50 nmol·L-1和PI3K抑制剂LY294002 10μmol·L-1测量神经元平均突起长度。MTT法检测细胞存活,并测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测MAP2 mRNA表达。结果 NSE及MAP2免疫荧光染色结果显示,绝大多数细胞呈阳性反应,所培养的细胞90%以上为神经元。MTT和LDH检测结果表明,与溶媒对照组相比,RH2,4和8μmol·L-1能明显提高神经元存活率(P<0.01);平均突起长度明显增加(P<0.01)。与RH8μmol·L-1组相比,同时加入K252a 50 nmol·L-1或LY294002 10μmol·L-1,平均突起长度明显缩短(P<0.01)。与溶媒对照组相比,RH 2,4和8μmol·L-1组MAP2 mRNA表达量明显增加(P<0.01)。结论 RH对新生大鼠皮质神经元具有神经营养作用,能促进神经元突起的生长和提高神经元的存活率。RH神经营养作用可能部分通过激活Trk受体,继而激活Ras/PI3K/PKB通路而发挥的。     

氯喹联合顺铂对结肠癌HCT116细胞的增殖和凋亡的影响

目的探讨氯喹(CQ)联合顺铂(DDP)对人结肠癌HCT116细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法将HCT116细胞分组为16组:空白对照组(不加药物)、5个浓度(5,10,20,40,80μmol·L^-1)氯喹-1组至氯喹-5组,5个浓度(2,4,8,16,32μmol·L^-1)顺铂-1组至顺铂-5组和5个浓度(20μmol·L^-1氯喹+2,4,8,16,32μmol·L^-1顺铂)联合-1组至联合-5组,各组均培养24 h。用噻唑蓝法检测细胞的存活率,用PI单染流式细胞术检测细胞的凋亡情况,用蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)等凋亡相关蛋白的表达水平(灰度值)。结果空白对照组、氯喹-1组至氯喹-5组、顺铂-1组至顺铂-5组和联合-1组至联合-5组于24 h的细胞存活率分别为(100.00±1.05)%,(99.65±1.98)%,(97.43±0.72)%,(83.88±0.51)%,(69.65±3.33)%,(51.87±0.49)%,(98.55±1.50)%,(92.33±0.50)%,(81.66±4.29)%,(70.41±0.50)%,(48.34±1.50)%,(78.61±4.37)%,(59.01±3.52)%,(37.23±0.57)%,(32.88±3.96)%和(21.09±2.57)%。空白对照组、氯喹-3组、顺铂-3组和联合-3组的细胞凋亡率分别为(1.63%±0.50%),(15.97%±1.40%),(24.83%±2.12%)和(47.23±4.29)%;这4组的Bcl-2相对表达量分别为1.11±0.01,0.92±0.03和0.73±0.08,0.46±0.07;这4组的Bax蛋白相对表达量分别为0.18±0.01,0.27±0.03,0.46±0.09和0.58±0.04。氯喹联合顺铂能显著减少抗凋亡Bcl-2蛋白的表达,并上调促凋亡Bax蛋白的表达。联合组与单用组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05);各给药组与空白对照组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论氯喹可以增强顺铂对HCT116细胞的增殖抑制作用,同时可以增强顺铂诱导结肠癌细胞的凋亡,其机制可能与下调Bcl-2和上调Bax有关联。     

川芎嗪注射液对高眼压大鼠视网膜神经节细胞凋亡的作用机制研究

目的观察川芎嗪注射液通过磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路对高眼压大鼠模型视网膜神经节细胞凋亡的影响。方法用前房注射羟丙基甲基纤维素的方法建立高眼压大鼠模型。按照体重将造模成功大鼠随机分为4组:模型组、川芎嗪组、激动剂组和抑制剂组;另取10只正常大鼠作为正常组,每组10只。造模成功3 d后,川芎嗪组给予盐酸川芎嗪注射7.2 mg·kg-1·d-1,激动剂组给予盐酸川芎嗪注射7.2 mg·kg-1·d-1+胰岛素样生长因子-1 1μg·d-1,抑制剂组给予盐酸川芎嗪注射7.2 mg·kg-1·d-1+Ly294002(PI3K抑制剂) 25μg·d-1,模型组和正常组给予等体积的生理盐水,均腹腔注射,1次/天,共2周。免疫组化法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达(平均光密度值),缺口末端标记法检测视网膜神经节细胞凋亡。结果正常组、模型组、川芎嗪组、激动剂组和抑制剂组的Bcl-2蛋白表达水平分别为58.01±3.78,17.84±1.39,38.80±1.19,39.68±1.71和29.27±1.45;这5组的Bax蛋白表达水平分别为14.73±0.50,56.47±0.91,31.31±0.86,26.60±1.12和44.95±1.73;这5组的细胞凋亡率分别为(5.92±1.18)%,(60.80±1.50)%,(31.70±1.09)%,(28.90±1.90)%和(35.60±1.12)%。上述指标:模型组与正常组比较,差异均有显著统计学意义(均P<0.01);川芎嗪组与模型组比较差异均有显著统计学意义(均P<0.01)。结论川芎嗪注射液能够通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控视网膜的Bcl-2、Bax蛋白表达水平,减少视网膜神经节细胞的凋亡。     

miR-141-3p靶向调控FOXA1对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞增殖凋亡的影响

目的探讨miR-141-3p对肺炎链球菌感染的肺泡上皮细胞增殖及凋亡的影响及其分子机制。方法以AECⅡ细胞为研究对象,分别将miR-NC、miR-141-3p mimics、si-NC、si-FOXA1、miR-141-3p mimics+pcDNA3.1、miR-141-3p mimics+pcDNA3.1-FOXA1转染至AECⅡ细胞,分别记作第1,2,3,4,5,6转染组,同时将且未经处理的细胞作为对照组、肺炎链球菌培养细胞作为模型组。实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-141-3p的表达水平;蛋白质印迹法检测FOXA1的表达量;甲基噻唑基四唑(MTT)与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡。结果对照组、模型组、第1,2,3,4,5,6转染组2 h细胞存活率分别为(100.00±5.18)%,(47.19±3.14)%,(47.28±3.15)%,(86.73±4.63)%,(47.38±3.25)%,(79.93±4.23)%,(86.75±4.51)%,(57.90±3.34)%;细胞凋亡率分别为(8.11±1.12)%,(26.23±1.83)%,(26.23±2.83)%,(10.37±1.51)%,(26.23±2.83)%,(13.36±1.57)%,(10.35±1.57)%,(18.91±1.86)%。对照组与模型组比较,第1转染组与第2转染组比较,第3转染组与第4转染组比较,第5转染组与第6转染组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论miR-141-3p过表达可通过抑制FOXA1表达而抑制肺炎链球菌诱导的肺上皮细胞凋亡,促进细胞增殖。