莫诺苷抑制H2O2诱导的神经细胞凋亡

目的：研究莫诺苷对氧化应急诱导的神经细胞凋亡的影响。方法：培养的人神经母细胞瘤(SH-SY5Y)神经细胞加入莫诺苷(1,10,100 μmol·L^-1)预孵育24 h，加入H₂O₂(500 μmol·L^-1) 作用18 h诱导产生氧化损伤，测定对细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响；用Western blot方法检测caspase-3,caspase- 9，Bcl-2和Bax的表达。结果：莫诺苷(10,100 μmol·L^-1)抑制氧化损伤，与模型组相比，SOD活性分别增加了14%(P<0.01)和11%(P<0.05)；莫诺苷(1,10,100 μmol·L^-1) 与模型组相比，caspase-3的含量分别减少了31%(P<0.01)，103%(P<0.001)和95%(P<0.001)，caspase-9的含量分别减少了71%(P<0.001)，132%(P<0.001)和37%(P<0.05)，Bcl-2分别增加了88%(P<0.01),121%(P<0.001)和60%(P<0.01)，对Bax没有影响。结论：莫诺苷可通过抗氧化作用抑制H₂O₂诱导的神经细胞凋亡，具有神经保护作用。     

芍药苷对H2O2诱导SH-SY5Y神经细胞损伤的保护作用

目的 研究芍药苷对过氧化氢（H₂O₂）诱导人神经瘤母细胞（SH-SY5Y）凋亡的保护作用及其机制。方法 制备H₂O₂诱导的氧化应激损伤模型。相差显微镜观察SH-SY5Y细胞形态的变化;CCK-8法测定细胞存活率;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡;碘化丙啶染色、流式细胞仪检测细胞周期;2′, 7′-二氯荧光素二乙酸盐（DCFH-DA）法检测细胞内活性氧（ROS）;INT显色反应法测定乳酸脱氢酶（LDH）的量;ELISA法检测8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）的量;caspase-3催化特异性底物反应检测caspase-3活性。结果 与对照组相比,200 μmol/L H₂O₂作用SH-SY5Y细胞24 h,使细胞存活力显著下降（P＜0.01）,细胞凋亡率上升（P＜0.01）,增殖指数（PI）降低（P＜0.05）,8-OHdG的量上升（P＜0.01）,LDH释放量和细胞内ROS量增加（P＜0.01）,caspase-3活性增强（P＜0.01）。与H₂O₂损伤组相比,芍药苷终浓度为20～40 μmol/L,可浓度相关地减轻H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞上述指标的变化（P＜0.05）;芍药苷10 μmol/L组细胞PI、LDH和8-OHdG量未有明显改观,但能显著减轻H₂O₂诱导的SH-SY5Y细胞毒性、ROS和caspase-3活性（P＜0.05）。结论 芍药苷对H₂O₂诱导SH-SY5Y细胞损伤具有显著保护作用,该作用可能与其清除ROS、减轻DNA氧化损伤、抑制细胞凋亡的caspase通路激活和调节细胞周期有关。     

芍药苷对过氧化氢诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的 探讨芍药苷对过氧化氢(H2O2)诱导SH-SYSY细胞氧化损伤的保护作用及其可能机制.方法 MTT法测定细胞存活率;Hoechst 33342染色检测细胞凋亡;罗丹明123(Rho123)染色检测线粒体膜电位(MMP)改变.结果 1.5mmol/L H2O2可诱导SH-SY5Y细胞凋亡,导致SH-SY5Y细胞核形态改变和MMP改变.经过31.25和62.5 μg/ml浓度的芍药苷处理后,H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡明显减少,同时减少H2O2引起的MMP改变.结论 芍药苷可抑制过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,减少H2O2引起的MMP改变.     

辣椒素通过提高ROS、Ca2+水平诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡

目的:探讨辣椒素(Cap)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的抑制作用、凋亡率、细胞周期、氧自由基(ROS)、细胞内钙离子(Ca2+)的影响。方法:CCK-8法检测辣椒素(50、100、150、200μmol/L)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的抑制作用;PI染色法检测细胞周期变化;Annexin V-FITC、PI双染检测细胞凋亡;DCFHDA检测ROS水平;Fluo 3-AM检测细胞内Ca2+变化。结果:辣椒素显著抑制SH-SY5Y细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性。辣椒素处理12h后:G2/M期、S期减少,G0/G1期细胞增多(P<0.01),表明辣椒素将SH-SY5Y细胞限定于G0/G1期;早期凋亡率显著增加,为48.35%;辣椒素处理12h后ROS、Ca2+水平显著上调(P<0.01)。结论:辣椒素通过提高细胞内ROS、Ca2+水平,抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖,将其限定于G0/G1期,促进其凋亡,有潜力成为新型抗肿瘤天然药物。     

松果菊苷及异麦角甾苷对神经细胞尼古丁受体表达的影响

目的 研究肉苁蓉活性成分松果菊苷及异麦角甾苷对神经母细胞瘤(SH-SY5Y)细胞神经型尼古丁受体表达的影响及其对抗β淀粉样蛋白(Aβ)神经毒性作用机制,以了解其神经保护作用机制.方法 比色法测定细胞MTT还原率筛选松果菊苷及异麦角甾苷安全浓度范围,并用Aβ<,25-35>处理细胞后,测定MTT还原率,蛋白质印迹法(Western blot)测定尼古丁受体α3、α7蛋白表达的变化.结果 松果菊苷及异麦角甾苷能提高细胞α3及α7神经型尼古丁受体亚单位蛋白质表达水平,呈剂量依赖关系;并能对抗Aβ<,25-35>引起的α3和α7受体亚单位蛋白质水平降低,减弱Aβ<,25-35>引起的细胞损伤.结论 松果菊苷及异麦角甾苷可能通过上调神经型尼古丁受体亚单位蛋白来发挥神经保护作用,在阿尔茨海默氏病的治疗中可能起到一定作用.     

基于ROS/GSK-3β信号通路研究淫羊藿次苷Ⅱ对过氧化氢诱导的SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨淫羊藿次苷Ⅱ对过氧化氢诱导的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞氧化损伤的保护作用。方法:以过氧化氢损伤SH-SY5Y细胞建立氧化损伤模型,以不同浓度淫羊藿次苷Ⅱ(12.5、25和50μmol/L)进行干预。采用MTT法检测细胞活力,采用DCFH-DA检测ROS的水平,TUNEL法和PI染色检测细胞凋亡,免疫印迹实验检测细胞中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)蛋白表达。结果:不同浓度淫羊藿次苷Ⅱ(12.5、25和50μmol/L)能够抑制过氧化氢诱导的细胞死亡并呈浓度依赖性。模型组细胞氧化应激作用和凋亡率较对照组明显增强,给予淫羊藿次苷Ⅱ作用24 h后,能够显著降低活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量,升高超氧化物歧化酶(SOD)活力,抑制过氧化氢诱导的细胞凋亡并上调p-ser9-GSK-3β的蛋白表达,下调p-tyr216-GSK-3β蛋白表达。结论:淫羊藿次苷Ⅱ能够抑制过氧化氢对SH-SY5Y细胞的氧化损伤,其保护作用可能与抑制氧化应激引起的细胞凋亡并调控ROS/GSK-3β信号通路有关。     

刺五加提取物对人神经细胞SH-SY5Y氧糖剥夺再灌注损伤的保护作用研究＊

目的 研究一种刺五加提取物对人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y氧糖剥夺再灌注（Oxygen and Glucose Deprivation/Reperfusion，OGD/R）后损伤的影响。方法 体外培养SH-SY5Y细胞，并分成空白对照组（Natural Control，NC）、氧糖剥夺再灌注模型组（OGD/R）、阳性对照组（80 μM 依达拉奉Edaravone+ OGD/R）、刺五加提取物中剂量组（500 μg·mL^-1+ OGD/R）、刺五加提取物高剂量组（1000 μg·mL^-1+ OGD/R）。其中，NC组给予DMEM/F12培养基培养，模型组给予氧糖剥夺6 h、复氧复糖再培养12 h处理。各组采用MTT法检测细胞活力，流式细胞术检测凋亡水平，多功能酶标仪及荧光显微镜检测活性氧（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛含量（MDA）。结果 与模型组相比，刺五加提取物能显著降低OGD/R引起的SH-SY5Y细胞凋亡；降低活性氧及丙二醛水平，提高超氧化物歧化酶活力，提高胞内ATP水平。结论 刺五加提取物可通过抑制氧化应激、保护线粒体功能和抑制细胞凋亡来减轻SH-SY5Y细胞氧糖剥夺后再灌注损伤的作用。     

正交试验优选莫诺苷的提取工艺

目的：考察莫诺苷的提取工艺。方法：以莫诺苷为指标,采用正交试验优选接骨木根皮中莫诺苷的最佳提取工艺。结果：莫诺苷最佳提取工艺为接骨木药材15倍量的95%乙醇,回流提取2次,每次2.5h。结论：该提取工艺简单、可靠、重复性好,适用于工业生产。     

竹节参总皂苷通过线粒体途径保护H_2O_2诱导的SH-SY5Y神经细胞损伤北大核心CSCD

目的:探讨竹节参总皂苷对SH-SY5Y细胞的保护作用机制。方法:SH-SY5Y细胞随机分为正常对照组,H2O2模型组(600μmol/L H2O2),药物干预组(600μmol/L H2O2+0.1、1、5、20μg/m L竹节参总皂苷)。竹节参总皂苷预处理12 h后,再加入H2O2继续培养12 h。JC-1法检测线粒体膜电位变化,Western blotting检测Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的表达。结果:600μmol/L H2O2与SH-SY5Y共同孵育12 h后,线粒体膜电位下降,Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达下调,预孵育竹节参总皂苷能明显提高细胞线粒体的膜电位,增强Sirt1、PGC-1α、Foxo3a、LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表达。结论:竹节参总皂苷对H2O2致SH-SY5Y神经细胞损伤具有保护作用,其机制可能与调节线粒体功能及自噬相关蛋白有关。     

柔筋止颤片通过抑制ROS通路减轻M PP+诱导S H-SY5Y细胞凋亡实验研究

目的:研究柔筋止颤片保护由MPP⁺诱导的SH-SY5Y 细胞损伤的影响及其机制。方法: MTT检测细胞活性,DHE检测O₂^-,DCFH-DA检测ROS,Western blot检测Caspases蛋白表达水平。结果:SH-SY5Y细胞经MPP⁺(500 μmol/L)处理24 h后细胞活性降低(P<0.05),O₂^-和ROS水平均升高(P<0.05),Clevaed Caspase-3、Clevaed Caspase-8和Clevaed Caspase-9蛋白水平均增高(P<0.05)。柔筋止颤片(25 nmol/L)预处理24 h可以显著维持细胞活性降低(P<0.05),降低O₂^-和ROS的水平(P<0.05),Clevaed Caspase-3、Clevaed Caspase-8和Clevaed Caspase-9蛋白水平下降(P<0.05)。结论: 体外实验证实柔筋止颤片可减少MPP⁺诱导的O₂^-和ROS水平升高以减少线粒体的损伤,并减少Caspases蛋白的活化以抑制细胞凋亡程序的启动,进而保护MPP⁺诱导的SH-SY5Y细胞活性降低,为进一步优化柔筋止颤片的研究提供了实验依据。     

Protective effect of shenqi-wan against H2O2-induced apoptosis in hippocampal neuronal cells

The present study investigated whether Shenqi-wan possesses a protective effect against hydrogen peroxide (H2O2)-induced apoptosis of the hippocampal cell line HiB5. Through morphological and biochemical analyses, it was demonstrated that HiB5 cells treated with H2O2 exhibited several apoptotic features, while cells pre-treated with Shenqi-wan prior to H2O2 exposure showed a decrease in the occurrence of apoptosis. In addition, a patch clamp study revealed that Shenqi-wan inhibited profoundly N-methyl-D-aspartic acid (NMDA) receptor-activated ion current in acutely dissociated hippocampal CA1 neurons. These results suggest that Shenqi-wan may exert its protective effect against H2O2-induced apoptosis via inhibition of NMDA receptors in hippocampal neuronal cells.     

信号转导与H_2O_2诱导的心肌细胞凋亡关系的研究进展

目前,心血管疾病仍是严重威胁人类健康的疾病之一。心肌细胞凋亡在心血管疾病发生和发展过程中起着重要作用。近年研究表明：氧化应激是心肌细胞凋亡的首要刺激因素,药物通过不同的信号通道作用于氧化应激损伤引起的细胞凋亡已有研究。本文就膜受体介导的信号通路对H2O2诱导心肌细胞凋亡的作用做一综述。     

青藤碱抑制H2O2诱导乳鼠心肌细胞凋亡

目的:探讨青藤碱对H2O2诱导乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其可能的作用机制.方法:在原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞上建立H2O2损伤模型,观察不同剂量青藤碱(10,30,100 μmol·L-1)对心肌细胞凋亡率、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性及NF-KB蛋白表达的影响.结果:H2O2组与空白对照组相比,心肌细胞凋亡率显著增加(P<0.01),并随着时间的延长其凋亡率不断增高;青藤碱明显抑制H2O2所诱导各个时问段的心肌细胞凋亡率(P<0. 01),降低MDA含量,增加SOD,LDH活性,抑制NF-KB蛋白表达.结论:青藤碱对H2O2诱导的乳鼠心肌细胞凋亡有抑制作用,其作用机制可能与其抗脂质氧化、抑制心肌细胞表达NF-KB有关.     

Protective effects of Wuyaoshunqisan against H2O2-induced apoptosis on hippocampal cell line HiB5

Oxidative stress has been implicated in the pathogenesis of different neurodegenerative disorders. To investigate the protective effects of Wuyaoshunqisan against H2O2-induced apoptosis in the central nervous system, the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay, the terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end-labeling (TUNEL) method, flow cytometric analysis, and the DNA fragmentation assay were performed on cells of the hippocampal cell line HiB5. Through the morphological and biochemical analyses, it was shown that HiB5 cells treated with H2O2 exhibit classical apoptotic features, while the occurrence of such changes is reduced in cells pre-treated with Wuyaoshunqisan prior to H2O2 exposure.     

蛭龙活血通瘀胶囊对H2O2诱导细胞氧化损伤的保护作用研究

目的:探讨蛭龙活血通瘀胶囊(以下简称“ZL”)对H2O2诱导细胞氧化损伤的保护作用.方法:以正常H9C2心肌细胞、PC12细胞作为对照,分别以不同浓度的H2O2处理细胞4h,建立氧化损伤模型;在H2O2处理细胞前用ZL预处理24 h,作为ZL药物组,采用CCK-8法检测以上各组细胞存活率.结果:与未经H2O2处理的细胞...     

黄芪多糖对过氧化氢诱导大鼠视网膜神经节细胞氧化损伤的保护作用

目的观察黄芪多糖(APS)对过氧化氢诱导的大鼠视网膜神经节细胞(RGC)氧化损伤的保护作用。方法将RGC-5细胞分为正常对照组、阴性对照组、过氧化氢损伤组、黄芪多糖干预组。正常对照组不做处理,阴性对照组和过氧化氢损伤组分别加入1 000μg/ml的黄芪多糖和100μmol/L的过氧化氢,黄芪多糖干预组加入不同浓度(1 000μg/ml、500μg/ml、250μg/ml)黄芪多糖后加入100μmol/L的过氧化氢。用倒置相差显微镜观察各组细胞形态变化;MTT法检测细胞活性;DAPI染色观察细胞核形态学变化;实时细胞电子传感器(RT-CES)分析系统记录细胞生长状态。结果倒置相差显微镜下正常RGC-5细胞呈扁平梭形,边缘清晰,有较短突起,过氧化氢损伤组细胞皱缩,细胞密度减低,轴突缩短,其他各组细胞形态未见明显改变。MTT:各浓度黄芪多糖干预组的细胞活性均较过氧化氢损伤组升高,差异具有统计学意义(P0.01)。DAPI染色:过氧化氢处理后RGC-5细胞核可见染色质凝聚,边缘化;黄芪多糖干预后仅少量细胞出现染色质凝聚现象。RT-CES:与正常对照组相比,过氧化氢损伤组细胞生长受到抑制,其余各组细胞生长曲线基本正常。结论黄芪多糖可以抑制过氧化氢诱导的大鼠RGC凋亡,这为黄芪类药物治疗糖尿病视网膜病变提供了一定的实验基础。     

地骨皮调控H2O2所致内皮细胞凋亡的有效部位及相关信号通路研究

目的：筛选地骨皮调控H2O2所致人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HU-VEC）凋亡的有效部位,并研究相关的信号转导通路,探讨其保护作用的分子机制。方法：用H2O2构建凋亡模型,运用MTS检测细胞存活率,流式细胞仪检测凋亡率筛选地骨皮有效部位,及Western观察相关信号通路蛋白P-AKT、P-NF-KB表达情况。结果：地骨皮30%,50%,70%醉提取部位均可以减少HUVEC的凋亡,可以明显增加P-AKT的表达,降低P-NF-KB活性,尤其55%醇提地骨皮用量最小效果最佳。结论：地骨皮抑制H2O2所致HUVEC凋亡的主要成分在55%醇提部位,它可以通过AKT、NF-κB信号通路起到抗凋亡的作用。     

Dual functions of ginsenosides in protecting human endothelial cells against influenza H9N2-induced inflammation and apoptosis

Ethnopharmacological relevance

Panax ginseng is a precious traditional Chinese herbal medicine which has been utilized as herbal tonic for improving immunity. The active component, ginsenosides have been shown to possess various pharmacological functions including immunomodulation and cardiovascular protection.

Aim of the study

To investigate the immunomodulatory effect and anti-apoptotic effect of ginsenosides on avian influenza-infected human endothelial cells, and to present evidence for the cardiovascular protection by ginseng during influenza infection.

Materials and methods

Human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) were infected with avian influenza H9N2/G1 to induce IP-10 production and cell death, cells were then incubated with ginsenosides PPT and Re. The level of IP-10 and microRNA was determined by ELISA and real-time PCR respectively. Cell death was determined by MTT, TUNEL and flow cytometry.

Results

Ginsenoside metabolite protopanaxatriol showed significant suppression effect on IP-10 production upon H9N2/G1 infection through up-regulation of miR-15b expression. In addition, ginsenoside-induced cytoprotection was reflected in the increase of cell viability. Data from flow cytometry analysis and TUNEL assay also showed that ginsenoside Re could protect ECs from H9N2/G1-induced apoptosis and DNA damage.

Conclusions

This report further supports the traditional belief for immunomodulatory effects of ginseng, also demonstrated the partial protective mechanism of ginsenosides on avian influenza infection and its related endothelial dysfunction.     

Samul extract protects against the H2O2-induced apoptosis of H9c2 cardiomyoblasts via activation of extracellular regulated kinases (Erk) 1/2

Samul extract, containing Radix Rehmanniae, Radix Angelicae Gigantis, Radix Paeoniae, and Rhizoma Cnidii, has been traditionally used for treatment of ischemic heart and brain damages in Oriental medicine. However, little is known about the mechanism by which Samul rescues cells from cytotoxic damage. This study was designed to investigate the protective mechanisms of Samul on H(2)O(2)-induced death of H9c2 cells. Treatment with H(2)O(2) markedly decreased the viability of H9c2 cells in a dose- and time-dependent manner, which was significantly prevented by pre-treatment with Samul. The nature of death of H9c2 cells by H(2)O(2) was demonstrated by apoptotic features, including ladder-pattern fragmentation of genomic DNA and chromatin condensation, which were markedly abolished by pretreatment of Samul in H(2)O(2)-treated cells. We further demonstrated that MEK inhibitor, PD98059, dose-dependently attenuated the protective effects of Samul against H(2)O(2), whereas inhibitors of Jnk and p38 did not. Consistently, Samul induced the early phosphorylation of Erk, p44, in H(2)O(2)-treated cells. In addition, treatment with Samul also resulted in an increase of expression of anti-apotogenic Bcl2 protein, which was decreased by H(2)O(2). However, it inhibited the expression of apotogenic Bax protein in H(2)O(2)-treated cells. Taken together, these results suggest that the protective effects of Samul against oxidative damage may be achieved via activation of MAP kinase, Erk as well as Bcl2 family proteins.