藏红花素通过Nrf2/HO-1通路减轻大鼠肺缺血再灌注损伤的实验研究

目的 探讨藏红花素对大鼠肺缺血再灌注（LIR）损伤的影响及相关机制。方法 将80只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、藏红花素组、藏红花素+Brusatol(Nrf2抑制剂)组,各20只。腹腔注射给药30 min后,通过阻断左肺门1 h制备LIR大鼠模型。24 h后,检测动脉血氧分压（PaO2）、氧合指数（OI）,HE染色观察肺组织病理学改变,分光光度法检测抗氧化酶活性和MDA含量,ELISA法检测肺泡灌洗液炎症因子水平,Western blotting法检测肺组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、核因子-κB(NF-κB) p65、p-NF-κB p65蛋白表达。结果 与模型组比较,藏红花素组动脉血PaO2、OI升高（P <0.05）;肺组织结构受损、炎性细胞浸润等病变明显改善,病理评分降低（P <0.05）;SOD、CAT活性升高,MPO活性和MDA含量降低（P <0.05）;肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平降低（P <0.05）;肺组织Nrf2、HO-1表达量升高,p-NF-κB p6...     

鹅不食草介导Nrf2/HO-1信号通路在脑缺血再灌注中抗氧化抗炎作用机制研究

目的:探讨鹅不食草对脑缺血再灌注大鼠Nrf2/HO-1信号通路介导的氧化应激反应和神经炎症影响。方法:SD大鼠分为假手术组、脑缺血组、依达拉奉组、鹅不食草100 mg/kg剂量组、鹅不食草200 mg/kg剂量组、鹅不食草400 mg/kg剂量组。采用中动脉栓塞介导大鼠缺血损伤,连续给药后评价大鼠神经功能,脑组织脑梗死面积、氧化因子、炎症因子含量,Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白含量。结果:与假手术组相比,脑缺血组大鼠神经功能显著损伤(P<0.05),脑梗死体积增加(P<0.05),氧化因子、炎症因子含量增加(P<0.05)。与脑缺血组相比,鹅不食草组与依达拉奉组改善了大鼠神经功能(P<0.05),减少脑梗死面积(P<0.05),抑制氧化应激与炎症反应(P<0.05),而Nrf2、HO-1 mRNA与蛋白表达增加(P<0.05)。结论:鹅不食草可以介导Nrf2/HO-1信号通路减少大鼠脑中氧化应激反应与炎症因子含量,改善大鼠神经功能。     

白杨素对心肌缺血再灌注损伤大鼠Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的 研究白杨素对心肌缺血再灌注损伤大鼠核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路的影响.方法 依随机数字法将60只清洁级雄性SD大鼠分为假手术组、模型组、雷米普利组和白杨素低、中、高剂量组,每组10只.雷米普利组给予雷米普利1.0 mg/(kg·d)灌胃,白杨素低、中、高剂量组分别给予白杨...     

西红花苷通过调控SIRT1/Nrf2通路对心肌缺血再灌注大鼠的保护作用

目的 探讨西红花苷通过调控沉默信息调节因子2相关酶类1(SIRT1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)通路对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠心肌损伤的保护作用。方法 大鼠结扎冠脉前降支40 min再灌注4 h建立I/R模型,造模成功后分为模型组、地尔硫■组(10 mg/kg)和西红花苷低、中、高剂量组(20、40、80 mg/kg),另取8只正常大鼠为假手术组,连续给予相应药物15 d, ELISA法检测血清LDH、CK-MB、SOD活性和MDA水平,HE染色观察心肌组织病理改变,TUNEL染色法检测心肌细胞凋亡率,试剂盒检测心肌组织SOD活性和MDA水平,RT-qPCR和Western blot法检测心肌组织SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠血清LDH和CK-MB活性、血清和心肌组织MDA水平、心肌细胞凋亡率均升高(P<0.01),血清和心肌组织SOD活性及心肌组织SIRT1、Nrf2、HO-1 mRNA和蛋白表达均降低(P<0.01),大鼠心肌纤维排列紊乱,有大片炎性浸润,多数心肌细胞破裂且核有消融现象,心肌结构模糊不清;与...     

艾灸对卵巢储备功能减退大鼠Nrf2/HO-1信号通路的影响

目的:观察艾灸对卵巢储备功能减退(DOR)大鼠核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响,探讨艾灸对卵巢储备功能的保护效应机制。方法:将40只SD大鼠随机分为空白组、模型组、艾灸组、激素组,每组10只。模型组、艾灸组、激素组均采用雷公藤多苷片混悬液灌胃制备DOR大鼠模型,空白组灌胃等体积的0.9%氯化钠溶液,每日1次,连续灌胃14 d。激素组在造模即日起采用激素序贯疗法连续干预14 d;艾灸组在造模即日起每日给予双侧"肾俞"或"关元""中脘"艾灸治疗,两组穴隔日交替,每次10 min,连续14 d。每日采用阴道脱落细胞涂片观察大鼠的动情周期,统计各组大鼠动情周期紊乱率。干预结束后,采用HE染色观察各组大鼠卵巢组织学形态;ELISA法检测各组大鼠血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、抗苗勒管激素(AMH)和超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;免疫组化法检测各组大鼠卵巢组织Nrf2和HO-1蛋白水平;实时PCR(TaqMan探针法)检测各组大鼠卵巢组织Nrf2和HO-1 mRNA的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠动情周期紊乱率升高(P<0.01);与模型组比较,艾灸组和激素组大鼠动情周期紊乱率降低(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠血清FSH、LH、MDA含量增多(P<0.01),血清E2、AMH、SOD含量减少(P<0.01);与模型组比较,艾灸组和激素组大鼠血清FSH、LH、MDA含量减少(P<0.01,P<0.05),血清E2、AMH、SOD含量增多(P<0.01)。与空白组比较,模型组大鼠卵巢组织Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达减少(P<0.01);与模型组比较,艾灸组和激素组大鼠卵巢组织Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达增多(P<0.01)。结论:艾灸可以降低DOR大鼠的动情周期紊乱率,改善血清性激素水平和抗氧化应激能力,其机制可能与调控Nrf2/HO-1信号通路有关。     

基于Nrf2/HO-1通路探讨藏红花酸对高血脂合并冠心病大鼠心肌损伤的改善作用及对心电图的影响

目的:探究藏红花酸通过Nrf2/HO-1通路对高血脂合并冠心病大鼠心肌损伤的改善作用和对心电图的影响.方法:建立高血脂合并冠心病大鼠模型.建模成功大鼠随机分为模型组、消心痛组、藏红花酸组、藏红花酸+ML385组,同时设对照组.心电图检查各组大鼠ST段偏移幅度;比较血脂指标;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;Weste...     

芪精益肾汤对糖尿病肾病大鼠Nrf2/HO-1信号通路的作用及机制研究

目的?探讨芪精益肾汤（QJYSD）是否通过调节核转录因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素加氧酶-1（HO-1）信号通路减轻糖尿病肾病（DN）大鼠氧化应激损伤，从而发挥保护肾功能、延缓肾纤维化进程的作用。方法?采用高脂饮食联合小剂量一次性注射链脲佐菌素的方法制备糖尿病大鼠模型。实验分为正常对照组、模型组、QJYSD低、中、高剂量组[5.76、11.52、23.04 g/（kg·d）]和缬沙坦组[30 mg/（kg·d）]，每组8只。灌胃12周后，记录各组大鼠一般情况，测空腹血糖（FBG），并收集尿液、血液以及肾组织进行24h尿总蛋白（24h UPro）、糖化血清蛋白（GSP）、血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）、组织病理学（HE染色、Masson染色）、氧化应激损伤指标[超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量]的检测；采用Western Blot法检测肾组织Nrf2、HO-1、FN等蛋白表达水平，免疫组化法检测FN蛋白沉积。结果?与正常对照组比较，模型组大鼠体重减轻，饮食量以及饮水量增多（P<0.01）；肾脏指数（RI）、24 h UPro、FBG、GSP、SCr、BUN水平升高（P<0.01）；肾组织中肾小球体积增大、系膜区增生，肾间质炎性细胞浸润，胶原容积比升高（P<0.01）；血清MDA含量显著升高，SOD活性显著降低（P<0.01）；肾组织中总Nrf2、HO-1、细胞核Nrf2、FN蛋白表达水平升高，且FN蛋白沉积显著增加（P<0.01）。与模型组比较，QJYSD各剂量组与缬沙坦组大鼠饮食量以及饮水量减少（P<0.05，P<0.01）；RI、24h UPro、FBG、GSP、SCr、BUN水平一定程度下降（P<0.05，P<0.01）；肾组织中系膜区增生程度以及炎性细胞浸润减少，胶原容积比下降（P<0.05，P<0.01）；血清MDA含量减少、SOD活性增加（P<0.05，P<0.01）；肾组织中总Nrf2、HO-1、细胞核Nrf2、FN蛋白表达水平下降（P<0.05，P<0.01），且FN蛋白沉积减少（P<0.05，P<0.01）。与缬沙坦组比较，QJYSD高剂量组DN大鼠FBG、GSP水平降低（P<0.05），对肾组织HO-1、细胞核Nrf2水平降低，FN水平上升（P<0.05）。结论?QJYSD可以通过促进DN大鼠肾组织Nrf2/HO-1信号通路活化，增强机体抗氧化应激能力，从而减轻肾损伤，改善肾组织结构及功能，延缓肾纤维化进程。     

Nrf2/HO-1通路介导的及己醇提取物致大鼠肾毒性研究

目的研究及己根、茎、叶醇提取物所致大鼠肾毒性及机制。方法将40只雄性SD大鼠随机分成空白(KB)组、根醇(GC)组、茎醇(JC)组和叶醇(YC)组,每组10只。GC、JC、YC三组分别给予相应醇提取物4.14、3.21、1.17 g/kg灌胃。KB组给予等体积0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液灌胃,每天1次,连续灌胃14天。绘制体重变化曲线,计算肾脏指数,制作肾脏组织切片,进行HE染色及组织病理学观察。检测血清尿素氮(BUN,速率法)、肌酐(SCr,酶法)和尿酸(UA,酶法)及肾脏组织总超氧化物歧化酶(T-SOD,羟胺法)和丙二醛(MDA,TBA法)含量;Western Blot法检测Nrf2/HO-1通路中Nrf2、HO-1蛋白含量;免疫组化法检测肾脏TGF-β_1阳性表达情况。结果与KB组比较,JC组BUN、UA含量升高(P0.01);JC组和YC组SCr、MDA含量升高(P0.01),T-SOD含量及HO-1、Nrf2蛋白表达降低(P0.01,P0.05);GC组、JC组和YC组大鼠肾脏TGF-β_1表达水平升高(P0.01)。与GC组比较,JC组BUN、UA含量升高(P0.01);JC组和YC组SCr、MDA含量及TGF-β_1表达升高(P0.01,P0.05),T-SOD含量及HO-1、Nrf2蛋白表达降低(P0.01)。与JC组比较,YC组BUN、SCr、UA、MDA含量降低(P0.01,P0.05),T-SOD含量升高(P0.01)。KB组镜下未见明显病理变化;GC组偶见肾小管出血和上皮细胞脱落;JC组肾小管上皮细胞肿胀、坏死、脱落,炎细胞浸润明显,并出现严重的血管扩张充血和淤血;YC组肾小管上皮细胞脱落坏死,伴有淤血现象。结论及己茎和叶部位的肾毒性较大,根部位的肾毒性较小,其机制可能与氧化应激损伤有关。     

藏红花素调控Nrf2/HO-1通路改善血管性认知障碍大鼠学习记忆能力实验研究

目的:探讨藏红花素对血管性认知障碍(VCI)大鼠学习记忆能力的影响及机制。方法:通过反复夹闭双侧颈总动脉建立VCI大鼠模型,假手术组暴露双侧颈总动脉但不夹闭; 将VCI模型大鼠随机分为模型组、藏红花素低剂量组(10 mg/kg)、藏红花素中剂量组(20 mg/kg)、藏红花素高剂量组(40 mg/kg)和多奈哌齐组(0.5 mg/kg)。连续给药4周后,评测大鼠学习能力和记忆能力,观察海马体CA1区病理性变化和神经元凋亡状况; 检测海马体CA1区氧化应激指标和炎症因子水平,Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果:藏红花素或多奈哌齐治疗4周可提高VCI大鼠学习能力和记忆能力,改善海马体CA1区病变和神经元凋亡状况,提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,降低丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,上调Nrf2、HO-1表达,下调NF-κB表达(P<0.05)。上述指标除GSH-Px活力和MDA、IL-1β水平外,藏红花素对其他指标的作用均表现出剂量依赖性; 除GSH-Px活力、IL-1β水平外,藏红花素高剂量对其他指标的作用优于多奈哌齐(P<0.05)。结论:藏红花素可能通过激活Nrf2/HO-1通路降低海马体氧化应激损伤,对VCI大鼠学习记忆能力有改善作用。     

六味地黄丸通过Nrf2/HO-1通路抗氧化应激防治阿尔茨海默病的机制研究

目的 观察六味地黄丸通过Nrf2/HO-1通路对H₂O₂诱导海马神经元细胞(HT22)氧化损伤的保护作用,探讨其防治阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease,AD)的作用机制。方法 (1)以过氧化氢(Hydrogen peroxide,H₂O₂)诱导HT22细胞,通过噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,DCFH-DA荧光染色法检测细胞内ROS含量,构建基于氧化应激损伤的早期AD细胞模型;(2)制备六味地黄丸含药血清(Medicated Serum of Liuwei Dihuang Pill,MSLDP),分别设置空白组、模型组、MSLDP组,检测细胞内SOD活力、MDA及ROS含量的变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)法检测细胞内Nrf2、HO-1及NQO1等因子的mRNA的转录水平及蛋白表达量的变化;(3)采用Nrf2的抑制剂(ML385)抑制细胞内Nrf2的激活,RT-qPCR及Western blot法检测各组细胞内Nrf2、H...     

银杏内酯B通过Nrf2/HO-1通路抑制糖尿病大鼠肝损伤机制研究

目的:研究银杏内酯B(GB)对糖尿病大鼠肝脏的保护作用及其机制.方法:通过高脂高糖饮食联合腹腔注射链尿佐菌素(STZ)制备2型糖尿病(T2DM)大鼠模型,设模型组、GB(5 mg/kg)组和二甲双胍(MET,300 mg/kg)组;另设正常对照组(常规饲料喂养).GB组和MET组均1次/d灌胃给药治疗,正常对照组和模型...     

苦参素对2型糖尿病雄性大鼠生殖损伤及Nrf2/HO-1信号通路的影响

[目的]探讨苦参素（OMT）对2型糖尿病（T2DM）雄性大鼠生殖损伤及E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶1(HO-1)信号通路的影响。[方法]采用高脂饮食结合腹腔注射链脲佐菌素的方法制备T2DM雄性大鼠模型,设正常（Normal）组、模型（Model）组、二甲双胍（Met）组和OMT低、中、高剂量组,每组8只。Met组每日1次灌胃给药200 mg/kg,OMT低、中、高剂量组分别每日1次灌胃给药25、50、100 mg/kg,Normal组和Model组每日1次灌胃给予生理盐水,疗程4周。检测空腹血糖（FBG）和血清睾酮（T）、促性腺激素释放激素（GnRH）、促黄体激素（LH）、卵泡刺激素（FSH）水平,测量睾丸质量和睾丸体积,苏木精-伊红（HE）染色法观察睾丸组织病理学改变,测量输精管直径（STD）和输精管上皮厚度（TSE）,精液分析仪检测精子数量、精子存活率和精子活力,比色法检测睾丸组织抗氧化酶（SOD、GSH-Px）活性和丙二醇（MDA）含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA表达,蛋白免疫印迹法...     

丹参多酚酸盐调控Nrf2/HO-1信号通路对膜性肾病大鼠氧化应激的影响

[目的] 基于血清核转录因子2（Nrf2）/血红蛋白氧合酶-1（HO-1）信号通路探讨丹参多酚酸盐对膜性肾病（MN）大鼠氧化应激的影响。[方法] 80只SD雄性大鼠随机选取20只为正常对照组,其余60只大鼠均采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）构建MN模型,MN模型大鼠复制成功后随机分为模型组,盐酸贝那普利组（10 mg/kg）,丹参多酚酸盐分为低、中、高剂量组（16.7、33.3、66.7 mg/kg）。药物灌胃连续 4周,1 次/d,正常组和模型组予以相等体积的生理盐水灌胃。治疗后检测大鼠24 h尿蛋白定量（24 h UTP）。给药结束后,经大鼠腹主动脉取血检测血尿素氮（BUN）,血清肌酐（Scr）,三酰甘油（TG）,总胆固醇（TC）,总蛋白（TP）,白蛋白（ALB）水平;过碘酸-六胺银（PASM）染色观察大鼠肾组织病理形态;免疫荧光检测肾组织免疫球蛋白G（IgG）、补体C3沉积情况;采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）表达情况;蛋白免疫印迹法（Western Blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）观察肾组织Nrf2、HO-1蛋白及Nrf2、HO-1 mRNA表达。[结果] 与正常组相比,模型组大鼠肾小球出现体积增大、基底膜增厚、“钉突”形成,沿毛细血管襻有补体C3、IgG弥漫性沉积,24 h UTP、血清TG、TC水平显著升高（P<0.01）,TP、ALB水平显著降低（P<0.01）,BUN、SCr差异无统计学意义;血清中SOD表达显著降低（P<0.01）,MDA表达显著升高（P<0.01）;肾组织Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达显著降低（P<0.01）。与模型组相比,各治疗组大鼠24 h UTP、血清TG、TC水平显著降低（P<0.05或P<0.01）,TP、ALB 水平显著升高（P<0.01）,但丹参多酚酸盐低剂量组改善不明显;各治疗组肾脏病理损害明显改善;SOD表达水平显著升高（P<0.01）,MDA表达水平明显降低（P<0.01）;Nrf2、HO-1mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.05或P<0.01）。[结论] 丹参多酚酸盐可能通过调控Nrf2/HO-1信号通路,缓解肾组织氧化应激,进而保护肾脏及延缓疾病进展。     

苦参水提物激活Nrf2/HO-1信号通路抑制炎症和氧化应激机制研究

目的研究苦参水提物(WSF)抑制脂多糖(LPS)诱导大鼠巨噬细胞RAW264.7炎症和氧化应激的分子机制。方法采用CCK-8法检测WSF对RAW264.7细胞的最佳给药质量浓度;以LPS刺激RAW264.7细胞制备体外炎症模型,随机分为对照组、模型组、WSF组和WSF对照组,流式细胞术检测活性氧(ROS)及一氧化氮(NO)水平,通过荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)、核转录因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶-1(HO-1)在分子水平上的变化;最后检测细胞培养上清中细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-10的含量。结果通过CCK-8实验确定WSF质量浓度为0.01 mg/mL对细胞无毒性。与对照组比较,LPS刺激能够显著地增加细胞中NO和ROS产生,IL-6和TNF-α水平也明显升高,iNOS和COX-2蛋白表达水平明显提高(P0.01、0.001),而Nrf2和HO-1蛋白表达水平降低(P0.05)。与模型组比较,WSF干预后细胞NO、ROS、IL-6和TNF-α水平显著降低,iNOS和COX-2蛋白表达水平显著降低(P0.05、0.01、0.001),Nrf2和HO-1蛋白表达水平和IL-10水平显著升高(P0.05、0.01、0.001)。结论 WSF可通过激活Nrf2/HO-1通路在LPS诱导的RAW264.7细胞炎症和氧化应激反应中发挥保护效应。     

基于DJ-1/Nrf2/HO-1信号通路探讨北柴胡地上部分多糖组分对癫痫小鼠脑内氧化应激的影响

目的 探讨北柴胡Bupleurum chinense地上部分多糖组分（polysaccharides from aerial parts of B. chinense,ABP）对戊四唑致痫小鼠的预防作用及作用机制。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、丙戊酸钠（125 mg/kg）组、癫痫宁片（1200 mg/kg）组和ABP高、低剂量（100、25 mg/kg）组,每组10只。各给药组ig相应药物,对照组和模型组ig等体积0.5%羧甲基纤维素钠溶液,1次/d,连续7 d。末次给药后60 min,除对照组外,其余各组ip戊四唑（60 mg/kg）。通过行为学评价ABP预防癫痫的作用;采用苏木素-伊红（HE）染色、免疫组化法检测海马神经元病理形态学变化;采用ELISA法测定海马组织中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cystein-asparate protease-3,Caspase-3)、胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）、谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)、GAD...     

益心方调控SIRT1/Nrf2/HO-1信号通路改善大鼠心肌缺血再灌注后损伤

目的 探讨中药复方益心方改善心肌缺血再灌注后损伤的作用及其机制。方法 将75只清洁级大鼠分为5组：假手术组(Sham),缺血再灌注组(IR),益心方+缺血再灌注组(YXF+IR),益心方+缺血再灌注+SIRT1抑制剂组(YXF+IR+EX527),益心方+缺血再灌注+SIRT1激动剂组(YXF+IR+SRT1720),每组各15只。再灌注7 d后超声心动图检测心功能;免疫荧光法检测心肌细胞凋亡率和组织活性氧(ROS)的活性;ELISA检测血清中的心肌酶水平;Western Blot检测相关蛋白表达。结果 与Sham组比较,IR组大鼠的左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)降低,心肌凋亡指数和ROS活性升高,血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H₂O₂)、琥珀酸脱氢酶(SDH)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)水平降低,沉默信息调节因子1(SIRT1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达下降,B淋巴细胞瘤-2相关蛋白X(Bax)...     

淫羊藿苷激活Nrf2/HO-1信号通路减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤研究

目的探究淫羊藿苷对自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用及其分子机制。方法将SPF级SD雄性大鼠随机分为4组,分别为青年对照组(2月龄)、衰老模型组(16月龄)和淫羊藿苷低、高剂量组(2、6 mg/kg,16月龄),每组8只,给予普通或含药饲料饲养4个月,禁食12 h后处死大鼠。HE染色法观察睾丸组织形态变化;黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法检测睾丸组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)水平;免疫荧光法检测睾丸组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)及DNA损伤相关蛋白γ-H2AX的表达和定位;Western blotting法检测睾丸组织中Nrf2及其下游相关蛋白血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、γ-H2AX和DNA损伤修复相关蛋白p-p53和p21表达水平。结果HE染色结果表明,淫羊藿苷能明显改善自然衰老大鼠睾丸组织形态学变化,显著提高衰老大鼠睾丸组织SOD活力,降低MDA水平;免疫荧光结果显示,淫羊藿苷能明显上调衰老大鼠睾丸组织中各级生精细胞内Nrf2蛋白表达水平,明显下调初级精母细胞和精原细胞中γ-H2AX蛋白表达水平;Western blotting结果显示,淫羊藿苷能显著上调衰老大鼠睾丸组织中Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达水平,下调γ-H2AX、p-p53和p21蛋白表达水平。结论淫羊藿苷可减轻自然衰老大鼠睾丸生殖细胞DNA损伤,其机制与激活Nrf2/HO-1信号通路有关。