六味地黄丸方对秀丽隐杆线虫寿命及daf-2 mRNA、daf-16 mRNA表达的影响

目的：观察六味地黄丸方对秀丽隐杆线虫寿命、生殖力、运动能力的影响并探讨其可能的分子机制。方法：秀丽隐杆线虫分为空白对照组、六味地黄丸方高、中、低剂量组（160、80、40mg?mL^-1）。寿命实验观察各组线虫平均寿命;生殖能力测试中,计数各组总子代数目;运动能力实验测试各组线虫20s内身体弯曲的次数。实时荧光定量PCR（Real-Time PCR）方法检测空白组和六味地黄丸方中剂量组的daf-2 mRNA、daf-16 mRNA表达变化。结果：与空白组比较,六味地黄丸方中、低剂量组均能延长线虫的平均寿命（P<0.01）,以中剂量组更为显著,并可明显提高线虫生殖高峰期及末期的生殖能力。与空白组比较,各剂量组均使线虫运动能力明显减缓（P<0.01）;用药组daf-2 mRNA表达明显下调（P<0.05）;daf-16 mRNA表达明显上调（P<0.05）。结论：六味地黄丸方能明显延长秀丽隐杆线虫寿命,其机制可能与下调daf-2基因和上调daf-16基因表达有关。     

三七醇提物对秀丽隐杆线虫的降脂作用＊

目的 研究三七醇提物降低秀丽隐杆线虫脂肪沉积的作用以及可能的分子机制。方法 本研究采用秀丽隐杆线虫为模式生物，三七醇提物以不同剂量给药后，观察对线虫的寿命、生殖和抗逆性的影响；采用油红O染色法，观察了线虫体内脂肪沉积的变化；同时,检测了线虫体内的甘油三酯含量和脂肪代谢相关的基因acs-2、pod-2、fat-5的表达水平。结果 与对照组比较：三七醇提物不同给药剂量组均能延长线虫的寿命，增强抗逆性，且高剂量组更为显著（P < 0.01）；对线虫生殖能力没有影响；油红O染色结果显示，三七醇提物可显著降低线虫肠道脂肪沉积（P < 0.01）；三七醇提物高剂量组还能显著降低甘油三酯的含量（P < 0.05），并影响与脂肪代谢相关基因表达水平，其中acs-2 mRNA被上调，pod-2、fat-5mRNA被下调（P < 0.05）。结论 三七醇提物在不影响线虫生命特征的前提下，可减少线虫体内脂肪沉积，对甘油三酯水平及脂肪代谢相关的基因表达水平有调控作用。     

基于秀丽隐杆线虫痴呆模型的络塞维抗阿尔茨海默病药效研究

目的 基于秀丽隐杆线虫（以下简称线虫）痴呆模型,探究络塞维抗阿尔茨海默病（AD）的作用及可能机制。方法 以转基因线虫CL4176为模型,在显微镜下考察络塞维对线虫瘫痪情况、寿命、运动能力、吞咽频率、活性氧（ROS）水平、抗氧化酶活力等指标的影响。结果 络塞维能够显著降低痴呆模型线虫瘫痪率（P<0.05）,延长其寿命,增强其运动能力,显著提高其体内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活力（P<0.05）,显著降低其体内ROS水平和丙二醛含量（P<0.05）。络塞维对模型线虫的吞咽频率没有影响。结论 基于线虫痴呆模型,络塞维有抗阿尔茨海默病的作用,机制可能与改善氧化应激有关。     

基于转基因秀丽隐杆线虫模型的抗阿尔茨海默病中药成分筛选思路

转基因秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)是近20年发展起来的优良衰老模型,被应用于包括阿尔茨海默病在内的神经退行性病变的药物筛选与基因组学研究。秀丽隐杆线虫模型具有操作简单、筛选周期短、能提供多个靶点等特点,分析了利用其进行抗阿尔茨海默病中药成分筛选的可行性与优势,以期为药学工作者提供新思路。     

用秀丽隐杆线虫观察43种中药的体内抗菌药效

目的 以秀丽隐杆线虫细菌感染模型评价中药的体内抗菌作用,为发现新的抗菌先导物奠定基础.方法 用铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌分别感染秀丽隐杆线虫,用培养液配制不同浓度的中药提取物药液,将线虫置入药液培养,5 d后观察,根据成活率、线虫体内细菌数判断药效.结果 水麻叶、黄连、大接骨丹、知母、茯苓、当归、桃仁、山豆根、白虎汤对感染细菌的秀丽隐杆线虫显示出较好的保护效果,其中水麻叶作用最强;对9种提取物做体外抑菌实验,除黄连具有较弱的抗菌效果外,其它8种提取物当浓度为1 600 μg·ml-1时均无抗菌活性,但在较低浓度时(100～800 μg·ml-1)对线虫产生体内抗菌作用,与阴性对照比,降低线虫体内细菌数10～100倍.结论 秀丽隐杆线虫易于培养,可感染多种细菌,具有免疫系统,繁殖成本低,适宜用于体内抗菌药物的筛选.     

异槲皮苷对β-淀粉样蛋白诱导毒性的阿尔茨海默病转基因秀丽隐杆线虫模型的神经保护作用

目的 探究探讨异槲皮苷对β-淀粉样蛋白（Aβ）诱导毒性的转基因CL4176秀丽隐杆线虫（以下简称线虫）的神经保护作用及其作用机制。方法 以转基因线虫CL4176为模型,在显微镜下考察异槲皮苷对线虫瘫痪情况、寿命、运动能力、吞咽频率、活性氧（ROS）水平、抗氧化酶活力等指标的影响。采用实时荧光定量技术测定异槲皮苷作用后线虫Aβ沉积及胰岛素信号途径相关基因表达情况。结果 异槲皮苷能够显著降低痴呆模型线虫瘫痪率（P<0.05）,可延长模型线虫寿命,提高其运动能力,能够显著提高模型线虫体内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活力（P<0.05）,显著降低其体内ROS和丙二醛水平（P<0.05）,同时显著下调Aβ mRNA表达量,上调DAF-16、SKN-1、SOD-3、GST-4、CTL-3、HSF-1 mRNA表达量。结论 异槲皮苷能够显著延缓线虫衰老、降低瘫痪率和抑制Aβ沉积,可能与调控胰岛素/胰岛素样生长因子1信号通路上的基因表达有关。     

福苓方对秀丽隐杆线虫寿命的影响

目的:通过观察福苓方对秀丽隐杆线虫寿命的影响,研究其延缓衰老的效果。方法:秀丽隐杆线虫分为空白组和福苓方高、中、低剂量组,通过寿命试验观察福苓方对线虫寿命影响,利用生殖力测试观察药物对线虫生殖力影响,急性热应激、氧化应激试验观察线虫在应激状态下寿命的改变,探讨该复方的作用机制。结果:各组的平均寿命分别为(19.96±1.48),(36.03±1.76),(28.47±1.01),(19.39±0.61)d,最大寿命依次为(21.01±1.36),(37.71±2.38),(29.19±3.12),(22.00±2.01)d。与空白组相比,福苓方高、中剂量组均能显著延长线虫的平均寿命、最大寿命及在氧化应激、热应激环境下寿命。福苓方组线虫总子代数目与空白组相比差异无统计学意义。结论:福苓方可延缓线虫衰老,其作用机制可能与该方能提高线虫的抗压力应激能力有关。     

淫羊藿总黄酮延缓秀丽隐杆线虫衰老的实验研究

目的以热量限制(caloric restriction, CR)为阳性对照,评价淫羊藿总黄酮（epimedium flavoniods,EF）延缓模式生物秀丽隐杆线虫衰老的效果并为进一步的机制研究奠定基础。     

鹿茸蛋白提取物对帕金森模型秀丽隐杆线虫毒性作用与药理作用的研究

目的研究不同浓度鹿茸提取物对帕金森模型线虫A30P(以下简称A30P线虫)的毒性作用与药理作用。方法分别给予A30P线虫0、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8 mg/mL鹿茸蛋白提取物,观察A30P线虫生存率、生长发育、生殖能力评价鹿茸蛋白提取物对A30P线虫的毒性作用。观察A30P线虫运动行为、树突恢复评价鹿茸蛋白提取物对A30P线虫的药理作用。结果与对照组相比,8 mg/mL鹿茸蛋白提取物降低了A30P线虫的存活率(P0.05),且抑制A30P线虫产卵(P0.05)。1、2、4 mg/mL鹿茸蛋白提取物增加A30P线虫身体弯曲频率(P0.01),促进A30P线虫树突的修复(P0.01),显著增加A30P线虫树突恢复比率(P0.01)。结论一定浓度范围内,鹿茸蛋白提取物能恢复A30P线虫行为,抑制树突退化缺失,有效治疗A30P线虫帕金森病,提示鹿茸蛋白提取物是其治疗帕金森病的潜在药物,值得进一步开发。     

秀丽隐杆线虫在中药研究领域中的应用

秀丽隐杆线虫具有寿命短、易培养、经济、适于高通量筛选且与活性关联的分子机制清晰等特点,被广泛应用于环境毒性监测、合成化合物活性筛选以及初步毒性评价等领域,是一种新近发展的颇具实用性的整体动物模型。令人惊喜的是,随着其应用范围的扩大,该模式生物已逐渐应用于中药的活性成分研究与毒性评价,并展现出广阔的应用前景;而线虫与中药研究的充分结合,必将成为中药现代化进程的强劲推动力。本研究就秀丽隐杆线虫在中药研究中的应用作一综述。     

黄连水提物对秀丽隐杆线虫毒性效应评价

目的评价不同质量浓度黄连水提物对秀丽隐杆线虫的毒性效应。方法制备黄连水提物,以秀丽隐杆线虫为模式生物,通过测定不同质量浓度的黄连水提物对秀丽隐杆线虫死亡率、最长寿命与半数致死时间、个体发育、产卵数和运动行为的影响,评价黄连水提物对秀丽隐杆线虫的毒性效应。结果与对照组相比,黄连水提物0.5、1.0、2.5 mg/mL可使秀丽隐杆线虫的死亡率显著提高(P0.01),最长寿命与半数致死时间显著降低(P0.01);在个体发育方面,黄连水提物1.0、2.5 mg/mL能显著抑制线虫生长(P0.01);生殖行为方面,3个质量浓度的黄连水提物均能显著降低秀丽隐杆线虫产卵数(P0.001),且具有一定的浓度依赖性;在运动行为方面,3个质量浓度的黄连水提物均能显著降低秀丽隐杆线虫头部摆动频率(P0.01),黄连水提物0.5、1.0 mg/mL组线虫身体弯曲频率无显著性差异,黄连水提物2.5 mg/mL组线虫身体弯曲频率极显著降低(P0.01);3个质量浓度的黄连水提物组线虫向前摆动、向后摆动和Omega/U摆动频率均无显著性差异。结论黄连水提物对秀丽隐杆线虫具有明显的毒性作用,为以秀丽隐杆线虫为模式生物评价黄连不同炮制品毒性提供了依据,为中药毒性的生物评价提供了新的思路和方法。     

茯苓多糖在秀丽隐杆线虫中的抗氧化和抗衰老作用及其作用机制

目的 分析茯苓多糖成分对秀丽隐杆线虫体内抗氧化和抗衰老作用的影响,并阐明其潜在机制。方法 将L4期线虫随机分为低、中、高剂量（10、20、40 μg/mL）的茯苓多糖组和空白组进行培养;采用百草枯抗氧化实验、寿命实验、脂褐素测定实验、应激实验（紫外/高温）、生理功能实验（吞咽频率/摆动次数/产卵量）探究茯苓多糖对野生型秀丽隐杆线虫抗氧化和抗衰老作用;将突变体线虫分为茯苓多糖组（40 μg/mL）和空白组,采用应激实验、寿命实验、线虫BZIP结构域蛋白1（protein skinhead-1,skn-1）绿色荧光蛋白的细胞定位检测、qRT-PCR实验、活性氧（reactive oxygen species,ROS）检测探究茯苓多糖的抗衰老的作用机制。结果 茯苓多糖显著延长线虫的寿命,减少脂褐素的产生,增强对紫外线和热胁迫的抵抗力,提高咽部泵血频率和运动能力,显示出显著的抗衰老生物活性。茯苓多糖的抗衰老作用是通过skn-1信号通路介导的,而不依赖于胰岛素样受体β亚基（insulin-like receptor subunit beta,daf-2）和神经元乙酰胆碱受体亚基eat-2（neuronal acetylcholine receptor subunit eat-2,eat-2）信号通路。茯苓多糖增加了线虫中skn-1转录因子的核定位,上调了下游抗氧化基因谷胱甘肽S-转移酶4（glutathione S-transferase 4,gst-4）和gst-7的转录水平,并显著降低了细胞内ROS水平。然而,在skn-1突变体蠕虫中未观察到这些效应。结论 茯苓多糖在秀丽隐杆线虫中表现出抗氧化和抗衰老的作用,其机制涉及调控skn-1转录因子及其下游抗氧化基因,最终降低ROS水平,增强机体的抗氧化应激能力。     

基于~1H-NMR代谢组学的黄芪甲苷对秀丽隐杆线虫寿命的延长作用研究

目的研究黄芪甲苷(AS-IV)对秀丽隐杆线虫寿命的影响,并探索其在干预秀丽隐杆线虫衰老过程中代谢物的变化规律。方法分别收集对照组、衰老模型组和AS-IV组秀丽隐杆线虫样本,采用~1H-NMR代谢组学技术及多元统计分析方法研究秀丽隐杆线虫组织内源性代谢产物的变化。结果 5μmol/L的AS-IV可以显著升高衰老线虫组织中8种氨基酸的含量,包括异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、琥珀酸、牛磺酸和苏氨酸,同时可降低葡萄糖的含量。结论 5μmol/L的AS-IV能够通过干预机体氨基酸代谢、能量代谢等发挥延缓衰老的作用。代谢组学方法为进一步研究AS-IV延缓衰老的作用机制提供了科学依据。     

基因治疗联合六味地黄丸对肝癌荷瘤小鼠缝隙连接蛋白表达的影响

目的:探讨六味地黄丸联合基因治疗对小鼠移植性肝癌缝隙连接蛋白(connexin,Cx)表达的影响,初步阐明六味地黄丸对肝癌HSV-tk/GCV自杀基因治疗的增效作用机制是否与缝隙连接相关。方法:昆明种小鼠90只,随机分为模型对照组、六味地黄丸治疗组(ig六味地黄丸10 g·kg-1·d-1)、自杀基因治疗组(ip丙氧鸟苷100 mg·kg-1·d-1)、联合治疗组(ig六味地黄丸10 g·kg-1.d-1+ip丙氧鸟苷100 mg·kg-1.d-1);选用H22与H22/tk细胞株皮下接种建立小鼠肝癌模型,取荷瘤小鼠肿瘤组织进行常规病理制片,采用SABC免疫组化法检测各组肿瘤组织Cx26,Cx32,Cx43蛋白表达。结果:阳性表达定位于细胞浆和细胞膜,Cx43在癌旁组织,特别是有纤维组织浸润部位表达呈强阳性,而在癌结节中肿瘤细胞表达相对较弱;Cx26,Cx32在肿瘤细胞特别是脂肪组织浸润附近的癌组织中呈现强阳性表达。与肿瘤模型组相比,联合治疗组则能增强Cx26,Cx43,Cx32蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05);与单独六味地黄丸和自杀基因治疗组相比,联合治疗组能明显提高Cx32蛋白表达,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论:六味地黄丸联合自杀基因治疗能增强Cx26,Cx43,Cx32蛋白表达,尤其是促进Cx32的表达,提示六味地黄丸增强自杀基因旁观者效应的机制与缝隙连接相关。     

蜜环菌菌索多糖延缓秀丽隐杆线虫衰老机制研究

目的 探讨蜜环菌菌索多糖（AMP）延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。方法 以模式生物秀丽隐杆线虫作为活体模型,测定其在正常培养条件下的生存期与后代平均数量,氧化应激条件下的存活率和热休克蛋白16.2（HSP-16.2）、超氧化物歧化酶-3（SOD-3）的表达。结果 在正常培养条件下,蜜环菌菌索多糖（AMP-1、AMP-2）显著延长秀丽隐杆线虫的生存期,对其生殖力没有损害;在氧化应激条件下,显著提高秀丽隐杆线虫HSP-16.2和SOD-3的表达。结论 提高秀丽隐杆线虫的氧化应激能力可能是AMP延缓秀丽隐杆线虫衰老的作用机制。     

人参皂苷Ro延长秀丽隐杆线虫的寿命并增强氧化应激抵抗力＊

目的 以秀丽隐杆线虫（（Caenorhabditis elegans，C. elegans），下文简称线虫）及其突变株为生物模型，研究人参皂苷Ro（Ginsenoside-Ro，G-Ro）对健康寿命的影响及抗氧化作用。方法 实验设空白对照组、不同剂量G-Ro（5、10、20 μmol·L^-1）药物组、阳性药物对照组（40 μmol·L^-1二甲双胍），研究G-Ro对线虫寿命、脂褐素荧光的影响。另外，在上述基础上利用10 mmol·L^-1百草枯（Paraquat，PQ）建立氧化损伤模型，探究G-Ro对线虫氧化应激状态下寿命及活性氧自由基（Reactive oxygen species，ROS）的影响。利用绿色荧光蛋白标记的DAF-16：：GFP、SOD-3：：GFP线虫及突变株daf-16（mu86）分析G-Ro对DAF-16及SOD-3的调节作用。结果 与空白对照组相比，20μmol·L^-1 G-Ro延长了线虫寿命（***P<0.001）；在氧化应激模型中，延长线虫寿命（^#P<0.05）；降低脂褐素荧光水平（11.70%）。20 μmol·L^-1 G-Ro降低线虫内源性ROS（11.92%，*P<0.05），降低氧化应激后升高的ROS（79.67%，*P<0.001）。与空白对照组相比，20 μmol·L^-1 G-Ro提高叉头转录因子（Fork head box O，FOXO）同系物DAF-16去磷酸化入核率（51.00%）；增强SOD-3荧光强度（19.85%，***P <0.001）。在正常及氧化应激状态下，G-Ro对突变体daf-16（mu86）寿命的影响均无统计学意义。结论 在正常及氧化应激状态下G-Ro延长线虫寿命的作用，可能与其上调SOD-3，清除累积的ROS相关。DAF-16的转录活性可能介导G-Ro效应。     

黑水缬草抗老年痴呆活性成分研究

该实验基于前期黑水缬草抗老年痴呆(AD)的作用,对其有效部位进行化学成分研究,采用75%乙醇加热回流的方法对黑水缬草药材进行提取,提取物经萃取和大孔吸附树脂柱色谱分离得到其抗AD的有效部位,采用硅胶、ODS柱色谱以及制备型HPLC等色谱法分离该有效部位并得到9个化合物(1~9),结合质谱及核磁等波谱技术,分别鉴定为6-hydroxy-7-(hydroxymethyl)-4-methy-lenehexahydrocyclopenta[c]pyran-1(3H)-one(1),suspensolide F(2),马钱子苷(3),α-莫诺苷(4),β-莫诺苷(5),patrinovalerosidate(6),野花椒苷A(7),(-)-angelicoidenol-2-O-β-D-glucopyranoside(8)和citroside A(9),其中化合物6~9为首次从缬草属植物中分离得到,进一步对化合物1~9进行体外抗AD活性研究发现化合物2和6对PC12神经元细胞损伤具有显著的保护作用。