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1.
Yang T  Zhang L  Yan F  Tong AP  Liu XY  Liu HY  Huang CH 《癌症》2007,26(3):264-269
背景与目的:先前研究发现采用反义技术下调cyclin B1基因表达水平,可产生抗肿瘤的作用,但其抗肿瘤机制有待进一步研究.本研究旨在利用比较蛋白质组学的方法来探讨反义cyclin B1抗肿瘤作用的分子机制.方法:首先用含有小鼠cyclin B1反义全长cDNA的重组质粒转染小鼠CT26结肠癌细胞,经双向凝胶电泳(2-DE)分离转染组和未转染组的总蛋白,再用PDQuest图像分析识别2-DE胶图像,然后对差异表达的蛋白质点进行基质辅助激光解吸电离飞行时间(MALDI-TOF-MS)质谱分析,再经Mascot软件搜索数据库鉴定这些差异蛋白.最后根据被鉴定肽段的可信度,从这些蛋白质中选出肽段可信度最高的2个,用Western blot对其丰度差异进行了验证.结果:初步鉴定出7个差异表达蛋白,其中Axin2、CCTθ、DR5和HPCM27蛋白质在实验组上调,RFP17、mKIAA1195及LOC77035蛋白在实验组下调,而可信度最高的Axin2和DR5的蛋白质表达丰度差异为Western blot所证实.结论:多种蛋白质在反义cyclin B1后表达有明显差异,这些差异蛋白质参与细胞的增殖、分化、迁移、凋亡及转录调控等多条信号通路,提示反义cyclin B1的抗肿瘤机制可能与上述蛋白质的作用有关.  相似文献   

2.
目的:应用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术建立检测人群中骨形成蛋白4(BMP4)基因编码区突变的平台。方法:采用PCR扩增BMP4基因,产物纯化后利用MALDI-TOF-MS技术对广东籍100例非综合征型唇腭裂患儿及91例健康对照者外周血进行BMP4基因突变的检测并进行测序验证。结果:采用MALDI-TOF-MS平台检测的191份样本均未发现BMP4基因编码区存在T102A、R162Q及R198X突变,与测序结果一致。结论:成功建立基于MALDI-TOF-MS检测BMP4基因编码区突变的平台,该方法具有高通量、快速、准确的特点。  相似文献   

3.
目的:利用蛋白质组学方法,识别并鉴定幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)处理HepG2细胞后差异表达的蛋白质,为进一步探讨幽门螺杆菌对肝细胞的病理作用机制奠定基础。方法:运用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离H.pylori处理前后HepG2细胞的总蛋白质,用图象分析软件比较分析,以识别差异表达的蛋白质;应用质谱仪(mass spectrometry)得到相应的肽质指纹图谱(peptide mass fingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定差异蛋白质。结果:鉴定出12种差异表达蛋白质.这些蛋白质包括整合素β-1、蛋白激酶C—α、PINCH蛋白、Ras相关蛋白Rab-37、LIM同源盒蛋白Lhx1、HLAⅠ类抗原、血管抑制素和金属蛋白酶抑制因子2等。这些差异蛋白质涉及基因表达调控、细胞免疫、细胞生长和信号传导等众多关键事件。结论:H.pylori处理前后HepG2的蛋白质组具有差异,这些差异表达的蛋白质可能参与了H.pylori对肝细胞的病理作用过程,这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究H.pylori与人类肝脏疾病的关系。  相似文献   

4.
目的筛选并鉴定存在明显表达差异的蛋白质,为人肺腺癌发病机制及其早期诊断的研究提供理论依据。方法采用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离12例Ⅰ期肺腺癌及其相配的癌旁正常肺组织可溶性总蛋白,建立人Ⅰ期肺腺癌及相配癌旁正常肺组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱;PDQuest凝胶图像分析软件比较分析,筛选出差异表达的蛋白质点;基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱获得相应蛋白质点的肽质量指纹图谱;搜索蛋白质数据库鉴定差异表达的蛋白质。结果建立了重复性较好的人Ⅰ期肺腺癌及相配癌旁正常肺组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱;筛选出存在明显表达差异的蛋白质点26个,挖取其中的9个蛋白质点进行质谱分析,9个蛋白质点均得到了满意的肽质量指纹图谱;搜索蛋白质数据库鉴定出4种蛋白质,分别是:60S核糖体蛋白P2、组织蛋白酶B1、载脂蛋白A-I前体和La4.1蛋白。结论成功建立了人Ⅰ期肺腺癌及相配癌旁正常肺组织蛋白质的双向电泳凝胶图谱,鉴定出4种在肺腺癌发生早期出现明显表达变化的蛋白质,为进一步探索人肺腺癌的发病机制及寻找特异性的早期分子标志物提供了理论依据。  相似文献   

5.
目的:通过分析上行型与下行型鼻咽癌的血清蛋白质谱,筛选鼻咽癌蛋白质标志物,为预测鼻咽癌临床分型提供可能的简易方法.方法:应用CM10弱阳离子交换芯片和表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)分析22例上行型鼻咽癌和26例下行型鼻咽癌患者的血清标本,采用Biomarker Wizard 3.01及Biomarker Pattern 5.01分析软件对测得的数据进行处理并建立相应的检测模型.结果:通过对上行型、下行型鼻咽癌患者血清蛋白指纹图谱数据的比较,筛选出差异蛋白质峰9个(P<0.05),相对分子量分别为2 776.27 Da,3 940.04 Da,6 440.51 Da和9 138.54 Da的4个蛋白质峰被选择用于构建分类决策树模型,该模型交叉验证总准确率为81.3%,上行型鼻咽癌患者检出率为77.3%,下行型鼻咽癌患者检出率为84.6%.分别对这4个蛋白质峰进行数据库搜索,得到4种与分子量最为接近的蛋白质.结论:应用SELDI-TOF-MS技术构建的分类决策树模型能达到区分上下型鼻咽癌患者的效果,这可能对鼻咽癌的分子分型、制定个体化治疗方案及预后预测方面有一定的临床意义,可进一步深入研究.  相似文献   

6.
[目的]建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型.[方法]采用ARMS实时PCR和MALDI-TOF-MS两种方法,以自行构建的质粒DNA为模板,建立K-ras基因12位密码子第一、二位点基因分型的研究模型.[结果]在相同的扩增条件下,采用ARMS实时PCR方法,第一个位点的野生型和突变型的△Ct值至少为8,但第二个位点野生型和突变型的△Ct值仅为1~2左右.第二个位点改用MALDI-TOF-MS分型方法,采用一条公用引物和dATP,ddTTP,ddCTP和ddGTP的混和物,12密码子第二位点基因分型可以准确检测.[结论]ARMS实时PCR方法分析速度快,操作简便,但它需要合适的反应条件及高质量模板.MALDI-TOF-MS分型方法虽然步骤较多,但准确度高,反应体系稳定并具有高通量潜力.  相似文献   

7.
目的 应用磁珠联合质谱技术筛选结直肠癌Ⅰ、Ⅱ期患者差异蛋白质,建立其血清学筛查方法。方法 收集血清样本156例(其中结直肠癌80例,健康志愿者76例),随机分为建模组和验证组。采用弱阳离子磁珠分离血清小分子蛋白,基质辅助激光解吸离子飞行时间质谱仪建立结直肠癌及健康志愿者血清蛋白谱,Clinprot Tools 2.2软件对建模组血清蛋白谱进行定量分析,建立结直肠癌判别模型,以所获取的判别模型判别验证组样本,评价判别模型的诊断价值。应用ELISA法检测验证组癌胚抗原。结果 对比分析建模组结直肠癌及健康志愿者血清蛋白谱,发现共有44个差异蛋白峰(P<0.05),其中在结直肠癌中高表达35个,低表达9个,利用其中3个差异峰(质荷比分别为1330.95、2883.96、9294.14)建立诊断模型,交叉验证的准确性为94.87%(74/78),经独立样本双盲验证,其敏感度为87.50%(35/40),特异性为89.47%(34/38),高于CEA。结论 应用磁珠分离和质谱技术建立的诊断模型具有较高的准确性,对提高结直肠癌的筛查具有一定的临床意义。  相似文献   

8.
目的:筛选紫杉醇诱导胆管癌细胞凋亡的相关蛋白并鉴定差异表达的蛋白点以寻找抗胆管癌药物作用的新靶点,筛选胆管癌新的肿瘤标志物,为胆管癌的早期诊断、疗效观察提供基础理论依据.方法:应用比较蛋白质组学技术对紫杉醇诱导凋亡的胆管癌QBC939细胞进行蛋白分离和蛋白表达谱差异分析,筛选并鉴定其相关蛋白并测定其胶内酶解后的肽指纹图谱.结果:本研究发现对照组和实验组蛋白点匹配率分别为(90.1±0.14)%和(87.1±0.22)%(P<0.05),匹配后在干预组中共发现68个差异表达蛋白点,其中47个表达下调和21个上调;共获得28张PMF,初步质谱鉴定发现11个与凋亡相关的差异表达蛋白,其中6种蛋白表达上调,5种蛋白表达下调.结论:应用蛋白质组学技术分析所获得的68个差异蛋白质点可能在QBC939细胞发生凋亡过程中发挥重要作用;被鉴定出的11个与细胞凋亡相关的差异蛋白点提示紫杉醇是通过多个重要蛋白,发挥其诱导细胞凋亡的抗癌作用机制的.  相似文献   

9.
目的:筛选紫杉醇诱导胆管癌细胞凋亡的相关蛋白并鉴定差异表达的蛋白点以寻找抗胆管癌药物作用的新靶点,筛选胆管癌新的肿瘤标志物,为胆管癌的早期诊断、疗效观察提供基础理论依据。方法:应用比较蛋白质组学技术对紫杉醇诱导凋亡的胆管癌QBC939细胞进行蛋白分离和蛋白表达谱差异分析,筛选并鉴定其相关蛋白并测定其胶内酶解后的肽指纹图谱。结果:本研究发现对照组和实验组蛋白点匹配率分别为(90.1±0.14)%和(87.1±0.22)%(P〈0.05),匹配后在干预组中共发现68个差异表达蛋白点,其中47个表达下调和21个上调;共获得28张PMF,初步质谱鉴定发现11个与凋亡相关的差异表达蛋白,其中6种蛋白表达上调,5种蛋白表达下调。结论:应用蛋白质组学技术分析所获得的68个差异蛋白质点可能在QBC939细胞发生凋亡过程中发挥重要作用;被鉴定出的11个与细胞凋亡相关的差异蛋白点提示紫杉醇是通过多个重要蛋白,发挥其诱导细胞凋亡的抗癌作用机制的。  相似文献   

10.
背景与目的:脑胶质瘤是神经外科最常见的恶性疾病,放射治疗是重要手段之一,但大部分患者对放疗不敏感或放疗后复发。本文研究人脑胶质瘤细胞株MGR2及其经间歇性大剂量X射线照射而存活的后代细胞MGR2R52在蛋白质组水平的表达差异,旨在探讨胶质瘤放射敏感性以及放射后存活肿瘤细胞的分子机制以提高胶质瘤的治疗效果。方法:提取MGR2和MGR2R52及二者经2Gy照射后继续培养48h细胞的总蛋白,分别进行Cydye染料标记和胶内差异双向电泳(2D-DIGE)分离;经Typhoon 9400型多功能激光扫描仪不同波长的激光扫描后,获取荧光胶内差异表达图谱,继而采用DeCyder软件进行图谱分析;选取2D-DIGE图谱中差异表达≥1.5倍且P值≤0.001的蛋白质斑点,通过全自动斑点处理工作站切点、酶解和点样后,使用基质辅助激光解吸/电离-飞行时间质谱仪(MALDI-TOFMS)进行蛋白质的肽指纹图谱(PMF)鉴定。结果:MGR2与MGR2R52之间共有110个蛋白点强度差异≥1.5倍(P〈0.001),经MALDI-TOF-MS鉴定发现干扰素诱导的Mx蛋白和人发动蛋白2(片断474-870)在MGR2R52中表达显著增高,分别增加4.66及9.03倍,并且两者同属于发动蛋白家族。结论:发动蛋白家族在放射存活的胶质瘤细胞中表达明显增加,其在胶质瘤细胞放射抗拒机制中的作用可能与促进细胞内吞功能有关,在此基础上进行胶质瘤放疗联合以腺病毒为载体的基因治疗研究,将有可能提高胶质瘤的治疗效果。  相似文献   

11.
[目的]在血清中寻找早期胃癌及癌前病变相关的标志物,初步探讨其临床意义。[方法]收集浙江省肿瘤医院经病理证实的血清标本279例,其中早期胃癌100例,胃上皮内瘤变38例,萎缩性胃炎41例及正常对照100例。采用弱阳离子交换纳米磁珠(WCX)和表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测获得血清多肽谱,用CiphergenProteinChip3.2.1和Biomarker Wizard软件进行分析,筛选差异峰后,采用SPSS13.0软件ROC曲线进一步评价其敏感度和特异性。[结果]与正常人群比较,早期胃癌组质荷比(m/z)为2745、3400的蛋白峰低表达,诊断敏感度分别为67.92%、66.83%,特异性分别为90.89%、81.02%;胃上皮内瘤变组m/z为2745的蛋白峰低表达,诊断敏感度和特异性分别是77.79%、82.27%;萎缩性胃炎组m/z为4800的蛋白峰低表达,诊断敏感度和特异性分别是58.52%、89.68%。[结论]m/z为2745、3400、4800的差异峰具有诊断早期胃癌及癌前病变的潜力。  相似文献   

12.
 目的 检测正常卵巢组织及良性、交界性和恶性卵巢肿瘤组织蛋白的指纹图谱,寻找差异表达蛋白质。方法 取卵巢不同病变组织,提取蛋白质,采用表面增强激光解吸电离-飞行时间质谱仪对其进行蛋白质指纹图谱检测并进行初步分析。结果 良、恶性卵巢肿瘤蛋白指纹图谱比较,癌组织中一些蛋白质高表达,如质荷比(M/Z)为15 112.15、15 296.79、7560.78、16 049.39、7682.06、7932.30、15 851.32、4619.68和 8052.10的蛋白质。交界性卵巢肿瘤蛋白指纹图谱介于良、恶性图谱之间,如M/Z为15 112.15、15 851.32、7560.78、7682.06和 7932.30的蛋白质。结论 卵巢不同病变组织的蛋白指纹图谱中具有差异蛋白质,其有可能为卵巢肿瘤的临床诊断和治疗奠定分子基础。  相似文献   

13.
目的:利用蛋白质组学方法,识别并鉴定幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)处理HepG2细胞后差异表达的蛋白质,为进一步探讨幽门螺杆菌对肝细胞的病理作用机制奠定基础。方法:运用固相pH梯度双向凝胶电泳技术分离H.pylori处理前后HepG2细胞的总蛋白质,用图象分析软件比较分析,以识别差异表达的蛋白质;应用质谱仪(massspectrometry)得到相应的肽质指纹图谱(peptidemassfingerprint,PMF),然后搜索数据库鉴定差异蛋白质。结果:鉴定出12种差异表达蛋白质,这些蛋白质包括整合素β1、蛋白激酶Cα、PINCH蛋白、Ras相关蛋白Rab37、LIM同源盒蛋白Lhx1、HLAⅠ类抗原、血管抑制素和金属蛋白酶抑制因子2等。这些差异蛋白质涉及基因表达调控、细胞免疫、细胞生长和信号传导等众多关键事件。结论:H.pylori处理前后HepG2的蛋白质组具有差异,这些差异表达的蛋白质可能参与了H.pylori对肝细胞的病理作用过程,这种蛋白质组的差异分析有助于进一步研究H.pylori与人类肝脏疾病的关系。  相似文献   

14.
小细胞肺癌细胞系NCI-H446蛋白质表达谱的建立   总被引:15,自引:2,他引:15  
Li MY  Xiao ZQ  Li C  Wu XY  Feng XP  Yi H  Li JL  Chen ZC  Chen P  Liang SP 《癌症》2004,23(10):1116-1121
背景与目的:小细胞肺癌(smallcelllungcancer,SCLC)是一种侵袭性极强的恶性肿瘤,具有增长迅速、早期转移等特点。目前公开的数据库中尚未见到小细胞肺癌的双向电泳参考图谱及其蛋白表达谱。本研究目的是建立高分辨率的小细胞肺癌细胞系NCI-H446细胞双向凝胶电泳图谱,并初步分析其蛋白质表达情况。方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳技术(IPG-DALT)分离NCI-H446细胞总蛋白,凝胶银染显色,ImageMaster2D图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白质点,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术和数据库搜索鉴定蛋白质。结果:获得了背景清晰、分辨率和重复性较好的双向凝胶电泳图谱,三块胶平均蛋白质点数为1506±74,匹配点数为1412±56,匹配率达93.4%,三块胶蛋白质点在位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在IEF方向偏差是(0.96±0.27)mm,在SDS-PAGE方向偏差是(1.24±0.41)mm。胶内酶解-肽质指纹图分析鉴定了58个蛋白质,其中有原癌蛋白、细胞周期调控和信号转导相关蛋白质。结论:建立了小细胞肺癌细胞系NCI-H446双向电泳参考图谱,并应用质谱技术鉴定了部分蛋白质点,为进一步构建其蛋白质表达数据库提供了基础。  相似文献   

15.
目的:通过不同匀浆化方法提取大鼠胰腺组织总蛋白,建立胰腺组织匀浆化的标准方法.方法:用液氮研磨分别配合反复冻融法、超声破碎法进行高速分散器分别配合反复冻融法、超声破碎法进行匀浆化胰腺组织,总蛋白提取试剂盒提取胰腺组织总蛋白,测量蛋白浓度并用体积排阻色谱(SEC)分离后分别进行基质辅助激光电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)做蛋白全谱.结果:液氮研磨分别配合反复冻融法、超声破碎法,高速分散器分别配合反复冻融法、超声破碎法总蛋白提取量分别为每0.1g胰腺组织:(6.7±0.5)mg、(6.9±0.2)mg、(5.4±0.2)mg、(5.6±0.2)mg,MALDI-TOF-MS蛋白全谱的谱峰数分别为304.2±22.3、331.6±30.5、263.8±19.7、289.8±12.2个.结论:液氮研磨配合超声破碎法与其他3种方法相比具有匀浆化彻底、蛋白不易变性等优点.  相似文献   

16.
目的:通过不同匀浆化方法提取大鼠胰腺组织总蛋白,建立胰腺组织匀浆化的标准方法。方法:用液氮研磨分别配合反复冻融法、超声破碎法进行高速分散器分别配合反复冻融法、超声破碎法进行匀浆化胰腺组织,总蛋白提取试剂盒提取胰腺组织总蛋白,测量蛋白浓度并用体积排阻色谱(SEC)分离后分别进行基质辅助激光电离飞行时间质谱(MALDI—TOF—MS)做蛋白全谱。结果:液氮研磨分别配合反复冻融法、超声破碎法,高速分散器分别配合反复冻融法、超声破碎法总蛋白提取量分别为每0.1g胰腺组织:(6.7±0.5)mg、(6.9±0.2)mg、(5.4±0.2)mg、(5.6±0.2)mg,MALDI—TOF—MS蛋白全谱的谱峰数分别为304.2±22.3、331.6±30.5、263.8±19.7、289.8±12.2个。结论:液氮研磨配合超声破碎法与其他3种方法相比具有匀浆化彻底、蛋白不易变性等优点。  相似文献   

17.
Tao YL  Liu ZG  Xia YF  Yi W 《中华肿瘤杂志》2011,33(3):188-191
目的 探讨鼻咽癌患者与正常健康者血清蛋白谱的差异,建立特异的鼻咽癌血清多肽谱诊断模型.方法 收集治疗前的鼻咽癌患者和正常健康对照者的血清标本,通过特异的液体磁珠分选后,进行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)分析,得到鼻咽癌患者的血清多肽谱.采用专用的生物信息学分析软件ClinProtTM进行差异分析,运用遗传算法,建立鼻咽癌的血清多肽谱诊断模型.通过盲法检验模型的灵敏度和特异度.结果 检测出鼻咽癌患者与正常健康者的差异蛋白峰有99个,选取两组间差异有统计学意义的、相对分子质量为808.99、834.61、3954.82和8141.88的蛋白峰,建立鼻咽癌诊断模型,该模型鼻咽癌的识别率为90.0%,预测能力为84.3%,盲法榆验模型的灵敏度为80.0%,特异度为64.0%.结论 鼻咽癌患者与正常对照者的血清间存在蛋白表达的差异,建立的特异的血清多肽谱诊断模型在鼻咽癌的诊断中有一定的应用前景,为寻找特异的鼻咽癌血清肿瘤标记物提供了一定的依据.
Abstract:
Objective To determine the specific serum peptide profile by comparing the serum differences between nasopharyngeal carcinoma patients (NPC) and normal control subjects, and to provide a diagnostic model of nasopharyngeal carcinoma. Methods Pre-treatment serum samples of NPC and normal control subjects were collected and assayed by MALDI-TOF MS analysis. The peptides were extracted with magnetic beads coated with WCX. Mass spectrographic data were analyzed with ClinProtTM software. The specific serum peptide model of NPC was established by using genetic algorithms. The sensitivity and specificity of model were tested by blind testing. Results The serum peptidome patterns of nasopharyngeal carcinoma was obtained. Differential expression of 99 peptide peaks was deteced, and the 808.99 Da,834.61 Da, 3954.82 Da, 8141.88 Da peptide peaks showing statistically significant differences between the two groups, were used to establish the diagnostic model for nasopharyngeal cancer. The recognition rate and predictive power of the model were 90.0% and 84.3%, respectively. The sensitivity and specificity of the model were 80. 0% and 64. 0% determined by blind testing, respectively. Conclusions Significant differences of serum peptide peaks are detected between NPC and normal control groups. The established specific serum peptide model may have certain application in the diagnosis of nasopharyngeal carcinoma, and provides the basis for discovering specific tumor markers of nasopharyngeal carcinoma.  相似文献   

18.
目的探讨筛选鼻咽低分化鳞癌血清肿瘤标志物的临床应用价值。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)及CM10型弱阳离子交换芯片对61例初治的鼻咽低分化鳞癌患者和72名健康人血清标本进行蛋白质指纹图谱测定,其中80例用于建模(40例鼻咽癌,40名健康人),53例用于盲法检测(21例鼻咽癌,32名健康人),用Biomarker Wizard3.01及Biomarker Pattern5.01分析软件对测得的数据进行处理及建立诊断模型。结果用建立的区分鼻咽低分化鳞癌与健康人的血清蛋白指纹图诊断模型进行盲法检测的准确性、敏感性和特异性分别为86.8%、81.0%和90.6%。其中Ⅰ、Ⅱ期鼻咽低分化鳞癌检出的准确性为73.7%,Ⅲ、Ⅳ期鼻咽低分化鳞癌检出的准确性为81.0%。结论用SELDI-TOF-MS技术与生物信息分析法筛选的血清肿瘤标志物对鼻咽低分化鳞癌的定性诊断提供了一条新途径。  相似文献   

19.
背景与目的 表皮细胞生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)治疗晚期NSCLC患者最终都会出现耐药.本研究目的 是检测耐药前后血清蛋白质谱的变化,探索可能用于预测TKI治疗后出现耐药的血清预测因子.方法 收集9例晚期NSCLC患者接受吉非替尼(gefitinib)治疗前后自身配对的血清样本20份,即入组口服吉非替尼前及临床评价为疾病进展前两周所采集的外周血血清.所有的患者对吉非替尼的最佳总疗效评价为疾病稳定或部分缓解.所有样本用弱阳离子微珠进行预分离后.在Bruker AutoflTM基质辅助激光解析离子化-时间飞行质谱仪(MALDI-TOF-MS)上进行血清蛋白质谱检测.以ClinProTools(Version:2.1)软件进行数据采集分析.结果 自身配对分析发现有7个血清蛋白质表达水平在肺癌患者耐药前后的血清中有统计学差异.该7个血清蛋白质谱峰为3 242.09、8 690.36、2 952.64、3 224.04、1 450.51、1 887.8及3 935.73(m/z).有3个血清蛋白(3 242.09、2 952.64及3 224.04)在耐药血清中下调,其余4个血清蛋白(8 690.36、1450.51、1 887.8及3 935.73)则出现上调.结论 特定的血清差异蛋白可能与吉非替尼治疗有效患者在治疗过程中出现耐药相关.这些差异蛋白的特性及其与吉非替尼治疗耐药的分子机制有待进一步研究.  相似文献   

20.
目的:寻找高恶性膀胱移行细胞癌(BTCC)和正常膀胱黏膜的差异表达蛋白,并对筛选出的有潜在应用价值的差异蛋白进行再验证,试图发现与高恶性膀胱移行细胞癌发生、 进展相关的生物学标记物。方法:联合手工显微切割、 双向电泳(2-DE)及基质辅助激光解吸/电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)对高恶性膀胱移行细胞癌与癌旁相应正常膀胱移行上皮进行蛋白质的分离和鉴定。并采用半定量RT-PCR技术和免疫组织化学技术对鉴定出的差异蛋白进行再验证。结果:共鉴定出11个差异表达蛋白,其中细胞角蛋白7(CK-7)、细胞角蛋白8(CK-8)、热休克蛋白60(HSP60)、膜联蛋白Ⅴ、抑制素这5个蛋白曾在文献中报道过,其表达失调与BTCC的发生发展可能相关;其余6个蛋白,包括mortalin、14-3-3ε蛋白、蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白、膜联蛋白Ⅳ、结蛋白、微管蛋白β4,目前尚未见到与BTCC的相关报道。半定量RT-PCR和免疫组织化学染色结果显示mortalin在高恶性膀胱移行细胞癌中mRNA和蛋白表达水平均高于正常膀胱移行上皮(P<0.01)。结论:高恶性BTCC的蛋白表达谱与相应正常的膀胱移行上皮相比有明显差异,由此表明膀胱移行细胞癌的发生是一个多基因多途径参与的复杂过程。mortalin蛋白在高恶性膀胱移行细胞癌中的表达明显上调与双向电泳的结果一致,mortalin可能成为一个潜在的、有应用价值的膀胱移行细胞癌的标记物。  相似文献   

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