TRAIL重组蛋白联合扶正抑瘤方诱导HepG2肝癌细胞凋亡的研究

目的:研究重组人可溶性TRAIL蛋白联合扶正抑瘤方诱导肝癌细胞HepG2凋亡的作用和意义。方法:HepG2细胞经重组人可溶性TRAIL蛋白及联合扶正抑瘤方处理后,以MTT法测定细胞存活率、流式细胞术检测细胞凋亡指数。结果:扶正抑瘤方对促进TRAIL蛋白诱导的HepG2的凋亡作用存在较好的量效和时效关系,其最佳作用剂量和最佳作用时间分别为105mg/ml和24小时。结论:扶正抑瘤方能加强TRAIL诱导HepG2肝癌细胞凋亡作用。     

TRAIL诱导结肠癌SW480细胞的凋亡

目的探讨TRAIL对结肠癌SW480细胞凋亡的影响。方法实验分rmhTRAIL处理组和阴性对照组。MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果 TRAIL能明显呈浓度依赖性地抑制结肠癌SW480细胞增殖（P〈0.05）,SW480细胞经rmhTRAIL处理后,流式细胞术分析显示其凋亡率明显上升（P〈0.01）,Western Blot检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况,显示Bcl-2蛋白表达明显下降,而Bax蛋白的表达明显升高（P〈0.05）。结论 TRAIL可以诱导结肠癌细胞的凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达有关。     

芹菜素增强TRAIL诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:研究芹菜素(API)与重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)合用对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响。方法:体外培养人宫颈癌HeLa细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析sub-G1百分率。DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带。结果:API(20μmol/L)和TRAIL(20ng/mL)以及两者合用作用48h的人宫颈癌HeLa细胞sub-G1百分率分别是3.56%±0.20%、6.69%±0.40%和59.8%±4.20%;DNA琼脂糖凝胶电泳显示:20μmol/LAPI与20ng/mL的TRAIL联合处理,展示出典型DNA梯形条带图谱。结论:芹菜素具有增强TRAIL诱导HeLa细胞凋亡作用。     

重组可溶性TRAIL联合化疗药诱导急性白血病细胞凋亡

目的肿瘤坏死相关凋亡诱导配体(TNT-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)作为肿瘤细胞诱导凋亡剂,可单独或与化疗药联合作用诱导多种肿瘤细胞株凋亡。本实验观察重组人可溶性TRAIL是否可有效诱导临床白血病患者的白血病细胞凋亡,并检验化疗药Ara-C联合TRAIL对白血病细胞的杀伤作用。方法将13例原始细胞比例均>60%急性白血病患者的骨髓标本的每份分4组:对照组、TRAIL组、Ara-C组、TRAIL+Ara-C组,进行细胞培养24h后,用AnnexinⅤ及碘化丙啶染色后流式细胞仪观察细胞凋亡率。结果对照组细胞凋亡率为(10.22±7.48)%,TRAIL组为(14.61±11.95)%,Ara-C组为(15.95±11.12)%,TRAIL+Ara-C组为(22.11±15.97)%。将4组标本进行组间方差检验,对照组与TRAIL+Ara-C组比较差异有统计学意义(P=0.015<0.05)。在TRAIL组中,13例中有3例(23%)显示对TRAIL诱导的凋亡敏感(若TRAIL组细胞凋亡率高于对照组10%以上,即认为对TRAIL敏感);在TRAIL+Ara-C组中,2例原对TRAIL不敏感的标本及1例对TRAIL敏感标本在TRAIL+Ara-C联合作用下,细胞凋亡率均高于对照组20%以上。结论1)TRAIL在体外可诱导急性白血病患者的白血病细胞凋亡;2)化疗药Ara-C与TRAIL联合应用可增加白血病细胞的凋亡率,包括先前对TRAIL不敏感的白血病细胞。     

TRAIL联合放射线诱导人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的协同作用研究

目的：研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）对人脑胶质瘤细胞株U251的凋亡诱导作用及与放射线联合应用的协同作用，并探讨不同剂量TRAIL对人脑胶质瘤细胞株U251凋亡率的影响。方法：利用显微镜、流式细胞仪，观察和检测不同剂量TRAIL、放射线、TRAIL加放射线对传代培养的人脑胶质瘤细胞株U251的凋亡诱导作用，比较各组间肿瘤细胞凋亡率的差异。结果：TRAIL作用后镜下可见到人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的典型表现，不同剂量TRAIL均有诱导入脑胶质瘤细胞株U251凋亡的作用，联合应用放射线后U251细胞凋亡率显著提高。结论：TRAIL可有效的诱导入脑胶质瘤细胞株U251凋亡，并和放射线有显著协同作用。     

白杨素敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡

目的:研究白杨素(ChR)是否具有增敏重组人可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(rhsTRAIL)诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。方法:体外培养人肝癌Bel-7402细胞。碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析细胞死亡率。DNA琼脂糖凝胶电泳确证诱导细胞凋亡作用。Western Bloting检测细胞DR5蛋白的表达。结果:ChR40μmol/L、rhsTRAIL 100ng/mL以及两者合用的细胞死亡率分别为4.91%±0.38%、5.89%±0.39%和28.7%±2.50%。ChR(40μmol/L)联合rhsTRAIL(100ng/mL)处理48小时,人肝癌Bel-7402细胞展示出典型DNA梯形条带图谱。Western Blot分析结果发现:白杨素以浓度和时间依赖的方式上调Bel-7402细胞DR5表达。结论:亚细胞毒性浓度的白杨素具有敏化rhsTRAIL诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡作用。     

Caspase 8在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用

目的探讨Caspase8在TRAIL（肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体）诱导神经母细胞瘤细胞株CHP212细胞凋亡中的作用及机制。方法应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法及流式细胞仪（FCM）检测TRAIL、Caspase8抑制剂（zIETD—FMK）＋TRAIL对CHP212细胞生长及凋亡的影响；应用比色法测定caspase8相对活性；应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察。结果CHP212细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感，存在时间和剂量依赖性；随TRAIL作用时间的延长，Caspase8活性逐步升高。于作用16h达高峰。zIETD-FMK能阻断Caspase8的活化而抑制TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用。透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征。结论TRAIL通过Caspase8信号传导通路诱导CHP212细胞凋亡并伴随Caspase8活性增高。     

可溶性人TRAIL诱导胃癌细胞BGC-823凋亡的研究

目的 通过构建pBud-EGFP-TRAIL质粒体外观察可溶性人TRAIL蛋白(sTRAIL)对胃癌细胞BGC-823的作用.方法 以EFGP基因为报告基因,sTRAIL为目的基因,构建pBud-EGFP-TRAIL双表达质粒,鉴定酶切和测序重组体.经脂质体转染法转染体外培养的胃癌细胞BGC-823,用荧光显微镜观察EGFP的表达,RT-PCR及Western blot进一步检测sTRAIL mRNA及其蛋白的表达,MTT法检测转染后对胃癌细胞的生长抑制率,TUNEL法观察细胞的凋亡情况,流式细胞仪分析转染后胃癌细胞的凋亡率.结果 测序结果证实pBud-EGFP-TRAIL载体构建成功,质粒经脂质体转染后,通过表达sTRAIL蛋白对胃癌细胞发挥作用.MTT法显示转染该质粒的细胞的生长抑制率明显高于对照组,TUNEL法显示细胞核固缩,核染色质聚集或断裂,形成凋亡小体.流式细胞仪结果表明转染该质粒的细胞的的凋亡率明显高于对照组.结论 在体外初步证实TRAIL能诱导胃癌细胞BGC-823凋亡.     

TRAIL联合放射线诱导人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的协同作用研究

目的:研究肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)对人脑胶质瘤细胞株U251的凋亡诱导作用及与放射线联合应用的协同作用,并探讨不同剂量TRAIL对人脑胶质瘤细胞株U251凋亡率的影响。方法:利用显微镜、流式细胞仪,观察和检测不同剂量TRAIL、放射线、TRAIL加放射线对传代培养的人脑胶质瘤细胞株U251的凋亡诱导作用,比较各组间肿瘤细胞凋亡率的差异。结果:TRAIL作用后镜下可见到人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的典型表现,不同剂量TRAIL均有诱导人脑胶质瘤细胞株U251凋亡的作用,联合应用放射线后U251细胞凋亡率显著提高。结论:TRAIL可有效的诱导人脑胶质瘤细胞株U251凋亡,并和放射线有显著协同作用。     

TRAIL联合低剂量顺铂诱导前列腺癌细胞凋亡的实验研究

目的观察低剂量顺铂对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的增敏作用.方法人前列腺癌细胞株LNCaP经过TRAIL(100ng/ml)、低剂量顺铂(0.2～1.0 mg/ml)以及联合用药处理24h后,观察其生存率以及相关蛋白的动态变化.结果 LNCaP细胞株单独经过TRAIL或低剂量顺铂处理后并不能降低其存活率,但联合用药后细胞生存率大大降低.经1.0 mg/ml顺铂处理后的LNCaP细胞株,其凋亡抑制蛋白BCL-2的表达随时间延长而明显下降.结论低剂量顺铂可以增强TRAIL对前列腺癌细胞的杀伤效应,效果优于两种药物的单独使用;凋亡抑制蛋白BCL-2可能是肿瘤细胞抵抗TRAIL诱导凋亡机制中的一个重要因素.     

Expression of TRAIL and its receptors in primary hepatic carcinoma and apoptosis-inducing effect of HrsTRAIL on hepatoma cell line HepG2

Objective： To investigate the expression of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand（TRAIL） and its receptors in primary hepatic carcinoma （PHC） and the apoptosis-inducing effect on hepatoma cell line HepG2. Methods： TRAIL and its receptors were detected by semiquantitive RT-PCR in 30 PHC and para-carcinoma tissues and two hepatoma cell lines of HepG2 and SMMC-7721. HepG2 cells were treated with human recombinant soluble TRAIL protein （HrsTRAIL） and then the viability of HepG2 cells was measured by microculture tetrazolium dye（MTT） assay and apoptosis index was demonstrated by fluorescence-activated cell sorting （FACS）. Results：TRAIL and its receptors were detectable in all PHC and para-carcinoma tissues and hepatoma cell line HepG2. TRAIL, death receptor 4 （DR4）, DR5, and decoy receptor 2 （DcR2） but not DcR1 were detectable in hepatoma cell line SMMC-7721. The expression patterns of TRAIL receptors in HepG2 were quite similar to PHC specimens. The semiquantitive results showed that the expression level of TRAIL and DcR were lower but DR was higher in hepatoma tissues than in para-carcinoma tissues. In PHC tissues, the expressions of DR were higher than DcR, while there was no difference in para-carcinoma tissues. HrsTRAIL had potent antitumor activity in a time- and dose-dependent manner. After co-incubations of the HepG2 cells in the presence of HrsTRAIL at concentration 1 000 ng/ml for 24 hours, the viability of HepG2 cells decreased to 45% and the apoptosis index reached 51%. Conclusion ：TRAIL and its receptors were expressed in both PHC tissues and para-carcinoma tissues but the expression levels were different. The lower expression of TRAIL in PHC tissues suggested that insufficient apoptosis occured in the development of PHC. High expression of DR in PHC tissues may be a self-defense mech- anism and may afford a theory of HrsTRAIL therapy for PHC. HrsTRAIL may be a potential cytotoxic drug for PHC, and it can kill majority of HepG2 cells, but minority of HepG2 were resistant to TRAIL-inducing apoptosis.     

大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用的研究

目的研究大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖抑制、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法用不同浓度的大蒜素作用于体外培养的HepG2细胞,采用MTT法检测大蒜素对HepG2细胞增殖抑制能力,荧光显微镜观察HepG2细胞的形态学变化,流式细胞术检测大蒜素对HepG2细胞周期和凋亡率的影响。结果大蒜素可抑制人肝癌HepG2细胞增殖,且具有明显剂量和时间依赖性,24h、48h和72h大蒜素抑制HepG2细胞的IC50分别为(48.26±1.66)μg/mL、(31.89±1.51)μg/mL和(23.79±1.32)μg/mL。32μg/mL大蒜素作用HepG2细胞48h,可诱导其产生明显的细胞凋亡特征。流式细胞术检测表明大蒜素作用HepG2细胞后,可将细胞阻滞在G2/M期。结论大蒜素对人肝癌HepG2细胞增殖具有抑制作用,可能与诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期有关。     

芦丁对HepG2细胞生长的影响

目的 观察芦丁(Rutin)对人肝癌HepG2的生长和增殖的影响.方法 体外培养HepG2细胞,用甲基塞唑基四唑(MTT)法、3H-TdR掺入法测定芦丁对人肝癌HepG2的生长和增殖抑制情况,并且用荧光染色法在Olympus荧光显微镜下观察芦丁对HepG2细胞凋亡的影响,流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 芦丁能抑制HepG2细胞的生长、增殖、诱发细胞凋亡;在50～250 μmol/L浓度范围内处理的HepG2,G0/G1期细胞增加,G2/M期细胞减少,细胞周期阻滞于G0/G1期.结论 芦丁能抑制HepG2细胞的生长,并诱发细胞凋亡,呈浓度依赖性.     

二硫化二砷对肝癌细胞凋亡和坏死的影响

目的观察二硫化二砷（As2S2）对人肝癌细胞株（BEL-7402）凋亡和坏死的影响。方法人肝癌细胞株BEL-7402经不同浓度A82s2处理后,采用MTT法进行细胞增殖抑制率的测定,台盼蓝排染法观察As2S2对肝癌细胞的细胞毒作用,通过流式细胞仪定量检测细胞凋亡和坏死的情况,同时检测凋亡相关蛋白Fas和Apo2．7的表达。结果As2S2对细胞有明显细胞毒作用,并且可诱导细胞凋亡的产生,上调Apo2．7和Fas蛋白的表达。结论A22S2具有促肝癌细胞凋亡和坏死的作用。     

解毒消癥饮对肝癌细胞株HepG2线粒体膜电位的影响

目的 探讨中药复方解毒消癥饮诱导肿瘤细胞凋亡的机制. 方法 采用体外培养人肝癌细胞株HepG2,用解毒消癥饮含药血清干预24 h,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测线粒体膜电位的改变. 结果 解毒消癥饮含药血清组与对照组和空白血清组比较,细胞增殖明显抑制,线粒体膜电位明显下降,差异有统计学意义(P<0.05). 结论 解毒消癥饮诱导人肝癌细胞株HepG2凋亡的机制可能是通过崩溃线粒体跨膜电位,从而引发细胞早期凋亡.     

Caspases在TRAIL诱导MG-63骨肉瘤细胞株凋亡中的作用

目的 :初步观察并探讨人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TNF relatedapoptosis inducinglig and ,TRAIL)蛋白诱导MG 6 3骨肉瘤细胞凋亡的作用机制。方法 :用RT PCR检测TRAIL受体在MG 6 3骨肉瘤细胞上的表达 ;用MTT试验检测TRAIL对MG 6 3细胞的抑制率及加入Caspase抑制剂后TRAIL对MG 6 3骨肉瘤细胞株抑制率的变化。初步分析TRAIL诱导MG 6 3骨肉瘤细胞株凋亡的作用机理。结果 :当TRAIL单独作用于MG 6 3骨肉瘤细胞株时 ,可产生明显的抑制效果 ;而当TRAIL分别加入广谱的Caspase抑制剂zVAD FMK、Caspase 8的抑制剂zIETD FMK、Caspase 3的抑制剂zDEVD FMK与细胞株MG 6 3共同孵育时 ,TRAIL的抑制作用均被阻断。结论 :TRAIL可能是通过与细胞膜表面的死亡受体结合 ,然后激发细胞内Caspase级联反应从而诱导肿瘤细胞凋亡的。     

熊果酸对人肝癌SMMC-7721细胞周期的影响

目的探讨熊果酸（UA）对人肝癌SMMC-7721细胞周期的影响。方法用不同浓度的UA处理SMMC-7721细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪检测细胞周期的变化,RT-PCR检测细胞周期相关基因p21、p53及增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果 UA对SMMC-7721细胞生长有显著的抑制作用,且此作用呈明显的时间、剂量依赖性;UA可以诱导SMMC-7721细胞阻滞在S期,RT-PCR结果显示其能够上调p21和p53基因,下调PCNA基因。结论 UA能明显抑制SMMC-7721细胞的生长,引起细胞周期阻滞;细胞周期阻滞的发生与p21、p53、PCNA基因变化相关。     

Biological Effects of Millimeter Wave Irradiation on Human Hepatoma Cell Line

The biological effects of 36.11GHz millimeter-wave irradiation atlow power densities (1, 2 and 3mw/cm~2) were studied on human hepatomacell line SMMC-7721 using scanning electron microscopy, histochemicalquantitative analysis of DNA by texture analysis system and cell cloningtechnique. After the irradiation, the surface structures of SMMC-7721cells were morphologically injured and both DNA content of interphasecells and clonogenic capacity of living cells were decreased significantly.     

蛋白酶体抑制剂联合表阿霉素杀伤肝癌细胞的研究

目的观察蛋白酶体抑制剂MGl32与表阿霉素（epirubicin，EPI）联合应用对人肝癌HeDG2细胞系体外生长的影响。方法实验分为4组：空白对照组；1μg／mLEPI处理组；1μmol／LMGl32处理组；1／maol／LMGl32＋1μg／mLEPI共同处理组。应用MTT法检测小剂量MGl32与表阿霉素处理后对HepG2细胞的生长抑制作用，流式细胞术检测细胞凋亡。结果MTT法显示MGl32与表阿霉素合用时对HepG2细胞的抑制率增加。流式细胞术测定显示对照组的HepG2细胞凋亡率为（0．87±0．19）％，1μmol／LMGl32处理组细胞凋亡率为（5．53±0．99）％；1μg／mL EPI处理组细胞凋亡率为（13．8±1．37）％：1μmol／LMGl32和1μg／mL EPI共处理组细胞凋亡率增加至（27．0±1．15）％。结论小剂量MGl32与表阿霉素联合应用可增强致HepG2细胞凋亡作用。     

Cdk1在HepG2细胞的表达及活性对肝癌细胞凋亡的影响

目的观察Cdk1蛋白表达及其活性对肝癌细胞凋亡的影响。方法克隆Cdk1基因质粒和Cdk1siRNA,并将其转染到肝癌HepG2细胞中,另外应用roscovintine（Cdks的抑制剂）刺激细胞,然后给予紫外线（UV）照射。用Western Blot检测转染的Cdk1蛋白的表达,用核素标记测定其活性;用HO 33342（Hoechst 33342）的免疫荧光染色细胞核判断细胞凋亡的情况。分析Cdk1蛋白表达及活性对肝癌细胞凋亡的影响。结果 Cdk1可以在HepG2良好地表达;Cdk1siRNA可以有效地沉默Cdk1的表达;roscovintine可抑制Cdk1的活性;细胞凋亡率在roscovintine刺激细胞时最高比较Cdk1转染细胞组和Cdk1siRNA转染细胞组（P〈0.01）,在Cdk1转染细胞高于Cdk1siRNA转染细胞组（P〈0.01）和空载体转染细胞组（P〈0.05）,在Cdk1siRNA转染细胞最低。结论过度表达Cdk1可以增加肝癌细胞死亡,抑制肝癌的增殖。抑制Cdk1活性可更有效增加肝癌细胞死亡,抑制肝癌的增殖,可望成为研究和探讨肝癌靶点之一。