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1.
目的 探讨将不同方法诱导的骨髓间充质干细胞(MSCs)移植到心肌梗死部位后对梗死心肌的修复作用。方法 自成年大鼠骨髓中分离MSCs,分别以下列方式诱导:A组,用心肌细胞裂解液培养7d后移植;B组,MSCs与心肌细胞按1:4的比例共同培养7d后移植;C组,用5-氮杂胞苷(10μmol/L)诱导24h后,换DMEM培养液培养21d后移植;D组(对照组),用DMEM培养液培养21d后移植。建立大鼠心肌梗死模型,将上述4组MSCs进行DAPI标记后移植于梗死部位。用超声心动图检测移植前和移植30d后心肌功能的改变,苏木精-伊红染色观察移植细胞形态。结果 A、B组移植后大鼠左室舒张末期内径(LVEDD)和收缩末期内径(LVESD)比移植前减小,A、B、C组左室收缩功能指标射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)明显比移植前改善。D组移植前后大鼠各指标差异无显著性意义。A、B组移植后镜下可见DAPI标记的MSCs表现为成熟细胞形态,排列在残存的宿主心肌细胞之间,具备与宿主心肌细胞相似排列方向和形态学的特征。C、D组移植后镜下也可见到DAPI标记的细胞,但与宿主心肌细胞形态不同,小部分为成熟心肌细胞形态,大部分为成纤维细胞形态。结论 用与心肌细胞共培养和用心肌细胞裂解液培养两种方法诱导的MSCs移植于心肌梗死部位后,分化为心肌样细胞的效率高,模型鼠心功能恢复显著。 相似文献
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移植时机对骨髓间充质干细胞修复梗死心肌的影响 总被引:14,自引:1,他引:14
目的:观察心肌梗死后不同炎症微环境对骨髓间充质干细胞(MSCs)移植后在大鼠梗死心肌中的定位、存活及分化情况,探讨细胞治疗的最佳时间窗. 方法:建立大鼠左冠状动脉结扎的心肌梗死模型,心肌梗死后1 h及1,2,4,8 wk分别取心脏进行组织学观察;将经过4',6-二脒-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole, DAPI)标记的同种骨髓间充质干细胞在心肌梗死后1 h及1,2,4,8 wk移植到心肌梗死边缘区(每组n=10),对照组心肌梗死后1 h注射等量培养基(n=10). 心肌梗死后不同时间点采集心脏标本进行HE染色观察炎症反应的变化,细胞移植治疗各组在心肌梗死后8 wk测定心脏功能、心脏瘢痕面积以及免疫组化染色鉴定细胞分化情况. 结果:分离纯化的大鼠MSCs经流式细胞术鉴定为CD44 CD90 /CD34-CD45-CD31-,心肌梗死后1 wk梗死相关区的炎症反应较强,2 wk时减弱, 4~8 wk时瘢痕完全形成并出现左室重塑. 1 wk移植组未发现有移植细胞存活, 左室心功能及瘢痕面积百分比与对照组相似,1 h及2,4 wk细胞移植组心肌组织冰冻切片中可观察到大量标记细胞存在,并向周围迁移分布,免疫组化显示阳性标记细胞desmin, ctnI 阳性,左室血流动力学指标及瘢痕面积百分比与对照组比较均有改善(P<0.05), 2 wk的左室收缩末压力、左室最大上升速率及瘢痕面积百分比的改善优于1 h组和4 wk移植组(P<0.05). 结论:心肌梗死后炎症反应强烈, 不利于移植细胞的存活,而在炎症减弱的瘢痕修复早期尽早进行MSCs移植可能对于细胞的存活及心功能的恢复较为有利. 相似文献
3.
通常认为哺乳动物心肌细胞是终末分化细胞,不能再生。心肌细胞坏死后.心脏纤维组织增生,心室重塑,心功能下降,最终发展成慢性心力衰竭。再灌注治疗,不能修复及逆转已坏死的心肌细胞,慢性心衰患的远期生存率低,预后差。 相似文献
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目的:研究骨髓间质干细胞在梗死心肌移植后的心肌再生作用。方法:贵州香猪24只,随机分为对照组(C组),实验组(E组)。抽取骨髓液3ml,按照Wakitani的方法培养出骨髓间质干细胞,经5-氮胞苷诱导后,BrdU标记备用。开胸结扎冠状动脉前降支,自体骨髓间质干细胞分别经局部注射和结扎的左冠状动脉前降支远端灌注移植入自体急性心肌梗死区域,C组以DMEM对照。术后3,6周取心肌标本行免疫组化、电镜检测。结果:梗死区域可观察到标记的骨髓间质干细胞,这些细胞能表达肌球蛋白重链(MHC),缝隙连接蛋白-43(Cx-43),心肌特异性肌钙蛋白1(cTnTI),电镜下有肌丝形成。结论:骨髓间质干细胞在梗死心肌内移植具有分化再生的能力。 相似文献
5.
目的 探讨VEGF基因治疗和MSCs移植各对梗死心肌组织的影响.方法 将相同基因背景的SD雄性大鼠30只随机分成A、B、C三组.建立心肌梗死模型后,MSCs组注射MSCs 4×106 cells/50 μl.AdVEGF组注射AdVEGF 5×107 pfu 50μl.Control组(对照组)注射无血清IMDM培养液50 μl.移植前、移植后2、4周分别用超声检测心功能.病理中检测细胞存活分化和血管新生情况.结果 MSCs组移植2、4周后AdVEGF组与Control组相比,心功能较移植前有明显改善(P<0.01),而且病理提示大部分MSCs己向心肌样细胞分化.MSCs组和AdVEGF组都有促血管新生作用,MSCs组为(5.94±1.67)mm;AdVEGF组(13.59±1.08)mm,Control组(对照组)无新生血管出现.结论 移植于梗死心肌的骨髓间充质干细胞可以存活,并在一定程度上改善了受体的心功能. 相似文献
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目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSC) 植入猪急性心肌梗死(AMI) 区的转归及治疗作用.方法:选择10只体重35~45 kg的家猪,经导管应用球囊封堵前降支动脉,建立心肌梗死模型,将存活的9只动物随机分为2组:(1)实验组5只,取骨髓分离BMSC体外培养扩增,建立模型2周后,通过心肌注射的方法将自体骨髓BMSC 移植至AMI 区;(2)对照组4只动物注射等量生理盐水.4 周后比较2组的生存率、心功能变化、心肌功能性蛋白质表达的差异.结果:BMSC移植后,实验组动物心功能得到明显改善,梗死区室壁运动速度加快,局部室壁厚度加快,心肌移植细胞部位表达连接蛋白GATA-4等心肌功能性蛋白质.结论:骨髓BMSC 经冠脉转运在心肌微环境下可向心肌细胞分化,并能改善心功能. 相似文献
8.
目的 研究经冠状动脉注射自体骨髓间充质干细胞对心肌梗死后左心室舒缩功能和血清TGF-β1、MMP-1的影响.方法 10只太湖梅山猪通过介入栓塞冠状动脉建立心肌梗死动物模型.随机分为移植组,梗死4周后注射MSCs;对照组,梗死4周后注射DMEM;每组5只.抽取实验猪髂骨骨髓体外分离、培养、纯化,得到MSCs,通过介入法将约1.0×107的MSCs注入梗死4周的实验猪冠状动脉栓塞远端.观察移植后1周、4周时的左心室舒缩功能变化,观察不同时点血清TGF-β1和MMP-1的含量.结果 MSCs移植后4周,+dp/dtmax、-dp/dtmax较移植前和对照组明显提高(P<0.01);干细胞移植后不同时点的血清TGF-β1含量不断减少但到2周时达谷值(P<0.01),对照组仅有轻度的下降趋势;干细胞移植后1周时的血清MMP-1含量增加,2周后达到高峰(P<0.01),而对照组则稳定维持在移植前水平.结论 经冠脉自体MSCs移植能够明显改善心肌梗死后左心室的舒缩功能,降低TGF-β1在血清中的水平,同时促进MMP-1的合成、分泌. 相似文献
9.
目的研究巨噬细胞吞噬骨髓间充质干细胞(MSCs)后对梗死心肌的修复作用以及可能的机制。方法体外分离培养MSCs,经流式细胞仪分离纯化及进一步缺氧诱导凋亡后与脂多糖激活的巨噬细胞共培养48h,随后获得吞噬了MSCs的巨噬细胞(pMΦ)。将磷酸盐缓冲液(阴性对照组)、MSCs(阳性对照组)、pMΦ(实验1组)、巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α+pMΦ(实验2组)经尾静脉注射入急性心肌梗死(AMI)后BALB/C小鼠体内。应用磁共振及多光谱分析仪分析移植后细胞在梗死区的定植及强度,小鼠心脏超声分析移植细胞对小鼠梗死心肌的修复作用,流式细胞技术及弹力纤维染色分析移植细胞修复小鼠梗死心肌的可能机制。结果多光谱分析显示,与阴性对照组相比,阳性对照组、实验1组和实验2组的细胞均可定植于梗死心肌局部,实验1组的相对荧光强度显著高于阳性对照组(P<0.001),但显著低于实验2组(P<0.001)。AMI后两周小鼠超声心动图显示,阳性对照组、实验1组和实验2组治疗后的射血分数均较阴性对照组有显著改善,其中实验2组的改善最为明显,其次为实验1组,两两比较差异均有统计学意义(P值均<0.001)。弹力纤维染色显示,与阴性对照组比较,阳性对照组、实验1组和实验2组细胞移植治疗后小鼠的心肌梗死面积均显著缩小(P<0.001),实验1组的心肌梗死面积占左心室面积比例显著低于阳性对照组(P<0.001),但仍显著高于实验2组(P<0.001);实验1组的梗死区弹性纤维占梗死区瘢痕的比例显著高于阳性对照组(P<0.001),但与实验2组的差异无统计学意义(P=0.32)。经胰酶消化及流式细胞仪检测结果显示,与阴性对照组比较,阳性对照组、实验1组和实验2组梗死区附近及外周血中修复性的巨噬细胞显著增多(P值均<0.001),阳性对照组、实验1组、实验2组的CD86阳性巨噬细胞比例依次增多,组间差异均有统计学意义(P值均<0.001)。结论 AMI后移植的pMΦ可有效定植于梗死心肌并显著改善梗死后的心脏功能,其机制与促进弹力纤维增生及促使更多修复性巨噬细胞的动员与募集有关,MIP-1α可增强这种作用。 相似文献
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骨髓间充质干细胞(BMSCs)是一种具有多向分化潜能和自我复制功能的非造血干细胞。BMSCs移植在治疗急性心肌梗死方面已经表现出传统治疗方法无可比拟的优越性。BMSCs可以在梗死的心肌中分化形成有功能活化的心肌、血管、内皮等组织,从而改善心脏的功能。但对于BMSCs移植的最佳治疗途径、最佳治疗时机、评价手段和长期安全性等仍存在着质疑。随着细胞生物工程技术的发展,BMSCs移植将成为血管成形术后另一种治疗心肌梗死的突破性的治疗方法。 相似文献
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目的探讨基因重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)动员骨髓干细胞对急性心肌梗死动物模型的治疗作用。方法将60只SD大鼠随机分成对照组和治疗组,结扎冠状动脉左前降支建立大鼠心肌梗死实验模型。治疗组在复制大鼠心肌梗死模型3h后用经生理盐水稀释的rhGCSF(2mg·L-1)皮下注射10μg·kg-1·d-1,共5d;对照组复制大鼠心肌梗死模型3h后皮下注射等量生理盐水,共5d。在复制大鼠心肌梗死模型24、48h和2周后,两组分别先后各取10只大鼠行在体心功能(±dpdtmax)测定,测定完毕后各组随机选取6只大鼠处死行心脏梗死范围的测量,其余大鼠处死取出心脏行HE染色及CD34+免疫组织化学分析。结果结扎冠状动脉左前降支24、48h和2周后治疗组±dpdtmax均高于对照组(P<0.01);治疗组心脏梗死范围低于对照组(P<0.01)。病理检查显示对照组心肌梗死区周围有较多以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润,而治疗组大鼠心肌坏死程度较对照组轻,浸润的细胞以CD34+的单个核细胞为主,并可见新生的心肌细胞生长。结论rhGCSF动员自体骨髓干细胞原位移植可修复梗死心肌、减少梗死范围、提高心功能,可用于急性心肌梗死的治疗。 相似文献
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Improvement of cardiac function after transplantation of autologous bone marrow mesenchymal stem cells in patients with acute myocardial infarction 总被引:54,自引:2,他引:54
Chen SL Fang WW Qian J Ye F Liu YH Shan SJ Zhang JJ Lin S Liao LM Zhao RC 《中华医学杂志(英文版)》2004,117(10):1443-1448
Background The infarct size determines the long-term prognosis of patients with acute myocardial infarction (AMI). There is a growing interest in repairing scar area by transplanting bone marrow stem cells. However, effectiveness of intracoronary injection of bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) in patients with AMI still remains unclear.Methods Sixty-nine patients with AMI after percutaneous coronary intervention (PCI) were randomly divided into intracoronary injection of BMSCs (n=34) and saline (control group, n=35) groups. Serial single positron emission computer tomography (SPECT), cardiac echo and cardiac electromechanical mapping were done at the designed time intervals until six months after transplantation of BMSCs or injection of saline. Results The proportion with functional defect decreased significantly in the BMSCs patients after three months [(13±5)%] compared with that pre-transplantation [(32±11)%] and the control group [(28±10)%] at three month follow-up (P<0.05, respectively). Wall movement velocity over the infracted region increased significantly in the BMSCs group [(4.2±2.5) cm/s vs (2.2±1.3) cm/s, P<0.05], but not in the control group [(2.2±1.5) cm/s vs (2.7±1.7) cm/s, P>0.05]. Left ventricular ejection fraction (LVEF) three months after transplantation in BMSCs group increased significantly compared with that pre-implantation and with that of the control group at three months post-injection [(67±11)% vs (49±9)% and (53±8)%, P<0.05 respectively]. SPECT scan results showed that perfusion defect was improved significantly in BMSCs group at three-month follow-up compared with that in the control group [(134±66)cm2 vs (185±87)cm2, P<0.01]. At the same time, left ventricular end-diastolic volume [(136±31) ml vs (162±27) ml, P<0.05] and end-systolic volume [(63±20) ml vs (88±19) ml, P<0.05] decreased synchronously. The ratio of end-systolic pressure to end-systolic volume [Psyst/ESV, (2.84±1.30) mmHg/ml vs (1.72±1.23) mmHg/ml, P<0.05] increased significantly. Cardiac electromechnical mapping demonstrated significant improvement at three months after implantation of BMSCs compared with that pre-injection in both cardiac mechanical capability as left line local shorting [LLS, (11.29±1.64)% vs (7.32±1.86)%, P<0.05] and electrical property as left ventricular endocardial unipolar voltage [UV, (10.38±1.12) mV vs (7.61±1.09) mV, P<0.01]; perfusion defect decreased from (36.2±6.2) % to (20.3±5.31)% (P<0.01). Twenty-four-hour electrocardiographic monitoring demonstrated no arrhythmias occurred at three-months follow-up.Conclusions The transplantation of BMSCs might improve the cardiac function and it is safe and feasible with no deaths or malignant arrhythmias. 相似文献
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目的 研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC) 缺血心肌内移植早期对心肌细胞凋亡、血流动力学及左心室功能的影响.方法 采用密度梯度离心+ 贴壁培养方法分离培养Wistar 大鼠MSC,结扎左前降支建立急性心肌梗死(AMI)模型,结扎后30min 随机分为MSC 组( 于梗死边缘分4 点心肌内注射1×106 /0.1ml 的MSC,10 只),AMI 组( 同法心肌内注射PBS 0.1ml,10 只),假手术组(SHAM 组,5 只).监测细胞移植后72h 血流动力学、超声心动图及TUNEL 心肌细胞凋亡的变化.结果 与SHAM 组相比,AMI 大鼠血流动力学恶化,表现为平均动脉压、左心室收缩压明显下降,左心室舒张末压显著升高,左心室射血分数及缩短分数均显著降低,梗死及缺血区心肌细胞凋亡比例分别为41.6% 和18.9% ;MSC移植减少梗死及缺血区心肌细胞凋亡32% 和51%(P 均<0.01),但对大鼠的平均动脉压、左心室收缩压、左心室舒张末压及左心室功能无明显改善作用(P 均>0.05).结论 MSC 移植早期能减少心肌细胞凋亡但不改善急性心肌梗死后大鼠的心功能. 相似文献
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目的 探讨兔心肌梗死后骨髓基质干细胞移植对心肌交感神经表达及心功能的影响.方法 27只日本大耳白兔随机分为3组,骨髓基质干细胞(MSCs)移植组、心肌梗死对照组(MI only)和正常对照组(control).移植组和心梗对照组建立心梗模型.移植后8周测左室压力变化.鉴定植入细胞,免疫组化法检测各组交感神经的范围.结果 MSCs移植组左心室心肌内可见BrdU阳性细胞,两对照组未见BrdU阳性细胞.MSC移植组左室舒张末压(LVEDP)低于对照组,左室收缩峰压(LVSP)、左室压上升最大速率( dp/dt)高于对照组(均为P<0.05).MSC移植组与心梗对照组较正常对照组相比有更多交感神经表达(P<0.01),但前两者之间无显著差异.结论 骨髓基质干细胞移植于梗死心肌,可在梗死区及周边区存活,改善心功能.对交感神经表达无显著影响. 相似文献
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目的探讨曲美他嗪(TMZ)能否改善骨髓间质干细胞(MSCs)在体外缺氧模型及急性心肌梗死(AMI)大鼠心脏的存活。方法加入或未加入TMZ的MSCs在无血清培养基培养并缺氧暴露12h,采用透射电子显微镜和流式细胞仪检查第3代MSCs的活力和凋亡。30只Wistar大鼠随机分为AMI对照组、MSCs组及(MSCs+TMZ)组,结扎左冠状动脉前降支制备AMI模型。将MSCs注入梗死心肌边缘[(MSCs组和(MSCs+TMZ)组)]。(MSCs+TMZ)组的大鼠在AMI前3d开始至AMI后28d加喂TMZ。移植28d后,超声心动图评估心脏结构和功能。免疫荧光染色检测移植细胞在体内的存活和分化。TUNEL法检测细胞凋亡。收集TMZ治疗开始前和AMI后24、48h的血液样本,测量C反应蛋白(CRP)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化。结果缺氧培养下,TMZ处理过的MSCs细胞凋亡降低了一半。在体内与AMI对照组相比,MSCs组和(MSCs+TMZ)组的心肌梗死面积显著缩小,心功能明显改善。与单纯MSCs移植相比,TMZ与MSCs移植的组合治疗表现出了更低的干细胞凋亡、更高的干细胞存活、更小的心肌梗死面积和进一步改善的心功能。各组之间CRP、TNF-α的基线水平并无显著差异,然而24h时(MSCs+TMZ)组的所有参数均低于MSCs组。结论 MSCs移植添加TMZ治疗AMI增加MSCs存活和心脏功能的恢复上优于单纯MSCs移植,抑制炎症因子表达可能是其机制之一。 相似文献
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目的:探讨在双特异抗体(Bispecific antibody,BiAb)的辅助下,骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植干预心肌纤维化的效果.方法:以anti-CD29(能识别间充质干细胞)和抗肌凝蛋白轻链抗体(Anti-myosin light chain antibody,AMLCA)(能特异性结合损伤心肌)制备BiAb(CD29×AMLCA).将此BiAb与雄性小鼠BMSCs经尾静脉输入异丙肾性心肌纤维化雌性小鼠(BMSCs+BiAb组).另设单纯BMSCs组、单纯BiAb组、正常对照组、未治疗组.5周后处死小鼠,荧光定量PCR检测心肌y染色体鉴别基因(Sex-determining region of Y-chromosome,SRY)、基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinases-9,MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(Tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的表达.天狼猩红染色比较心脏胶原含量.结果:BMSCs+BiAb组的干细胞归巢数比BMSCs组多(P<0.05).与未治疗组相比,BMSCs+BiAb组和单纯BMCSs组的心肌MMP-9和TIMP-1表达下调,心脏胶原沉积降低(P<0.05).与BMSCs组相比,BMSCs+BiAb组的心肌纤维化改善更为明显(P<0.05).结论:CD29×AMLCA双特异抗体可促进小鼠骨髓间充质干细胞的归巢.BMSCs归巢后能改善缺血心肌MMP-TIMP表达,干预心肌纤维化. 相似文献
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目的研究脐血间充质干细胞(MSCs)移植对心肌梗死区域旁残存心肌组织的影响。方法自孕犬脐血中分离、培养MSCs,经Laz基因转染和5-氮胞苷体外肌源性诱导后移植入犬急性心肌梗死模型(移植组,n=18)。分别于移植后1、4、8周处死动物,取心肌组织标本行TUNEL染色观察残存细胞凋亡情况并计算凋亡指数;应用激光共聚焦扫描显微镜图像分析系统检测残存心肌细胞体积;Nagar-Olsen染色观察心肌胶原网络的变化。以等量生理盐水注射作为移植对照组(n=18)。结果与对照组比较,移植组缺血区部各时间点切片位观察到凋亡细胞数目显著减少,凋亡指数明显降低;残存心肌细胞肥大明显;移植后第8周,心肌组织内胶原纤维排列整齐、规律。结论脐血MSCs移植可通过减少心肌细胞凋亡、促使残存心肌细胞肥大、调节心肌胶原网络而改善心功能。 相似文献
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目的探讨人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)在mdx鼠体内的动态分布特点。方法用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记hBM-MSCs,将1×107个干细胞(0·3ml)经尾静脉注入免疫抑制的mdx鼠(8~10周龄)体内。于移植后48h、2、4、8、12、16、20、24周处死鼠,用免疫荧光法检测各组织器官的BrdU阳性细胞核数、骨骼肌人细胞核(Hu)及人抗肌萎缩蛋白(Dys)的表达,RT-PCR检测人Dys mRNA的表达。结果移植后4周内,BrdU阳性细胞核可见于多数组织、器官,其中以骨髓、肝、肺较多;肝、肺BrdU阳性细胞核数4周后逐渐下降;移植后48h骨髓BrdU阳性细胞核数较多,2周最多,16周后仍维持较高水平;4周后骨骼肌的BrdU阳性细胞核数逐渐增加。移植后2周骨骼肌检测到少量人特异性抗核抗体(anti-Hu)阳性细胞核,4周后在骨骼肌肌膜可见少量人特异性Dys阳性细胞,8周后有Dys mRNA的表达;随着移植时间的延长,anti-Hu抗体阳性细胞核数和Dys阳性细胞比例逐渐增高,DysmR-NA的表达逐渐增强。结论hBM-MSCs移植mdx鼠后早期(2~4周)主要分布在骨髓、肝、肺,后期(4周后)主要分布在骨髓、骨骼肌。 相似文献
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自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死的临床研究 总被引:4,自引:0,他引:4
目的研究自体骨髓干细胞经冠脉移植对心肌梗死患者心功能的影响及其安全性。方法6例冠心病伴心肌梗死患者,男5例、女1例,平均年龄62岁(51~75岁),体外分离培养自体骨髓干细胞2~3周,开通梗死相关“罪犯”血管,通过冠脉转运将骨髓干细胞植入患者的心肌梗死区,移植的骨髓间充质干细胞数为(0.9~3.2)×106个,骨髓单个核细胞数为(1.6~5.3)×106个。术前和术后6个月分别行99mTc-MIBI心肌灌注显像、二维超声心动图、心电图和动态心电图检查。结果6例患者二维超声心动图检查示左室射血分数(LVEF)较术前明显增加[(52.33±8.70)%vs(42.92±12.60)%,P<0.05],左室舒张期内径(LVDd)较术前明显减少[(54.33±4.84)vs(61.67±6.83),P<0.05];6例99mTc-MIBI检查显示梗死部位心肌灌注明显改善。术中及术后随访6~18个月无心律失常和其他合并症发生。结论进行自体骨髓干细胞经冠脉移植治疗冠心病、心肌梗死具有抑制左室重构、改善心脏功能的作用。 相似文献