罗汉果苷V促进LncRNA TUG1表达刺激成骨细胞的增殖与分化

文题释义：长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)：是长度大于200个核苷酸的非编码RNA,在表观遗传调控、细胞周期调控和细胞分化调控等众多生命活动中发挥重要作用,是近年遗传学领域研究的热点对象。罗汉果皂苷V：是一种三萜糖苷,可从罗汉果提取物中分离出来,具有抗氧化、降血糖、抗癌等活性的天然化合物。前期研究中,课题组发现罗汉果皂苷V可刺激成骨细胞增殖、分化。 背景：骨质疏松是骨在进行重塑的过程中,成骨细胞的骨形成和破骨细胞的骨吸收之间的动态平衡紊乱所致。在细胞水平严格控制骨重建,对于维持骨稳态和避免发生骨质疏松有重要意义。前期研究表明1.25×10^-2 g/L的罗汉果苷V可促进成骨细胞增殖、分化,其机制可能涉及LncRNA TUG1。目的：探讨LncRNA TUG1在罗汉果苷V促进成骨细胞增殖与分化中的作用。方法：采用两步酶消化法提取SD乳鼠成骨细胞,随后将细胞分为2组,分别给予0,1.25×10^-2 g/L的罗汉果苷V干预,干预培养2 d后进行LncRNA基因检测;设计并合成LncRNA TUG1沉默病毒,将新提取的成骨细胞分为正常细胞对照组、罗汉果苷V干预组、罗汉果苷V+阴性病毒组、TUG1沉默组、罗汉果苷V+TUG1沉默组。按实验分组对成骨细胞进行干预处理,随后分别在2,4,6 d后通过FDA荧光染色观察成骨细胞增殖活性,干预6 d后通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色及qRT-PCR检测 TUG1在罗汉果苷V促进成骨细胞增殖与分化中的作用。结果与结论：①LncRNA基因检测表明1.25×10-2 g/L的罗汉果皂苷显著促进成骨细胞内LncRNA TUG1表达;②FDA荧光染色显示TUG1沉默可抑制罗汉果苷V促进成骨细胞增殖;②干预6 d后,碱性磷酸酶染色及茜素红染色实验均显示TUG1沉默可抑制罗汉果苷V促进成骨细胞成骨矿化;③qRT-PCR结果显示成骨分化相关基因RUNX2、BSP、OCN和COL1A1在罗汉果苷V干预组显著高表达,而在罗汉果苷V干预+TUG1沉默组则表达受抑制;④以上结果表明,罗汉果苷V通过促进LncRNA TUG1表达刺激成骨细胞的增殖与分化。 ORCID: 0000-0001-8821-633X(姚顺晗) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

肺炎支原体抗原酶联免疫检测方法的建立

目的采用ELISA技术,建立肺炎支原体（Mycoplosma pneumonia）抗原检测方法。方法制备肺炎支原体的多克隆抗体,建立酶联免疫吸附法,检测标本中的肺炎支原体,对其敏感性和特异性进行检测。结果本方法可以检测毒株的1／2^12的稀释样品,对甲型流感病毒（H3N2亚型、H1N1亚型）、乙型流感病毒、副流感病毒（Ⅰ型、Ⅲ型）、呼吸道腺病毒（Ⅲ型、Ⅶ型）、肺炎衣原体无特异性反应。结论本肺炎支原体抗原检测方法可用于疑似肺炎支原体感染样品的临床诊断和鉴别诊断。     

基于不同载体制备黄芪甲苷人工抗原的研究

目的:比较牛血清白蛋白(BSA)和匙孔型血蓝蛋白(KLH)两种蛋白载体合成黄芪甲苷人工抗原的免疫原性。方法:用高碘酸钠法将黄芪甲苷(AST)分别与蛋白载体BSA和KLH偶联成AST-BSA及AST-KLH免疫6~8周龄的BALB/c雌性小鼠,测定其血清抗体效价;以卵清白蛋白(OVA)为载体蛋白同样以高碘酸钠法合成AST-OVA作为包被抗原。多抗血清经间接酶联免疫吸附法(indirect enzyme-linked immunosorbent assay,iELISA)和间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)检测其抗体效价及特异性。结果:经AST-KLH免疫的多抗血清较之AST-BSA免疫的特异性要高,与AST进行竞争酶联免疫检测,其IC50值约为5μg/ml。两种人工抗原免疫所得血清抗体效价均为1∶51 200左右。结论:AST-KLH具有更好的免疫原性,本次实验为进一步建立黄芪甲苷的免疫学检测方法奠定了研究基础。     

重组抗原Em18双抗原夹心酶联免疫吸附试验法检测泡球蚴抗体的建立及初步评价

目的 建立双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测泡状棘球蚴抗体的方法.方法 重组抗原Em18(rEm18)作为包被抗原,以辣根过氧化物酶(HRP)标记rEm18抗原为检测抗原,建立检测人血清中泡状棘球蚴抗体的双抗原夹心ELISA方法;应用方阵滴定法对包被抗原、酶标抗原等条件进行优化,并对该系统的灵敏性、特异性、重复性进行初步分析评价.结果 rEm18最佳包被浓度为2.5μg/mL,HRP标rEm18稀释度为1∶800.灵敏度为92％(46/50),特异性为94％(47/50),假阴性率为8％ (4/50),假阳性率为6％ (3/50),批内变异≤9.55％,批间变异≤14.79％,与Em2-ELISA试剂盒检测结果有良好的一致性.结论 本研究成功建立了快速检测泡球蚴特异性抗体的ELISA法,其可以用于人泡球蚴病的早期诊断.     

快速检测游离前列腺特异性抗原 ELISA 方法的建立

 目的 建立快速检测人血清中游离前列腺特异抗原（f-PSA）的 ELISA 方法。 方法 利用抗 f-PSA 的单克隆抗体（单抗）杂交瘤细胞株，一株单抗 2D1 用于固相包被，另一株单抗2E4进行辣根过氧化物酶标记，采用二步法，建立定量测定人血清 f-PSA 的双抗体夹心ELISA法。对该法的敏感度、精密度、准确性、特异性进行了分析。应用该法与瑞典 CanAg 公司的f-PSA ELISA 试剂盒同时检测了 18 例前列腺癌和 25 例前列腺增生患者血清标本的 f-PSA 含量，进行了两种方法检测结果的相关性分析。 结果 以双抗体夹心 ELISA 法检测 f-PSA，在 f-PSA 0 ~ 20 μg/L 范围内线性良好；敏感度为 0.025 μg/L；批内变异系数为 4.5% ~ 6.2%，批间变异系数为 3.9% ~ 7.2%；回收率为 94.3% ~ 111.1%；与 α1 抗糜蛋白酶结合的结合型PSA 交叉率为 0.7 %；检测 43 份临床标本 f-PSA 含量的结果与瑞典 CanAg 公司 f-PSA 试剂盒检测结果的相关系数为 0.995。 结论 所建立的双抗体夹心 ELISA 方法是一种特异、敏感、简便实用的 f-PSA 快速检测方法，有助于在 PSA 低水平升高的重叠范围内（4 ~ 10 μg/L）鉴别前列腺增生与前列腺癌。     

检测抗HIV-1/2型抗体的双抗原夹心方法的建立及其试剂盒的研制

目的 建立更敏感的检测人免疫缺陷病毒（HIV）抗体的方法,并研制检测试剂盒。方法 根据HIV－1／2型的基因序列及其所编码氨基酸结构,采用固相法合成了HIV－1型的gp41.1、gp41.2、gp120、p24和HIV－2型的gp36五条多肽,混合包被酶标板作为固相抗原。用辣根过氧化物酶标记以上多肽抗原作为标记物,建立检测血清中抗HIV－1／2抗体的双抗原夹心ELISA法。同时,应用该方法制备检测HIV抗体的试剂盒,并检测三批中国卫生中药品和生物制品检定所HIV诊断试剂国家参比品。结果 建立了检测HIV－1／2抗体的双抗原夹心法。用检定所参比品检测,该方法特异性、灵敏度均为100％,变异系数小于10％。与间接法相比较其灵敏度、特异性均高于间接法（P＜0．05）。检测210份其他病种患者血清均为阴性。与GBI公司的HIV抗体诊断试剂比较,检测40份卫生部药品和生物制品检定所提供的质控参比品（阳性20份,阴性20份）,GBI试剂阴、阳性符合率及总符合率分别为100%(20/20)、85％（17／20）及92．5％（37／40）,而应用该方法所研制的诊断试剂盒、阳性符合率及总符合率为100％。该试剂已通过国家卫生部质检。与雅培公司HIV诊断试剂比较检测90份献血员血清和88份HIV－1／2型感染者血清,符合率为100％。试剂盒于37℃放置4d后的检测结果的阴、阳性判定不受影响。结论 本法特异性强、灵敏度高、稳定性好,适用于献血员的筛选和临床HIV感染的检测。     

雌酮与雌酮硫酸钠双抗夹心检测法的建立及验证比较

目的 建立雌酮和雌酮硫酸钠的双抗体夹心酶联免疫定量检测法,分别与高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)比对检测孕马尿中雌激素的含量,依据其符合性探讨雌酮C3位与雌酮硫酸钠C17位衍生物所得抗体的特异性.方法 由已制备的雌酮C3位与雌酮硫酸钠C17位衍生物分别免疫动物获得相应的单克隆抗体与多克隆抗体,分别建立各自的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法,鉴定其灵敏度、特异性、于现场测定样本,结果与HPLC结果比对. 结果 雌酮、雌酮硫酸钠衍生物小鼠单克隆抗体最佳稀释度为5 μg/mL、2.5 μg/mL,酶标多克隆抗体1∶3 000、1∶2 000,灵敏度0.515 μg/mL、0.365 μg/mL.两项结果雌激素含量与HPLC测定孕马尿中雌激素总含量呈曲线对应,但与单体含量不一致.结论 在方法学上成功建立了两种双抗体夹心ELISA法,实际应用中没能达到实验设计要求,但由此结果推断可能为制备两种雌激素衍生物时都将结构中的特征官能团进行了改造,使得制备出的抗体不能识别特征位点而致特异性不好,需要下一步实验再确定.     

单克隆抗体检测分析S．typhiO，H，Vi抗原方法的建立及初步应用

以Ｓ．ｔｙＰｈｉ全菌体免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，通过细胞融合技术，建立了分别针对Ｓ．ｔｙＰｈｉＯ９、Ｏ１２、Ｈｄ和Ｖｉ抗原的单克隆抗体（ＭＣＡｂ）杂交瘤共３０株。通过对ＭＣＡｂ的亚类、效价和表位测定等进行筛选，建立了可分别检测Ｓ．ｔｙＰｈｉ可溶性Ｏ、Ｈ和Ｖｉ抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法。检测３种抗原成分的敏感度分别为：１５．６２５ｎｇ／ｍｌ，８ｎｇ／ｍｌ和０．３０５ｎｇ／ｍｌ。检测全菌体的敏感度为１０５～１０６个／ｍｌ。检测了疑似伤寒患者的血培养物１０４份，其中２７份三种抗原检测全部呈阳性，与细菌分离的结果完全相同，从而证实此２７例为Ｓ．ｔｙｐｈｉ感染。上述结果提示：此方法具有较高的敏感性及特异性。对Ｓ．ｔｙｐｈｉ抗原成分的检测分析，将可能应用于伤寒的早期诊断。     

呼吸道合胞病毒抗原酶联免疫吸附测定检测方法的建立及应用

目的建它呼吸道合胞病毒抗原酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法,应用其对来源于本院的临床样本进行检测.方法建立ELISA方法,检测标本中的呼吸道合胞病毒,与呼吸道合胞病毒细胞培养检测方法进行对照,并利用该方法进行该病毒2007年在广州市的流行性分析.结果本方法的灵敏度略高于呼吸道合胞病毒的细胞培养检测方法,对甲型流感病毒(H3N2亚型、H1N1亚型)、乙型流感病毒、副流感病毒(Ⅰ型、Ⅲ型)、呼吸道腺病毒(Ⅲ型、Ⅶ型)无特异性反应.结论本呼吸道合胞病毒抗原ELISA检测方法可用于呼吸道合胞病毒感染的临床诊断和鉴别诊断.     

检测抗丙型肝炎病毒总抗体的双抗原夹心法的建立

以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）结构区和非结构区基因工程表达抗原及人工合成多肽包被酶标板，用辣根过氧化物酶标记抗原，建立了检测血清中抗－ＨＣＶ总抗体的双抗原夹心法。与普遍采用的检测抗－ＨＣＶＩｇＧ的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）比较，其灵敏度（１∶１２８）稍高于间接法（１∶６４），特异性相同，均为１００％。该法可同时检测抗－ＨＣＶ各类抗体，使检出率提高１０％。     

大黄素-BSA包被膜片人工抗原制备及其免疫原性与特异性检测

目的:通过大黄素-BSA包被膜片的免疫原性及特异性研究,探讨半抗原-载体包被膜片人工抗原制备法的可行性。方法:先将BSA包被于PVDF膜片,再与大黄素-偶联剂衍生物偶联,制备大黄素-BSA包被膜片,经膜片皮下包埋法免疫大鼠,用大黄素或大黄酚、大黄素甲醚包被CA膜片免疫分析法检测免疫原性和特异性。结果:大黄素-BSA包被膜片的免疫原性高于或等于液相抗原;其抗血清对三种蒽醌类化合物反应的特异性基本一致(P0.05)。结论:大黄素-BSA包被膜片抗原,具有良好免疫原性和特异性,提示用半抗原-载体包被膜片法制备人工抗原可行。     

Detection of antibodies against circulating cathodic antigen ofSchistosoma mansoni using the enzyme-linked immunosorbent assay

The applicability of aSchistosoma mansoni polysaccharide antigen, circulating cathodic antigen (CCA), for the detection of antibodies inS. mansoni infection was tested in the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Antibodies against this secretory antigen were detected in hamster infections after three weeks, while in infected humans anti-CCA antibodies could be demonstrated eight weeks after infection. Antibodies could be demonstrated both in recent and chronic infections in man, but more false-negative results were observed in chronic infections. The antibody response was composed of both IgM and IgG antibodies.This investigation received financial support from the UNDP/World Bank/WHO Special Programme for Research and Training in Tropical Diseases     

丙型肝炎病毒核心抗原C33的测定

目的探索丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｃ３３抗原在正常人群及各类临床病人血清及肝组织中分布状况。方法用人工合成的ＨＣＶ核心抗原Ｃ３３肽（含３３个氨基酸）与小鼠血清白蛋白,经异型双功能交联剂ＳＰＤＰ连接后免疫Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠,制成２株Ｃ３３肽单克隆抗体（ＭｃＡｂ）,分别用作包被抗体和酶标抗体,建立检测血清中Ｃ３３肽抗原的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,共检测了１２３６例各类病人。并用免疫荧光及固相免疫酶法检测肝活检组织中的ＨＣＶＣ３３肽抗原。结果急性丙型肝炎（ＨＣ）患者,Ｃ３３肽的阳性检出率为１４．０％（６／４３）;仅抗－ＨＣＶＩｇＧ阳性患者Ｃ３３肽的阳性检出率为８．８％（３５／３９６）;慢性丙型肝炎患者为６．５％（４／６２）;白血病患者为４．３％（１／２３）;血透病人为３．３％（１９／５７６）;普通住院病人为１．５％（２／１３６）;正常供血员为１．４％（６／４３８）。肝活检免疫荧光、固相免疫酶检测显示ＨＣＶＣ３３肽在细胞核、细胞质、细胞膜上均有表达,在胞质中或集中于全胞质一侧或弥散分布于胞质中。结论ＨＣＶＣ３３抗原测定,可以作为ＨＣＶ感染的标志物之一。     

徐州地区庚型肝炎病毒5′非编码区部分序列分析

自庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）被报道以来,许多国家、地区相继分离出该病毒的基因序列,并发现ＨＧＶ基因序列存在一定变异,ＨＧＶ不同基因区以５′非编码区（５′－ｕＴＲ）变异较小,有学者根据该区序列的变异,认为ＨＧＶ至少存在三种基因型,以最初报道的美国株ＨＧＶ（...     

山西汉族可溶性HLA-I类抗原检测

目的：定量检测正常人血清中可溶性人白细胞抗原-I（sHLA-I）,以探讨山西汉族人群的正常参考值。方法：ELISA法检测血清sHLA-I类抗原水平。将不同浓度的标准品和待捡血清分别加入包被有特异性sHLA-I抗体的酶标板,与生物素化的sHLA-I、辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素共同孵育,弃上清并用洗涤液洗涤,加底物应用液四甲基联苯胺（TMB）显色,以酶标仪450nm测定吸光度值,根据不同浓度标准品显色后测得的吸光度值绘制标准曲线,测定60例健康山西人的sHLA-I含量。结果：ELISA法能够准确检测sHLA-I含量,60例健康山西人的sHLA-I含量为（382．62±106．68）ng·ml-1。结论：山西汉族人群sHLA-I正常值为（382．62±106．68）mg·ml-1。     

非平衡法在乙型肝炎e抗体和核心抗体检测中的效果评价

目的 探讨酶联免疫吸附试验非平衡法对乙型肝炎e抗体和核心抗体检测结果的影响.方法 收集电化学发光免疫分析法（ECLIA）检测抗-HBe阳性标本44例和抗-HBc阳性标本57例,再用酶联免疫吸附试验法（ELISA）对阳性标本进行检测,样本加入反应孔中分别于0min、30min后加入酶标志物,余下步骤均严格按照说明书操作.结果 对ECLIA检测抗-HBe阳性标本44例、抗-HBc阳性标本57例进行ELISA复检后,平衡法抗-HBe的漏检率为52.3％,抗-HBc漏检率为40.4％;非平衡法抗-HBe的漏检率为34.1％,抗-HBc漏检率为24.6％.结论 竞争法检测抗-HBe和抗-HBc时应适当延迟加酶的时间,以降低漏检率.     

应用痘苗病毒载体表达的重组甲肝抗原特性的研究

目的 探讨以痘苗病毒载体表达的甲肝病毒培养合适的细胞系和重组病毒灭活以及甲肝病毒抗原保存条件.方法 将构建成功的表达甲肝抗原的重组痘苗病毒分别接种于K4、143、HEL、Hep-2和Vero等细胞,用ELISA测定重组甲肝抗原的表达产量和不同方法灭活重组病毒后的抗原活性.结果 在K4、143和HEL细胞表达重组甲肝抗原的产量略优于Hep-2和Vero细胞,重组病毒经β-丙内酯和甲醛灭活后,甲肝抗原活性不变,制备的重组甲肝抗原稳定性好.结论 痘苗病毒表达载体可以提高甲肝抗原表达效率,具有十分广阔的应用前景.     

应用痘苗病毒载体表达的重组甲肝抗原特性的研究

目的 探讨以痘苗病毒载体表达的甲肝病毒培养合适的细胞系和重组病毒灭活以及甲肝病毒抗原保存条件.方法 将构建成功的表达甲肝抗原的重组痘苗病毒分别接种于K4、143、HEL、Hep-2和Vero等细胞,用ELISA测定重组甲肝抗原的表达产量和不同方法灭活重组病毒后的抗原活性.结果 在K4、143和HEL细胞表达重组甲肝抗原的产量略优于Hep-2和Vero细胞,重组病毒经β-丙内酯和甲醛灭活后,甲肝抗原活性不变,制备的重组甲肝抗原稳定性好.结论 痘苗病毒表达载体可以提高甲肝抗原表达效率,具有十分广阔的应用前景.