穿心莲内酯对急性淋巴细胞白血病细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

目的:研究穿心莲内酯(andrographolide,AND)对急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)细胞生长和凋亡的影响。方法:人ALL细胞株CEM-C1经AND处理12 h、24 h和48 h,应用CCK-8法检测AND对细胞活力的影响;应用Wright-Giemsa染色法观察AND处理24 h对CEM-C1细胞形态及数量的影响;应用流式细胞术+annexin V-FITC/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染色法分析AND作用24 h对CEM-C1细胞凋亡的作用;采用流式细胞术+PI染色法分析AND作用24 h对CEM-C1细胞周期分布的作用;用Western blot法检测AND对CEM-C1细胞凋亡相关蛋白水平的影响;应用JC-1线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)检测试剂盒检测AND作用24 h对CEM-C1细胞MMP的影响。最后将CEM-C1细胞接种于BALB/c-nu雌性裸鼠右胁腹侧建立裸鼠ALL移植瘤模型,通过检测肿瘤体积及重量观察AND的体内抗ALL...     

增殖细胞核抗原短发夹状RNA对人骨肉瘤细胞生长的影响

目的构建增殖细胞核抗原(PCNA)短发夹状RNA表达载体,检测其对人骨肉瘤细胞PCNA表达、细胞增殖及细胞凋亡的影响。方法体外构建PCNAshRNA表达载体pSilence2.1neo-PCNA,转染人骨肉瘤细胞系MG63,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染前后PCNAmRNA表达,免疫组织化学(SP)法检测转染前后PCNA蛋白的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法及克隆形成试验检测细胞增殖活性,3H胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)细胞掺入试验检测细胞DNA合成,流式细胞仪检测细胞周期分布,吖啶橙染色法检测细胞凋亡情况。结果pSilence2.1neo-PCNA载体转染能显著抑制PCNAmRNA及蛋白的表达,转染后mRNA表达抑制率为80.51%、增殖指数值为空白组的25.68%。转染组48h细胞增殖抑制率为61.78%,转染组3H-TdR掺入率明显低于空白组(P<0.01)。细胞周期分析显示,siRNA转染组G0G1期细胞含量显著增加,而S期细胞含量显著减低。转染组凋亡率为16.54%。结论pSilence2.1neo-PCNA可显著抑制MG63细胞PCNA的表达及细胞增殖活性,促进细胞凋亡。     

饮酒对小鼠睾丸生精小管一氧化氮合酶、增殖细胞核抗原表达及细胞凋亡影响的研究

目的　探讨酒精对小鼠睾丸的组织结构、内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)、增殖细胞核抗原 (PCNA)及细胞凋亡的影响。　方法　用 5 %、10 %及 15 % 3种不同浓度的酒精作用于 2 2d龄小鼠 ,取睾丸做石蜡切片、HE染色 ;用免疫组织化学方法检测睾丸eNOS、细胞增殖的变化 ;TUNEL法检测细胞凋亡的变化 ,并进行统计学分析。　结果　随着酒精浓度的增大 ,睾丸组织结构发生明显改变 ,生精小管的直径逐渐减小 ,eNOS阳性细胞面积密度逐渐增大 ,单位面积内PCNA阳性细胞和凋亡细胞数目增加 ,高浓度酒精组与其他组差异极显著 (P <0 0 1)。　结论　酒精可使生精小管的直径变小 ,eNOS及PCNA表达增强 ,凋亡细胞增加并随酒精浓度的增大而变化加重。这可能是过量饮酒导致生精细胞减少 ,生殖能力降低的重要因素。     

增殖细胞核抗原和C-Fos蛋白在人胎胃壁组织中的表达

背景：增殖细胞核抗原表达增高可促进细胞DNA合成增加,反映细胞增殖状况。C-Fos与DNA结合可直接调节具有转录活性的转录因子,在胚胎细胞的发育过程中,对细胞的生长、分化及增殖起促进作用。 目的：观察增殖细胞核抗原和C-Fos蛋白在人胎胃组织中的表达。 方法：应用免疫组织化学法和图像分析软件检测第2,3,4三个月龄段,人胎胃组织细胞中PCNA和C-Fos蛋白阳性表达的积分吸光度。 结果与结论：第2~4个月胎龄段,增殖细胞核抗原和C-Fos蛋白在人胎胃壁各层组织细胞均呈阳性表达。随着胎龄的增大,胃壁组织中增殖细胞核抗原蛋白阳性表达先升高再降低,C-Fos蛋白阳性表达则逐渐增高(P < 0.01)。提示增殖细胞核抗原和C-Fos蛋白在人胚胎早期胃组织细胞的生长发育过程中起重要的调节作用。     

持久饥饿对涡虫转氨酶、磷酸酶、蛋白水解酶和增殖细胞核抗原的影响

目的探讨持久饥饿对涡虫转氨酶、磷酸酶、蛋白水解酶和增殖细胞核抗原(PCNA)的影响。方法采用全自动生化分析仪测定转氨酶的活性变化,用复性电泳技术分析磷酸酶和蛋白水解酶的变化,用半定量RT-PCR技术分析PCNA mRNA的表达变化。结果饥饿过程中谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性显著升高,是对照水平的10倍以上,恢复喂食后逐渐降低到正常水平;碱性磷酸酶(ALP)的活性在饥饿过程中明显减弱,而酸性磷酸酶(ACP)活性却显著增强;受饥饿影响,140kD和40kD蛋白水解酶的活性均明显增加;然而饥饿过程中PCNA的表达没有明显变化,说明饥饿对该基因的影响很小。结论持久饥饿对涡虫的生理和生化代谢有重要影响,酶活性的变化反应了涡虫适应持久饥饿的能量代谢变化。     

桃核承气汤对Bcl-2和增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

目的探讨桃核承气汤(THCQT)对S180荷瘤小鼠环磷酰胺化疗后的Bcl-2和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的影响.方法建立小鼠S180肿瘤模型,采用免疫组织化学方法测定S180小鼠Bcl-2和PCNA蛋白表达的情况.结果 Bcl-2蛋白的表达THCQT组与模型组比较t=5.29,P＜0.01,差异有统计学意义,T...     

雌激素对血管平滑肌细胞中c-fos和增殖细胞核抗原表达的影响

目的：研究并比较雌激素和／或血清对血管平滑肌细胞(VSMC)中c-fos和增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响。方法：分别在有或无他莫昔芬(TAM)(雌激素受体ER拮抗剂)预处理的情况下,采用免疫细胞化学和图像分析方法,研究雌二醇(E2)和/或新生小牛血清(NCS)对传代大鼠VSMC中的c-fos和PCNA蛋白表达的影响。结果：E2以及NCS均能上调细胞中c-fos和PCNA蛋白的表达,TAM能阻断其效应。结论：雌激素能促进传代VSMC增生,ER介导其作用。     

增殖细胞核抗原突变体的稳定高表达对HeLa细胞顺铂敏感性的影响

目的 建立稳定高表达增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)或突变体PC-NA(mutant PCNA,mPCNA)目的蛋白的宫颈癌细胞系HeLa细胞,观察PCNA在顺铂诱导的DNA损伤修复中的作用.方法 采用显性负突变策略,通过构建重组人PCNA或mPCNA的真核表达质粒pCDNA3.1/V5-His A-PCNA(His-PCNA)和pCDNA31/V5-His A-mPCNA(His-mPCNA),稳定转染到HeLa细胞中,G418筛选建立稳定高表达目的蛋白的HeLa细胞系;Western印迹法检测蛋白的表达情况;MTT法测定顺铂损伤后不同细胞系的细胞存活率.结果 真核表达质粒经酶切、测序分析与实验设计完全一致;稳定建系后,Western印迹结果显示在相应位置可见清楚的目的条带;MTT结果显示稳定高表达突变体PCNA的细胞系与对照组相比,其细胞存活率呈明显下降趋势.结论 成功构建了真核表达质粒His-PCNA和His-mPC-NA;建立了稳定高表达该质粒的HeLa细胞系;稳定高表达突变体PCNA的细胞系对顺铂损伤更敏感.     

细胞周期蛋白A对舌鳞癌细胞周期和抗原含量的影响

细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎ是调节细胞周期活动的重要蛋白质，在细胞的增殖及肿瘤的发生中具有重要作用。近年来，对细胞周期调控分子机制的研究有了突破性进展，已知细胞生长周期由一系列细胞分泌的蛋白控制，并证实哺乳动物的ｃｙｃｌｉｎ有８种，其中ｃｙｃｌｉｎＡ／Ｃｄｋ２为Ｓ期和Ｇ２期所必需的〔１〕。细胞在由Ｇ１→Ｓ→Ｇ２→Ｍ期的转换过程中，存在着几个限制点，其中Ｇ２／Ｓ限制点是调控细胞周期进程的关键〔２〕。ｃｙｃｌｉｎＡ的合成在细胞周期由Ｇ１→Ｓ期明显增加，证明ｃｙｃｌｉｎＡ为Ｓ期的特征性细胞周期蛋白，存在于…     

流行性出血热肾组织中增殖细胞核抗原、波形丝蛋白的表达及其意义

目的　研究流行性出血热 (EHF)肾组织中增殖细胞核抗原 (PCNA)和波形丝蛋白 (vimentin)的表达及意义。方法　应用多重PAP免疫组化方法 ,对 17例EHF尸检肾组织中PCNA和vimentin的表达进行观察。结果　EHF尸检肾组织PCNA的阳性率为 6 4 71% ,集合管的增殖指数显著大于远曲小管 (P <0 0 1) ,低血压休克期患者远曲小管和集合管上皮细胞vimentin呈强阳性表达 ,相同部位PCNA也呈阳性 ,PCNA的阳性强度与局部病变的程度相一致。结论EHF患者急性肾功能衰竭的早期就存在损伤肾小管上皮细胞的再生、增殖和分化 ,这些变化在EHF肾损伤的修复反应中具有重要的意义     

靶向VEGF的shRNA对皮肤鳞癌A431细胞的作用

 目的 构建靶向VEGF的shRNA（psilencer-VEGF1-shRNA,VEGF-s1;psilencer-VEGF2-shRNA,VEGF-s2）干预皮肤鳞癌细胞（A431）的一系列生物学行为,探讨VEGF-s1和VEGF-s2干预作用的意义。方法 构建psVEGF-shRNA真核表达质粒干预体外培养的A431细胞, 同时构建含随机靶序列的阴性对照表达质粒(psilencer-Target-off-shrank,T-off)。RT-QPCR,western blot 和ELISA检测细胞内VEGFmRNA和蛋白表达水平的变化;CCK-8法检测细胞活性;流式细胞仪检测癌细胞增殖周期细胞百分比与细胞凋亡;划痕试验和Transwell小室试验别检测癌细胞二维和三维空间的迁移能力;FN黏附试验检测癌细胞的黏附潜能。结果 A431细胞转染psVEGF-shrank后活性降低,细胞周期发生阻滞,与对照组相比细胞在G1期比率显著增加(P<0.05),在S期比率明显降低,细胞调亡增加(均P<0.05),细胞内VEGFmRNA和蛋白表达水平下降,细胞迁移和黏附潜能均受到抑制。结论 VEGF是人皮肤鳞癌细胞生长相关的重要基因,干扰VEGF基因能有效抑制人皮肤鳞癌细胞的生物学行为。     

EB病毒潜在膜蛋白对鼻咽癌细胞系CNE1生长及HLA表达的影响

目的研究ＥＢＶ－ＬＭＰ对高分化鼻咽癌细胞株ＣＮＥ１生长及ＨＬＡ表达的影响。方法以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象，采用电穿孔基因转染技术，将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒ｐＣＭＶａ－ＬＭＰ转染ＣＮＥ１细胞。用细胞体外增殖试验、免疫组化和流式细胞术等方法，观察细胞生长及ＨＬＡ表达的变化。结果ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞的增殖，增殖吸光度（Ａ）比值试验组与空白组及阴性对照组比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１）；实验组细胞软琼脂克隆形成率显著高于空白及阴性对照组（Ｐ＜０．０１）；细胞ＤＮＡ含量明显增高（Ｐ＜０．０１／０．０５）；ＦＣＭ法测定细胞角蛋白表达，实验组比空白及阴性对照组阳性率显著降低（Ｐ＜０．０５）；ＨＬＡ免疫组化检测结果表明，ＬＭＰ表达细胞系ＨＬＡⅠ类及Ⅱ类抗原的表达都明显下降（Ｐ＜０．０１）。结论ＥＢＶ－ＬＭＰ对ＣＮＥ１细胞生长有明显的促进作用且可明显抑制细胞分化，ＬＭＰ可致鼻咽癌细胞ＨＬＡ抗原的表达改变。     

地塞米松对大鼠肝细胞BRL-3A增殖和凋亡的影响

目的探讨地塞米松对体外培养大鼠肝细胞BRL-3A增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度的地塞米松处理BRL-3A细胞,于12、24、48、72、120 h后用MTT检测地塞米松对BRL-3A细胞活性的影响,同时分别用Annexin V-FITC双染法、PI单染色法、实时定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)等方法检测地塞米松对BRL-3A细胞周期和凋亡的影响。结果 MTT检测表明,地塞米松能够抑制BRL-3A细胞的活性;Annexin V-FITC双染法分析显示,地塞米松具有显著促进BRL-3A细胞凋亡的效果;PI单染色法检测细胞周期分布情况表明,地塞米松处理后的细胞与对照组相比增殖能力减弱;用Real-time PCR检测促细胞凋亡基因Caspase-3、Caspase-8、Caspase-9和促增殖基因Ccnd1和Jun的mRNA表达情况,结果显示,用地塞米松处理后的细胞中Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9均表达上调,而Ccnd1和Jun均表达下调,说明地塞米松能促进BRL-3A细胞的凋亡。结论地塞米松可以促进BRL-3A细胞的凋亡,并抑制其增殖。     

人胚胎发育过程中肝细胞增殖细胞核抗原表达水平的研究

目的　研究人胚胎发育过程中肝细胞增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达水平。方法　采用免疫组织化学方法 ,检测 2～ 8个月胚胎肝细胞PCNA表达水平。结果　胚胎肝细胞PCNA的表达水平随月份增强。结论　胚胎肝细胞PCNA的表达水平的与胚胎发育过程中肝细胞的功能有着密切联系     

苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡及其对Bcl-2、PCNA蛋白表达的影响

目的：观察苦瓜蛋白是否具有诱导K562细胞凋亡的生物学活性，探讨苦瓜蛋白对K562细胞Bcl-2及PCNA表达水平的影响及其作用的分子机制。方法：以一定浓度的苦瓜蛋白处理K562细胞12～72小时，CCK-8检测其对细胞生长的影响；流式细胞术（AnnexinV）、细胞形态学（光镜及电镜）等方法检测细胞凋亡；同时应用流式细胞术检测Bcl-2及PCNA蛋白表达的变化。结果：苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显的抑制作用；流式细胞术及形态学观察（光镜及电镜）证实一定作用浓度的苦瓜蛋白可诱导K562细胞发生明显的细胞凋亡，且随着作用时间的延长细胞凋亡率逐渐升高。苦瓜蛋白处理组K562细胞中Bcl-2及PCNA蛋白的表达分别为0．33％和98．36％，对照组分别为74．03％和97．63％。结论：苦瓜蛋白对K562细胞生长具有明显抑制作用，其作用主要通过诱导K562细胞产生细胞凋亡．而不是抑制细胞增殖。苦瓜蛋白诱导K562细胞凋亡过程中，Bcl-2蛋白表达的下调对调控细胞凋亡有重要作用。     

热休克蛋白70在人食管癌EC9706细胞凋亡过程中的表达与定位变化

目的 探讨姜黄素对人食管癌EC9706细胞凋亡的诱导作用,热休克蛋白70(HSP70)在肿瘤细胞凋亡过程中在核基质上的变化及其与凋亡调控相关蛋白的关系.方法 用细胞计数和流式细胞仪检测姜黄素对人食管癌EC9706细胞的增殖抑制作用,以光学显微镜和透射电镜观察姜黄素诱导人食管癌EC9706细胞凋亡前后的细胞结构变化,琼脂糖凝胶电泳观察人食管癌EC9706细胞凋亡前后的DNA结构变化.双向凝胶电泳和质谱鉴定分析HSP70在核基质中的存在与变化;并以Western blotting进行确证;激光扫描共焦显微镜观察HSP70在EC9706细胞凋亡过程中的定位及其与Bax、Bcl-2等基因产物的共定位关系.结果 姜黄素能显著抑制人食管癌EC9706细胞增殖并诱导人食管癌EC9706细胞凋亡,双向凝胶电泳、质谱鉴定和结果 发现并证实,HSP70在姜黄素处理前后的EC9706细胞核基质蛋白中的存在及其表达下调变化.激光扫描共焦显微镜观察结果 显示,HSP70在EC9706细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2等基因产物具有共定位关系,且其共定位区域发生了变化.结论 姜黄素对人食管癌EC9706细胞具有显著的凋亡诱导作用;HSP70作为一种新发现的核基质蛋白,在姜黄素诱导人食管癌EC9706凋亡过程中的表达与分布发生了显著变化.HSP70与凋亡相关基因的关系对EC9706细胞凋亡具有重要影响.     

The change of proliferating cell nuclear antigen and apoptosis of the MM46 mammary cancer cells of the mouse after single high-dose irradiation

The effects of intraoperative radiotherapy on tumor cells were elucidated by immunohistochemical examination of changes in the level of proliferating cell nuclear antigen. In addition, the terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling method was used to examine the level of apoptosis in mouse MM46 tumor cells after a single high dose of irradiation (30 Gy, 6 MeV). A significant decrease in the number of tumor cells compared to controls was observed on the 3rd, 7th, and 14th days following irradiation, but not on the 1st day. Consistent with these results, the proliferating cell nuclear antigen labeling index of irradiated cells decreased significantly on the 3rd, 7th, and 14th days following irradiation, but not on the 1st day. By comparison, the regrowth area on day 14 only showed no difference compared to the control group. The apoptotic index increased on the 7th and 14th day after irradiation, but at a lower rate than the observed decrease in the level of proliferating cell nuclear antigen. We speculate that the major mechanism of single high-dose radiation effect is inhibition of DNA synthesis.     

鳕鱼皮寡肽对人胃癌细胞SGC-7901增殖凋亡的影响及机制

目的 探讨鳕鱼皮寡肽（CSO）对人胃癌细胞（SGC-7901）的增殖影响。 方法 用不同浓度CSO处理体外培养的SGC-7901细胞后,荧光显微镜下观察细胞4’6-二脒 基-2-苯基吲哚（DAPI）染色后细胞形态变化,应用CCK-8 实验检测细胞活力,免疫印迹法和流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期。 结果 CSO对SGC-7901细胞增殖有明显的抑制作用,且并呈剂量、时间效应关系（P<0.05）。作用于SGC-7901胃癌细胞24 h、48 h和72 h的IC50分别是156.90 g/L、102.10 g/L、73.13 g/L。DAPI染色后发现,SGC-7901细胞随着CSO浓度增加可见大量的细胞核碎裂,荧光强烈。24h细胞凋亡率检测显示,细胞随着浓度的增加凋亡率呈上升趋势,表明CSO对SGC-7901呈浓度效应关系。细胞周期观察发现,SGC-7901细胞G₁期细胞数随着CSO浓度的增加而递增,而S/G₂期细胞随着浓度的细胞递降。Caspase-3、Caspase-9随着CSO浓度的逐渐增高表达上调,Bcl-2表达下调。 结论 鳕鱼皮寡肽能抑制人胃癌细胞（SGC-7901）增殖,诱导凋亡,抑癌机制可能与Caspase-3、Caspase-9上调和Bcl-2下调相关。     

Sequential induction of Hsp25 and proliferating cell nuclear antigen in the kidney after burn

Burn injury elicits a wide range of intracellular signaling events leading to alterations in phenotypes of distant organs. Renal dysfunction is one of several serious postburn complications. To better understand the underlying mechanisms of renal dysfunction among burn patients, we investigated alterations in the expression of heat shock proteins (Hsps) and cell cycle-associated proteins in the kidney after burn. Following an approximately 18% total body surface area burn, blood and kidney samples were harvested from mice at several time points. Serum levels of blood urea nitrogen increased significantly at 3 h and returned to basal levels at Day 1 implying a transient dysfunction of glomerular filtration. The expression of Hsp25 was increased at Day 1, whereas no changes in Hsp70 expression were observed. An increase in proliferating cell nuclear antigen (PCNA), a marker of cell proliferation, peaked at Day 3, and its expression was predominantly limited to cells appearing to be tubular epithelial cells in the cortex. In contrast, no significant alterations in the p21 mitosis inhibitor were noted. Furthermore, increases in histones H1 and H2A at Day 3 paralleled the PCNA induction suggesting a burn-mediated alteration in cell cycle activities. The results from this study suggest that a sizeable burn may trigger sequential activation of signaling events involved in the early pathogenesis and subsequent recovery of the kidney after burn.     

Temporal and histologic relationships of proliferating cell nuclear antigen and human papillomavirus type 11 in the mouse xenograft system

Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) is an accessory protein of DNA polymerase delta. This protein is associated with cell cycle progression and can be detected in the replicating cells of normal tissues. Condylomata acuminata are benign epithelial tumors caused by infection with human papillomaviruses and are characterized by abnormal cell proliferation. The athymic mouse xenograft model of HPV 11 infection was used to test the hypothesis that PCNA is induced early in the course of HPV 11 infection and to study the temporal and histologic relationships between detection of PCNA and HPV DNA. Human foreskin tissue was infected with HPV 11 and implanted under the renal capsules of 10 athymic mice. Pairs of mice were sacrificed every week beginning four weeks after implantation. HPV DNA was detected in sections of foreskin implants by in situ hybridization. PCNA was as or more abundant in implants removed at earlier time points than at later time points, whereas HPV DNA became increasingly more abundant with time. PCNA was detected only in basal cells in areas of histologically normal epithelium that were also negative for HPV DNA. In contrast, PCNA was present throughout the epithelium in regions that were HPV DNA-positive. HPV DNA was detected only in differentiated epithelial cells in implants removed at all five time points, but in HPV DNA-positive regions, PCNA was detected with equal intensity in differentiated and undifferentiated cells. The foci of PCNA-positive cells were well demarcated and were larger than, but included, the foci of HPV DNA-positive cells. PCNA may be induced maximally in differentiated epithelium by HPV 11 prior to significant HPV DNA replication. © 1996 Wiley-Liss, Inc.