不同的培养条件对脑胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨不同的培养条件包括母代细胞的生长状态及细胞密度对U251细胞增殖及凋亡的影响及相关机制。方法细胞增殖实验检测U251细胞在不同的培养条件下(母代细胞的生长状态及细胞密度)的生长情况,Western blot检测p-ERK1/2、cleaved-caspase3、cleaved-caspase8、p27、cyclin D1、p-PLK、p-FPAK的表达。Caspase3活性实验检测细胞凋亡。流式细胞实验检测细胞周期及增殖。结果将平台期U251细胞重新种植高密度即PH组,细胞快速增殖;将指数期U251细胞重新种植高密度即EH组,细胞增殖缓慢并伴随细胞脱壁。EH组细胞表达cleaved-caspase3、cleaved-caspase8,且caspase3活性升高,提示细胞发生凋亡。流式细胞实验显示EH组细胞发生G2阻滞,Western blot显示cyclin D1、p-PLK1表达下调,而p27表达上调。促进FAK的表达并不能抑制细胞凋亡。功能性p27的高表达抑制EH组细胞发生凋亡,并促进细胞增殖。结论母代细胞的生长状态及细胞密度影响U251细胞的增殖及凋亡,功能性p27的表达...     

银杏提取物(GBE)对人胶质瘤U251细胞增殖凋亡的影响

目的观察利用银杏提取物对人脑胶质瘤U251细胞增殖与凋亡的影响。方法将传代的U251细胞随机分为四组,A组加培养液,B、C、D组分别加浓度为50mg/ml、100mg/ml、200mg/ml的银杏叶提取物;观察倒置显微镜下TrypanBlue染色后各组U251脑胶质瘤细胞形态,用MTT法测算U251细胞增殖率,用流式细胞仪检测U251细胞凋亡率。结果 B、C、D组细胞增殖指数逐渐下降,与A组比较,P均<0.05;A、B、C、D组细胞凋亡率分别为0.3%±0.3%、10.6%±1.7%、21.9%±4.3%、33.5%±2.1%。B、C、D组与A组比较,P均<0.05。结论银杏叶(GBE)可抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖,并诱导其凋亡。     

沙培林对U251胶质瘤细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的研究沙培林对脑胶质瘤细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法20只BALB／C裸小鼠皮下接种U251脑胶质瘤成功后随机分成4组,分别瘤周注射生理盐水0．2ml,沙培林0．2KE、0．4KE、0．8KE,共8次,解瘤实验。用免疫组化法检测Bcl-2、p53（突变型）、Bax、Fas及Bcl—xs基因的表达。结果由对照组至治疗组,且随用药剂量增加,Bcl-2及p53（突变型）表达的阳性率逐渐下降,而Bax、Fas及Bcl—xs表达的阳性率则逐渐增加。结论沙培林局部应用治疗脑胶质瘤,通过对多种基因的调控,促进瘤细胞的凋亡、抑制肿瘤的生长。     

白藜芦醇抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖及诱导其凋亡的实验研究

目的研究白藜芦醇对人脑胶质瘤细胞U251细胞生长抑制及诱导细胞凋亡的作用。方法采用MTT法检测白藜芦醇对U251细胞的增殖活性的影响,采用流式细胞仪检测白藜芦醇对U251细胞早期、晚期凋亡率的影响,用倒置显微镜观察不同浓度的白藜芦醇作用后U251细胞的形态学改变。结果白藜芦醇对U251脑胶质瘤生长有抑制作用,且具时间及剂量依赖性;白藜芦醇能诱导U251细胞早、晚期凋亡,且具时间及剂量依赖性。结论白藜芦醇能抑制U251脑胶质瘤的增殖并能诱导细胞凋亡。     

胶质瘤细胞系U251中Nanog基因的研究

目的 Nanog作为全能性或多能性干细胞标志物,在胶质瘤细胞系中的研究甚少。本研究通过免疫组织化学来探讨Nanog基因在U251胶质瘤细胞系中的表达情况,以及全反式维甲酸(ATRA)对胶质瘤细胞系U251的诱导分化情况。方法采用免疫组织化学染色法从蛋白质水平检测U251胶质瘤细胞系Nanog的表达情况,以及应用化疗药物全反式维甲酸(ATRA)作用前以及作用后1、2、3d Nanog蛋白的表达情况。结果 ATRA作用前免疫组化结果显示大量细胞表达Nanog蛋白,主要位于胞浆内,胞核内有少量表达,少数细胞完全不表达;ATRA作用1、2、3d后的的细胞爬片结果显示有些许细胞变圆,少量的细胞漂浮于培养基内,Nanog蛋白的表达情况同ATRA作用前相比有了减少,并且随着作用时间的延长表达愈来越少。结论 Nanog基因在胶质瘤细胞系U251中表达,诱导分化剂ATRA能够降低Nanog的表达,并且随着作用时间的延长表达越来越少。     

枸杞多糖联合卡铂对人胶质瘤U251细胞生长抑制和凋亡作用

目的观察枸杞多糖联合卡铂对神经胶质瘤U251细胞生长抑制和凋亡作用。方法将U251细胞随机分为四组,A组（空白组）加常规培养液,B、C、D三组分别加枸杞多糖、卡铂、枸杞多糖＋卡铂联合组;通过细胞形态学、噻唑蓝法（methylthiazdyl tetrazolium,MTT）、DNA断端末端标记法（TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL）及流式细胞仪,观察U251细胞生长抑制及凋亡情况。结果 B、C、D三组细胞生长抑制率及凋亡率均升高,但D组升高更明显,P〈0.05。结论枸杞多糖联合卡铂更易使U251胶质瘤细胞生长受抑制,且诱导其凋亡。     

银杏提取物联合顺铂对人胶质瘤U251细胞增殖 凋亡的影响

目的 研究银杏提取物(GBE)联合化疗药物顺铂对人脑胶质肿瘤细胞生长增殖和凋亡的影响.方法 正常培养传代后的U251胶质瘤细胞按随机分配的方法 分为4组,A组仅加普通培养液,B、C、D组分别加银杏提取物(200 mg/mL)0.5 mL、顺铂(1 mg/mL)0.01 mL、银杏提取物(200 mg/mL)0.5 mL+顺铂(1 mg/mL)0.01 mL;MTT法观察U251细胞增殖情况,流式细胞仪检测U251细胞凋亡率.结果 培养12、24、36、48、60 h,B、C、D组细胞增殖指数逐渐下降,与A组比较差异具有统计学意义(P<0.05);D组与B、C组比较,差异具有统计学意义(P<0.05).将各组细胞培养24 h后上机,测得A组、B组、C组、D组肿瘤细胞的凋亡率分别为(0.6±0.3)%、(19.3±1.2)%、(38.9±3.5)%、(58.1±3.1)%.其中,B组、C组、D组分别与A组进行比较,差异具有统计学意义(P<0.05);将D组与B组和C组进行比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论 银杏提取物(GBE)联合顺铂可抑制人脑胶质瘤U251细胞增殖,并诱导其凋亡.     

腺病毒介导PTEN基因对胶质瘤血管生成和肿瘤生长的影响

目的 :探讨 PTEN 对人脑胶质瘤血管生成和肿瘤生长的抑制作用。 方法 :用含 PTEN基因的重组腺病毒载体Ad PTEN,体外转染人胶质瘤细胞 U87,Western印迹分析检测其表达 ,采用鸡胚绒毛尿囊膜实验检测其对血管生成的作用 ,体内实验检测腺病毒对肿瘤体积的影响 ,同时以免疫组化法检测 因子相关抗原和基质金属蛋白酶 (MMP- 2 )的表达 ,并与U87组 (不予任何处理 )和 Ad X- gal转染组相比较。结果 :U87转染 Ad PTEN腺病毒后 PTEN表达上调 ,U87组的血管指数、体内肿瘤体积、 因子相关抗原和 MMP- 2的表达病理指数均显著多于 Ad X- gal和 Ad PTEN组 (P<0 .0 5 ,P<0 .0 1 )。结论 :PTEN可抑制肿瘤血管生成 ,并抑制体内肿瘤的生长。提示 PTEN可作为有效的抗胶质瘤血管生成与肿瘤生长治疗基因     

低剂量辐射对裸鼠移植人胶质瘤(U251)细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响

目的：研究低剂量辐射对裸鼠移植人胶质瘤U251细胞凋亡相关基因mRNA表达的影响。方法：35只荷人胶质瘤U251瘤裸小鼠,随机分为7个实验组,假照组：0 mGy;D₁组：75 mGy;D₂组：4 Gy;D₁-12 h+D₂组：D₁照射后12 h予以D₂;D₁-24 h+D₂组：D₁照射后24 h予以D₂;D₁-48 h+D₂组：D₁照射后48 h时予以D₂;D₁-72 h+D₂组：D₁照射后72 h予以D₂。每组5只。各实验组不同方式照射后4 d,荷瘤裸鼠全部处死,采用原位杂交技术检测荷瘤组织的p53、Bcl-2 和Bax的mRNA表达水平。结果：D₁（75 mGy）和D₂（4 Gy）照射后,胶质瘤细胞的p53和Bax的mRNA表达分别呈上升趋势,Bcl-2的mRNA表达呈下降趋势,但与假照组比较,差异无显著性（P＞0.05）; D₁+D₂组（D₁和D₂间隔24、48及72 h）的p53和Bax的mRNA表达明显增多,Bcl-2 mRNA表达显著下降,与假照组比较差异有显著性（P＜0.05或P＜0.01）。结论：低剂量辐射在一定程度上可能上调了胶质瘤细胞的p53、Bax的mRNA表达,下调了Bcl-2 mRNA的表达,同时对其后的大剂量辐射有协同作用。     

ING4蛋白对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨ING4(inhibitor of growth family4)蛋白对人胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响.方法 用PEI转染ING4蛋白过表达(pEGFP-C2/ING4转染组)及阴性对照载体(pEGFP-C2转染组)至人胶质瘤U251细胞,G418筛选后建立ING4蛋白稳定表达细胞株;RT-PCR、免疫...     

冬凌草甲素诱导人脑胶质瘤U251细胞的凋亡及其机制

目的 研究冬凌草甲素对人脑胶质瘤U251细胞体外生长抑制及诱导凋亡的作用及其机制。方法 MTT法检测冬凌草甲素对U251细胞的生长抑制作用;倒置显微镜法和荧光显微镜Annexin V-FITC/PI双染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪Annexin V FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率;Realtime PCR法检测冬凌草甲素作用U251细胞后的bcl 2、bax及caspase-3基因表达水平的变化。结果 冬凌草甲素对U251细胞有明显的生长抑制作用（P<0.05）,呈明显的时间和浓度效应关系。冬凌草甲素作用U251细胞24h后出现明显的细胞凋亡形态学改变。随着冬凌草甲素作用浓度增加,凋亡和坏死细胞数均增加,浓度越高,诱导细胞凋亡的作用越明显（P均 <0.05）。随着冬凌草甲素作用时间延长,U251细胞的bax和caspase-3基因的表达逐渐增强,bcl-2基因的表达逐渐减弱（P均<0.05）。结论 冬凌草甲素能诱导人脑胶质瘤U251细胞凋亡,其凋亡机理可能与bax和caspase 3基因表达的上调,bcl-2基因表达的下调相关。     

汉黄芩素对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡、Survivin及Caspase-3表达的影响

目的探讨汉黄芩素在人胶质瘤患者中对U251细胞的增殖与凋亡及对存活素（Survivin）及半胱天冬酶-3（Caspase-3）表达的影响。方法不同浓度汉黄芩素作用于人胶质瘤96株U251细胞,并与使用替莫唑胺（TMZ）的阳性对照组（48株）及未给予任何药物的空白对照组（48株）对比细胞增殖抑制率、细胞凋亡率及Survivin和Caspase-3蛋白的表达强度。结果各浓度汉黄芩素对细胞增殖抑制率均显著高于空白对照组,且随药物浓度及作用时间的增加呈现出显著增高趋势（P〈0．05）,汉黄芩素组细胞凋亡率显著高于TMZ组（P〈0．01）,TMZ组显著高于空白对照组（P〈0．01）,在汉黄芩素组内,细胞凋亡率随着药物浓度增加显著增加（P〈0．05）;汉黄芩素组Survivin表达强度佩著低于TMZ及空白对照组（P〈0．01）;两药物组Caspase-3表达强度显著高于空白对照组（P〈0．01）。结论汉黄芩素可通过调节Survivin、Caspase-3蛋白的表达对胶质瘤U251细胞起到诱导凋产的作用。     

胶质瘤U251细胞及其干细胞抗凋亡与多重耐药基因的关系

目的利用培养成功的U251胶质瘤干细胞,探讨其抗凋亡和耐药基因的表达差异。方法WST-8法检测胶质瘤干细胞增殖活性,实时荧光定量RT-PCR技术检测Livin、Livinα、Livinβ、Survivin和MRP1、MRP3 mRNA的表达。结果单层培养的U251细胞比胶质瘤干细胞表现出更强的增殖活性;U251胶质瘤干细胞Livin、Livinα、Livinβ、Survivin和MRP-1 mRNA表达量较U251单层培养细胞表达量都有不同程度的升高,而MRP-3 mRNA表达量降低。结论U251胶质瘤干细胞抗凋亡和MRP-1 mRNA表达量较U251单层培养细胞表达量有不同程度的升高,提示胶质瘤干细胞比较其同源的肿瘤细胞具有更强的耐药性,这可能是肿瘤耐药的机制。     

RNAi沉默c-Met基因对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响

目的  探讨RNAi沉默c-Met基因对人脑胶质瘤U251细胞增殖及侵袭能力的影响。方法  分别构建3种靶向c-Met基因的短发卡RNA（shRNA）序列,以脂质体转染的方式导入人脑胶质瘤U251细胞,并筛选出稳定表达的细胞株。采用PCR和Western blot检测c-Met-shRNA转染后U251细胞c-Met的表达情况,以筛选出可有效沉默c-Met基因的shRNA。c-Met基因沉默后,采用MTT法和流式细胞术检测U521细胞增殖情况,采用Transwell法和细胞划痕实验检测U251细胞侵袭和迁移情况,采用裸鼠荷瘤实验研究U251细胞体内成瘤性。结果  成功构建可有效沉默c-Met基因的c-Met-shRNA1。沉默c-Met后,c-Met mRNA以及蛋白的表达均显著下降,差异有统计学意义（P <0.05）;而且可明显抑制U251细胞的增殖、侵袭、迁移以及体内成瘤能力,差异有统计学意义（P <0.05）。结论  RNAi沉默c-Met基因可有效抑制人脑胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭、迁移以及体内成瘤能力。

     

Survivin反义寡核苷酸增强U251人胶质瘤细胞对顺铂的敏感性研究

目的研究Survivin反义寡核苷酸对U251人胶质瘤细胞顺铂治疗敏感性的影响。方法脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染U251人胶质瘤细胞，Western blot法检测内源性Survivin表达水平的变化，MTT法检测顺铂对细胞生长情况的影响，流式细胞仪（FCM）观察顺铂诱导各组U251细胞的凋亡。结果反义Survivin脂质体复合物能有效下调Survivin表达水平，并且能抑制U251细胞的生长，提高U251细胞对顺铂的敏感性。流式细胞仪检测凋亡率明显提高。结论Survivin反义寡核苷酸能增强顺铂诱导的U251细胞凋亡。Survivin反义寡核苷酸和顺铂联合用药对U251细胞生存具有协同抑制效应，可改善治疗效果。     

灵芝酸A对人胶质瘤细胞U251细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨灵芝酸A对人胶质瘤细胞U251细胞凋亡、侵袭及KDR表达的影响。方法制备灵芝酸A,以人胶质瘤细胞细胞U251细胞为研究对象,根据细胞培养液所含灵芝酸A的不同浓度,将实验分为空白对照组(等量细PBS)、灵芝酸A低浓度组(0.1 mmol/L)和高浓度组(0.5 mmol/L)。用RT-PCR和Western blot法分别从mRNA水平和蛋白水平检测KDR基因的表达,CCK-8法测定细胞体外增殖能力,流式细胞技术(flowcytometry,FCM)检测各组细胞周期和凋亡情况,TUNEL染色检测各组细胞的的凋亡,细胞侵袭小室法检测各组细胞的体外侵袭力。结果 RT-PCR和Western blot显示,灵芝酸A高浓度组和低浓度组较空白对照组的KDR mRNA和蛋白表达都明显下降;灵芝酸A高浓度组和低浓度组细胞的生长速度明显减慢,降低G1期细胞比例,S期和G2/M期比例增高;与空白对照组相比,高浓度组和低浓度组细胞的凋亡率明显升高(P0.01),增殖、侵袭能力显著下降(P0.05);高浓度组和低浓度组细胞相比促进凋亡和抑制KDR表达的作用更明显(P0.05)。结论灵芝酸A可诱导人胶质瘤细胞U251细胞凋亡,抑制其增殖和侵袭能力,并能抑制Kdr DR mRNA和蛋白的表达,提示这可能是其抗肿瘤的作用机制之一。     

白桦脂酸对脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响

目的 观察白桦脂酸(BA)对人脑胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法 对数期稳定生长的U251细胞中分别加入不同浓度(0、2.5、5、10、 20、40、80 μg/mL)的BA进行培养。CCK-8法、Annexin V-FITC/PI 双染色法检测培养24、48、72 h 时细胞的增殖、凋亡情况,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2 、Bax及信号通路蛋白Akt及磷酸化Akt(p-Akt)表达变化情况。结果 在0～80 μg/mL范围内,BA可抑制U251细胞增殖并促进细胞凋亡(P＜0.05),且呈浓度及时间依赖性,随着BA浓度的增加、培养时间的延长,U251细胞的Akt表达水平无明显变化(P＞0.05),P-Akt、Bcl-2表达水平逐渐降低(P均＜0.05),Bax 表达水平逐渐升高(P＜0.05)。结论 BA可抑制脑胶质瘤U251细胞增殖并诱导其凋亡,这可能与其参与调控磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路有关。