桂皮醛对糖尿病小鼠血糖水平的影响及机制

目的:观察桂皮醛(cinnamaldehyde,CA)降血糖作用,并探讨其作用机制。方法:6~8周龄雄性db/db小鼠24只,按血糖随机分为模型组,二甲双胍组(0.2 g·kg~(-1)),桂皮醛低剂量组(0.025 g·kg~(-1))和桂皮醛高剂量组(0.05 g·kg~(-1)),每组6只,另设同周龄C57BL/6J小鼠6只为正常组。治疗4周后,检测各组小鼠空腹血糖(fasting blood glucose,FBG),总胆固醇(total cholesterd,TC),甘油三酯(total triglyceride,TG),游离脂肪酸(free fatty acids,FFA),天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST),血清胰岛素(fasting insulin,Fins)水平,计算胰岛素抵抗指数(homa insulin-resistance,HOMA-IR);取肝脏组织检测肝糖原含量以及高碘酸-希夫(periodic acid-Schiff stain,PAS)染色;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏相关mRNA和蛋白表达。结果:治疗4周后,与模型组比较,CA组小鼠体质量,FBG,Fins,HOMA-IR,血脂明显降低(P0.05,P0.01),肝脏糖原含量显著升高;小鼠肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphate,G-6-P),磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)mRNA表达显著降低(P0.01),p-蛋白激酶B(protein kinase B,Akt),p-糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)蛋白表达显著升高(P0.01)。结论:CA具有降低血糖作用,相关机制可能是通过上调肝脏胰岛素信号通路Akt,GSK-3β磷酸化水平,抑制G-6-P,PEPCK mRNA表达实现。     

桂皮醛诱导人胃癌BGC-823 细胞凋亡及相关分子机制的探讨

目的：探讨桂皮醛对人胃癌BGC-823 细胞增殖、凋亡及其相关分子机制。方法：采用MTT 法检测桂皮醛对人胃癌BGC-823 细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测桂皮醛诱导的凋亡,Hoechst 33342染色法观察凋亡形态的变化;RT-PCR 法检测桂皮醛对人胃癌BGC-823 细胞相关凋亡基因的影响;Western Bolt 方法检测桂皮醛对人胃癌BGC-823 细胞相关凋亡蛋白的影响。结果：与对照组相比,桂皮醛有抑制人胃癌BGC-823 细胞增殖的作用（P<0.01）;桂皮醛能诱导凋亡的产生;桂皮醛能下调凋亡相关基因Bcl-2、Bcl-xL Survivin,上调凋亡相关基因Bax、Bak;桂皮醛能下调凋亡相关蛋白Bcl-2、Procaspase-3,上调凋亡相关蛋白Bax。结论：桂皮醛对人胃癌细胞BGC-823 的增殖具有抑制作用并能诱导凋亡,可能与内源性凋亡途径的激活有关。     

黄芩苷抑制THP-1细胞NF-κB-HIF-1信号轴缓解痛风炎症的机制研究

目的 观察黄芩苷对单钠尿酸盐（MSU）诱导THP-1巨噬细胞核转录因子-κB(NF-κB)-缺氧诱导因子-1(HIF-1)信号轴激活的调节作用,探讨其缓解痛风炎症的作用机制。方法 使用佛波酯（PMA）诱导THP-1单核细胞分化为M0巨噬细胞,以MSU刺激诱导体外炎症模型,再分别予黄芩苷、HIF-1α特异性siRNA进行干预。噻唑蓝（MTT）比色法检测黄芩苷对细胞活力的影响;RT-PCR检测各组HIF-1α、RELA/NF-κB p65及白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA的表达水平;Western blotting及细胞免疫荧光法检测HIF-1α、NF-κB p65、pNF-κB p65的蛋白含量及表达定位。结果 0～10μmol/L黄芩苷对细胞活力基本无影响;与对照组比较,MSU组HIF-1α、RELA及IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达水平上调（P <0.05）,信号轴关键蛋白HIF-1α、p65、p-p65表达水平显著升高（P <0.05）,HIF-1α、p-p65在细胞核中荧光强度明显增强;...     

毛蕊花苷对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型的作用及其机制研究

目的采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞的炎症模型,考察炎症相关指标,探讨毛蕊花苷的抗炎作用及其机制。方法用MTT比色法检测毛蕊花苷对RAW264.7细胞活性的影响;Griess法检测NO的含量;Westernblotting检测核转录因子-κB(NF-κB)通路相关蛋白的表达,ELISA试剂盒检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的释放,流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)、Ca~(2+)的释放情况。结果毛蕊花苷浓度为20、40、80μmol/L时对RAW264.7细胞没有毒性。不同浓度的毛蕊花苷对LPS诱导RAW264.7细胞导致的NO、TNF-α、IL-6的释放,细胞内ROS、NO、Ca~(2+)释放的增加均有很好的抑制效果,对诱导型一氧化氮合酶(i NOS)、环氧化酶-2(COX-2)、p-IKKα/β、p-p65、p-IκBα蛋白的表达也有抑制作用。结论毛蕊花苷具有明显的抗炎作用,其作用机制是通过抑制NF-κB信号通路而发挥抗炎作用。     

虎杖苷对TGF-β1诱导的人类肺泡上皮A549细胞EMT的影响

目的探讨虎杖苷对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的人类肺泡上皮A549细胞生长及上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)过程的作用机制。方法体外培养A549细胞,随机分成5组:空白组、对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组,分别加入普通培养液、含5ng/mL TGF-β1的培养液、含浓度为50μmol/mL的虎杖苷加TGF-β1的培养液、含浓度为100μmol/mL的虎杖苷加TGF-β1的培养液、含浓度为150μmol/mL的虎杖苷加TGF-β1的培养液进行干预,观察并记录不同时间段细胞形态变化;MTT法检测虎杖苷最佳药物浓度;蛋白质印迹法(Western blot)、实时PCR(Real-time PCR)检测上皮标志物E-cad、间质标志物Vimentin蛋白及mRNA表达水平。结果倒置相差显微镜观察到虎杖苷和TGF-β1干预后A549细胞由原来的鹅卵石状上皮形态转变成梭形,且细胞间隙变大,细胞间的连接变得松散,对照组较为明显,低、中、高剂量组比对照组细胞形态稍饱满;48h中剂量组虎杖苷对TGF-β1诱导的A549细胞EMT抑制作用最明显。在虎杖苷和TGF-β1作用下,E-cad蛋白及mRNA表达总体呈下调趋势(P0.05),与对照组比较,各药物组E-cad蛋白及mRNA表达下调幅度较小,且48h比24h明显。而Vimentin蛋白及mRNA表达总体呈上调趋势,与对照组比较,各药物组Vimentin蛋白及mRNA表达上调的幅度较小,且48h比24h明显,差异有统计学意义(P0.05)。结论虎杖苷能抑制TGF-β1诱导的A549细胞EMT过程,并存在时间和剂量依赖性,具有抑制肺纤维化的作用。     

基于THP-1细胞模型荆芥挥发油抗炎作用的NLRP3炎症小体调控机制研究

目的:以THP-1细胞为载体,观察荆芥挥发油抗炎作用及与NLRP3炎症小体激活相关的调控作用机制。方法:MTS法测定荆芥挥发油对THP-1细胞的毒性作用;利用佛波酯(PMA)将THP-1细胞诱导分化为巨噬细胞,然后采用LPS与激活物(ATP、Nigericin、CPPD或Ca Cl2)进行造模,观察荆芥挥发油对NLRP3炎症小体激活的影响,ELISA法检测细胞上清中IL-1β、IL-18水平;RT-PCR法检测细胞中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-1α、IL-6 mRNA的表达。结果:荆芥挥发油浓度≤0.4 mg/mL时对THP-1巨噬细胞无毒;0.2 mg/mL荆芥挥发油对4种激活物诱导的THP-1巨噬细胞上清中IL-1β的高分泌具有显著抑制作用(P0.05或P0.01),且对ATP或Nigericin诱导下THP-1巨噬细胞NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-1α、IL-6 mRNA的高表达具有显著下调作用(P0.05或P0.01)。结论:荆芥挥发油体外能抑制ATP、Nigericin、CPPD或Ca Cl2诱导的THP-1巨噬细胞IL-1β高分泌,抑制ATP或Nigericin诱导下THP-1巨噬细胞裂解液中NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-1α、IL-6 mRNA的高表达,其抗炎作用的发挥与干预NLRP3炎症小体的激活有关。     

木鳖子对羟基桂皮醛对黑素瘤B16细胞分化的影响及其机制

目的 探讨木鳖子Momrodica cochinchinensis中单体化合物,尤其是对羟基桂皮醛诱导黑素瘤B16细胞分化的作用.方法 以对羟基桂皮醛、松柏醛、对羟基苯甲醛、3-甲氧基对羟基苯甲醛和ligballinol处理B16细胞48 h后,磺酰罗丹明B(SRB)法检测细胞生长抑制率.以对羟基桂皮醛处理B16细胞24、48、72 h后,倒置相差显微镜和经瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞形态;比色法检测给药后48 h B16细胞中黑色素量和酪氨酸酶活性;RT-PCR法检测酪氨酸酶基因表达.结果 5个单体化合物对B16细胞生长均具有抑制作用,其中对羟基桂皮醛对细胞生长的抑制作用最为明显,且具有浓度和时间相关性.对羟基桂皮醛处理B16细胞48 h后,经染色观察到细胞呈树突样生长,表现为典型的细胞分化形态特征,黑色素的量显著增加,酪氨酸酶活性显著增强,上述作用与对照组相比差异显著(P＜0.05).以对羟基桂皮醛处理B16细胞6、12、24h后,酪氨酸酶、酪氨酸相关蛋白-1和酪氨酸相关蛋白-2的基因表达明显上调(P＜0.01),且呈时间相关性.结论 对羟基桂皮醛能够抑制黑素瘤B16细胞增殖,其机制与诱导B16细胞分化相关.     

对羟基桂皮醛诱导食管癌Kyse30细胞分化及其作用机制研究

目的通过研究木鳖子中提取的对羟基桂皮醛(p-hydroxylcinnamaldehyde,CMSP)对食管癌细胞株Kyse30细胞增殖、迁移、细胞周期及肿瘤标志蛋白表达水平等方面的影响,探讨CMSP对食管癌细胞的诱导分化作用及其机制。方法分别用0、10、20、40μg/m L CMSP处理食管癌Kyse30、Eca109、Kyse180细胞24、48、72 h,MTS检测CMSP对Kyse30、Eca109、Kyse180细胞增殖的影响;光学显微镜和电镜下观察Kyse30细胞形态变化;流式细胞术检测CMSP对Kyse30细胞周期和凋亡的影响;ELISA检测CMSP对Kyse30细胞表达肿瘤分化相关抗原癌胚抗原(CEA)、鳞状细胞癌抗原(SCC)、和肿瘤标志物白细胞介素-6(IL-6)和巨噬细胞抑制因子1(MIC-1)的影响;Transwell、克隆形成和细胞划痕实验检测CMSP对Kyse30细胞迁移和侵袭能力的影响;免疫印迹检测CMSP对食管癌细胞C-myc、N-myc肿瘤标志蛋白及RhoA-MAPK信号通路中相关蛋白水平的影响。结果 CMSP可呈时间和剂量依赖性抑制食管癌细胞的增殖,并将Kyse30细胞周期阻滞于G0/G1期。CMSP能够抑制Kyse30细胞的迁移和侵袭能力,还可呈时间和剂量依赖性抑制肿瘤标志物的表达及RhoA-MAPK途径的活化。结论 CMSP通过调控RhoA-MAPK信号通路的活性抑制食管癌Kyse30细胞的增殖,诱导其分化,为其抗肿瘤临床应用提供参考依据。     

桂皮醛对3T3-L1前脂肪细胞诱导分化的作用及其机制研究

目的:观察桂皮醛(Cinnamaldehyde,CA)对3T3-L1脂肪细胞的分化及脂肪细胞因子mRNA表达的影响。方法:对3T3-L1前脂肪细胞进行诱导分化,采用油红"O"染色法检测3T 3-L1脂肪细胞中甘油三酯(TG)及分化过程中胞浆脂质的堆积,并采用Real-time PCR测定脂肪细胞分化中关键基因及脂肪细胞因子mRNA的表达。结果:CA对脂肪细胞的分化均表现为促进趋势,且呈一定的量效关系,增加脂肪细胞分化相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT-enhancer-binding proteins,C/EBPα)、脂肪酸结合蛋白2(Fatty acid binding protein,ap2)、CD36及脂肪细胞因子脂联素(Adiponectin)瘦素(Leptin)、抵抵抗素(Resistin)等mRNA的表达。结论:CA能促进3T3-L1脂肪细胞的分化,增加脂肪细胞分化过程中胞浆脂质的堆积,其机制可能与其促进PPARγ、C/EBPα的表达有关,因此,桂皮醛具有增加脂肪细胞胰岛素敏感性的作用。     

虎杖与茵陈不同配比对急性痛风性关节炎大鼠模型的影响及部分机制研究

目的:痛风属于内科疾病的常见病、多发病,本文拟建立成熟的急性痛风性关节炎动物模型,考察虎杖与茵陈不同配比对其的影响,为临床合理用药提供实验依据。方法:建立急性痛风性关节炎大鼠模型60只,将大鼠分为空白组,模型组,阳性组(秋水仙碱1mg/kg组),虎杖配茵陈1∶1(5g/kg)组、1∶2(7.5 g/kg)组、1∶3(10 g/kg)组,各组10只,以HE染色法观察组织病理学变化,采用绕线法检测各组大鼠右后足踝关节的足趾容积,测量治疗前后足趾容积变化;采用Elisa试剂盒检测大鼠血清TNF-α、IL-1β指标的含量变化,RT-PCR检测TLR2、TLR4基因的表达。结果:HE染色法显示,虎杖与茵陈不同配比对急性痛风性关节炎大鼠模型的炎症状况有所改善,其中1∶3配伍组在病理组织变化最为明显,与模型组比较具有显著差异;足趾容积结果显示,虎杖与茵陈1∶3组优于其余各组;Elisa检测结果显示,模型组血清中TNF-α、IL-1β水平较高,虎杖与茵陈不同配比均能有效抑制炎性介质的释放,且1∶3组优于其余各组;RT-PCR检测结果显示,虎杖配伍茵陈为1∶3组的TLR2、TLR4基因的表达水平上较其余配伍用药组显著降低。结论:虎杖配伍茵陈为1∶3时能有效降低炎性介质水平,发挥治疗作用最佳,其机制可能与抑制TLR2、TLR4基因的表达从而阻断信号转导通路,降低炎性因子释放,达到抗炎的作用。     

桂皮醛解热作用及机制的实验研究

目的：探讨桂皮醛解热作用及其作用机制。方法：采用酵母诱致大鼠发热模型和白细胞介素-1β（IL-1β）刺激小鼠脑微血管内皮细胞（bEnd.3）作为实验体系,采用酶联免疫法（ELISA）测定致热大鼠下丘脑组织及bEnd.3细胞上清液中前列腺素E2（PGE2）含量。结果：桂皮醛能有效抑制酵母所致大鼠发热反应,显著降低发热大鼠下丘脑PGE2含量,亦能明显抑制IL-1β刺激bEnd.3细胞PGE2的释放。结论：桂皮醛具有明显的解热作用,其解热机制可能与影响PGE2含量有关。     

桂皮醛对人舌癌Tca8113细胞体外增殖的影响

目的：探讨中药桂皮醛对人舌癌Tca8113细胞株增殖的影响。方法：体外培养人舌鳞癌Tca8113细胞,采用256,128,64,32,16,8μg／mL浓度的桂皮醛对其进行干预,用倒置相差显微镜及扫面电镜观察桂皮醛对细胞生长形态的影响,用细胞增殖检测法（MTT）检测桂皮醛对细胞增殖的影响。结果：16,8μg／mL组的桂皮醛对Tca8113细胞生长形态无明显影响,128,64,32μg／mL组Tca8113细胞的生长形态发生改变。8μg／mL的桂皮醛对Tca8113细胞生长有促进作用,256,128,64,32,16ug／mL的桂皮醛对Tca8113细胞生长有抑制作用,呈明显浓度依赖性。结论：桂皮醛对人舌癌Tca8113细胞的增殖有明显浓度依赖性,低浓度能促进其生长。     

中药药对虎杖-桂枝对急性痛风性关节炎的影响

目的研究中药药对虎杖-桂枝对急性痛风性关节炎的影响。方法取雄性SD大鼠48只,随机分为6组(每组8只),即正常对照组,模型组,秋水仙碱组(0.1 g·kg-1),虎杖-桂枝低、中、高剂量组(3.5,7,14 g·kg-1)。正常对照组和模型组给予等量生理盐水,其他各组给予相应药物灌胃,每天1次,连续7 d。于灌胃的第4天模型组与各给药组大鼠右后踝关节注射25 mg·m L-1尿酸钠(MSU)0.2 m L 1次,正常对照组给予同量的生理盐水,观察各组大鼠不同时间点足趾容积的变化;第7天灌胃1 h后取血,ELISA法测定血清白细胞介素1β(IL-1β)、转化生长因子-β(TGF-β)含量,荧光定量PCR检测外周血单核细胞Toll受体2(TLR2)、Toll受体4(TLR4)及髓样分化因子88(MyD88)的表达。取血后处死动物,取右后踝关节进行病理学观察。结果与模型组比较,在造模后2 h和6 h虎杖-桂枝药低、中剂量组可显著减小大鼠足趾容积率,48 h和72 h虎杖-桂枝药对低、中、高剂量组大鼠足趾容积均显著减小,差异有统计学意义(P0.05)。虎杖-桂枝药对各剂量组可不同程度的减少关节滑膜炎症细胞浸润反应和血管充血程度。与模型组比较,虎杖-桂枝药对各剂量组可显著减少IL-1β的含量,抑制TLR2、TLR4及My D88基因的表达(P0.01)。结论虎杖-桂枝药对低、中、高剂量组对急性痛风性关节炎大鼠具有显著的改善作用,其机制可能是通过影响血中IL-1β的水平,下调TLR2、TLR4、MyD88基因的表达来发挥作用。     

藁本内酯抑制rhHSP60诱导THP-1细胞炎症反应及其机理探讨

目的:观察藁本内酯对人重组HSP60诱导THP-1源性巨噬细胞炎症反应的抑制作用,并从TLR4-My D88-NF-κB信号通路角度探讨其抗炎机理。方法:选择人白血病源性单核细胞系THP-1细胞,经200μg·L-1PMA作用24 h,诱导分化为巨噬细胞。设对照组、热休克蛋白60(10μg·mL~(-1))组、藁本内酯(10、20、40μg·mL~(-1))组、辛伐他汀(15μg·mL~(-1))组,加入热休克蛋白60刺激0、6、12、24 h,ELISA法测定以上不同时间点培养液中的TNF-α、IL-6含量;Western blot法测定藁本内酯(10、20、40μg·mL~(-1))预处理24 h、热休克蛋白60(10μg·mL~(-1))刺激12 h后TLR4、My D88及磷酸化NF-κB(p-NF-κB)的蛋白表达。结果:(1)热休克蛋白60组的TNF-α含量在6 h明显升高,与0 h相比,差异有统计学意义(P0.01),至12 h含量达高峰,随后开始逐渐下降,24 h与12 h相比差异有统计学意义(P0.01);热休克蛋白60组的IL-6含量自6 h开始逐渐升高,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.01)。(2)与热休克蛋白60组相比,辛伐他汀组的TNF-α含量在6、12、24 h均下降,差异有统计学意义;藁本内酯20、40μg·mL~(-1)组与热休克蛋白60组比较,在以上三个时间点差异均有统计学意义,与辛伐他汀组比较,差异无统计学意义。(3)与热休克蛋白60组相比,辛伐他汀组的IL-6含量在6、12、24 h均下降,差异有统计学意义;藁本内酯20、40μg·mL~(-1)组与热休克蛋白60组比较,在以上三个时间点差异均有统计学意义,与辛伐他汀组比较,差异无统计学意义。(4)藁本内酯20、40μg·mL~(-1)组与热休克蛋白60组相比,TLR4、My D88及p-NF-κB蛋白明显下降,差异有统计学意义。结论:藁本内酯可抑制热休克蛋白60所导致的TNF-α、IL-6等炎症因子升高,具有一定的抗炎作用,该效应与其抑制TLR4-My D88-NF-κB信号通路激活有关。     

莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1细胞炎症的保护作用及机制研究

目的研究莫诺苷对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导成骨细胞MC3T3-E1炎症的保护作用,探讨Caspase、MAPK和NF-κB通路调控机制。方法 TNF-α(50 ng/m L)诱导MC3T3-E1细胞,制备细胞炎症模型;MTT法检测莫诺苷对MC3T3-E1细胞增殖的影响,并检测不同浓度的莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1细胞活力的影响;ELISA法检测细胞上清液中炎性因子白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6的水平;Western blotting法检测Caspase-3、Caspase-9、p-ERK、p-JNK、p-p38、p-IκBα、IκBα和NF-κB等相关蛋白的表达。结果莫诺苷能够促进正常MC3T3-E1细胞增殖,TNF-α诱导MC3T3-E1细胞增殖受到抑制,而莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1细胞具有保护作用;莫诺苷可以抑制TNF-α诱导MC3T3-E1细胞IL-1β和IL-6的释放;降低Caspase-3、Caspase-9、p-ERK、p-JNK、p-p38、p-IκBα蛋白的表达,升高IκBα蛋白表达,对NF-κB p65无明显影响。结论莫诺苷对TNF-α诱导MC3T3-E1炎症细胞有保护作用,其机制为抑制炎性因子的释放、抑制MAPK和NF-κB通路的激活、抑制凋亡蛋白Caspase的表达,从而抑制MC3T3-E1细胞的凋亡。     

苦杏仁苷对脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型的影响

目的研究苦杏仁苷(Amygdalin)体外对脂多糖(LPS)诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症模型的影响。方法采用MTT法检测苦杏仁苷对RAW264.7细胞及其LPS(0.5μg·m L~(-1))诱导后增殖作用的影响;q RTPCR法检测RAW264.7细胞炎症模型的炎症因子IL-17A、IL-23以及趋化因子CCL2、CCL5的m RNA表达;Western Blot法检测胞浆和胞核NF-κB p65以及p38、p-p38的蛋白表达。结果与正常对照组比较,苦杏仁苷在6.25~200μmol·L~(-1)浓度范围对RAW264.7细胞生长没有明显影响(P0.05),而400μmol·L~(-1)可导致RAW264.7细胞活力明显下降(P0.001)。与正常对照组比,LPS作用后RAW264.7细胞活力下降,细胞增殖受到抑制(P0.05);LPS刺激3h后可诱导RAW264.7细胞炎症因子IL-17A、IL-23以及趋化因子CCL2、CCL5 m RNA表达显著上升(P0.05,P0.01);LPS作用1h后可引起RAW264.7细胞的胞核NF-κB p65表达明显上调,胞浆NF-κB p65表达下调,胞核与胞浆比值明显上调(P0.05),p-p38蛋白表达也显著上升(P0.001)。与模型组比较,5μmol·L~(-1)苦杏仁苷对LPS诱导的RAW264.7细胞炎症模型未见明显变化(P0.05),而20,50μmol·L~(-1)苦杏仁苷作用后细胞增殖抑制状态恢复(P0.05,P0.01);苦杏仁苷(50μmol·L~(-1))提前干预后,IL-17A、IL-23、CCL2及CCL5 m RNA表达均显著下降(P0.01,P0.001);RAW264.7细胞NF-κB p65的胞核与胞浆比值明显下调,p-p38蛋白表达也显著下调,差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论苦杏仁苷对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7炎症模型的干预作用可能与抑制炎症因子IL-17A、IL-23以及趋化因子CCL2、CCL5的表达,抑制NF-κB、p38MAPK信号通路的过度激活有关。     

氧化低密度脂蛋白对THP-1细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的探讨氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）对培养的人单核巨噬细胞（THP-1）凋亡的影响,并进一步探讨其凋亡产生的机制。方法体外培养的人THP-1单核细胞经PMA诱导48 h,使形成巨噬细胞,将分化良好的巨噬细胞分别用不同浓度ox-LDL（0-100μg/mL）培养48 h和用75μg/mL ox-LDL培养THP-1细胞不同时间（0-72 h）。应用Annexin-V和碘化丙锭双染色后流式细胞仪检测细胞凋亡,用Western-bolt法检测GRP78、Caspase-12、CHOP蛋白的表达。结果 ox-LDL处理后的细胞凋亡率增加,并且呈时间和剂量依赖性,随着作用时间的延长和浓度的增加,凋亡呈递增变化,同时检测到GRP78、Caspase-12、CHOP蛋白表达都增加。结论 ox-LDL可诱导THP-1细胞凋亡,其凋亡机制有内质网应激途径的参与。     

桂枝挥发油及桂皮醛抗流感病毒的机制研究

目的 考察桂枝挥发油及其主要成分桂皮醛体外对甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34 (H1N1)的直接杀灭作用,探讨其抗流感病毒作用机制中Toll样受体7(TLR7)信号通路的作用.方法 以流感病毒感染的狗肾传代细胞(MDCK)为载体,测定桂枝挥发油及桂皮醛体外抑制流感病毒增殖的半数抑制浓度(IC50)和治疗指数(TI); ELISA法检测MDCK细胞干扰素-β (IFN-β)的分泌;RT-PCR法考察MDCK细胞中Toll样受体3(TLR3)、TLR7、肿瘤坏死因子受体相关因子3 (TRAF-3)、白介素-1受体相关激酶4(IRAK-4)、IFN-β基因的表达.结果 桂枝挥发油及桂皮醛对流感病毒有明显的直接杀灭作用,IC50分别为1.85×10-7、5.77×10-7 g/mL,TI分别为27.04、9.51.与病毒组比较,桂枝挥发油和桂皮醛0.25×10-5 g/mL显著升高感染甲型流感病毒的MDCK细胞上清液中IFN-β的量(P＜0.05),显著上调细胞中TLR7、IRAK-4、IFN-βmRNA表达水平(P＜0.05).结论 桂枝挥发油及桂皮醛对流感病毒H1N1的增殖有显著抑制作用,作用机制可能与其激活TLR7信号通路、活化IRAK-4、诱导IFN-β高表达有关.     

宁心痛颗粒抑制HSP60诱导MyD88~(-/-)THP-1细胞炎症反应

目的利用siRNA沉默THP-1源性巨噬细胞(Mφ)的髓样分化因子88(MyD88)基因表达,论证MyD88在介导重组人热休克蛋白60(rhHSP60)诱导Mφ炎症反应中的作用及益气活血方宁心痛颗粒含药血清的抗炎机制。方法 THP-1细胞诱导分化为Mφ,分为空白对照组、模型组、阴性对照组、RNAi组(MyD88~(-/-)Mφ)、含药血清组、RNAi+含药血清组共6组,荧光定量PCR法测定MyD88基因表达,免疫印迹法测定MyD88及磷酸化核因子κB(p-NF-κB)的蛋白表达,酶联免疫法测定TNF-α、IL-6的含量。结果 1模型组MyD88基因表达升高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P0.01);RNAi组、含药血清组分别与模型组相比表达均下降,差异有统计学意义(P均0.01);含药血清可增强siRNA的抑制作用,RNAi+含药血清组与RNAi组相比,差异有统计学意义。2模型组MyD88及p-NF-κB蛋白表达升高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P均0.01);RNAi组二者表达均下降,与模型组相比,差异有统计学意义;含药血清可增强siRNA的抑制作用,RNAi+含药血清组与空白对照组相比,差异无统计学意义。3模型组TNF-α、IL-6含量升高,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P均0.01);转染MyD88 siRNA可抑制二者升高,RNAi组与模型组相比,差异具有统计学意义(P均0.01);含药血清单独使用可抑制二者升高,并可增强siRNA的抑制效果,RNAi+含药血清组与RNAi组相比差异有统计学意义(P均0.01)。结论 MyD88/NF-κB是人热休克蛋白60诱导THP-1源性Mφ发生炎症反应的关键信号通路,宁心痛颗粒含药血清可通过调控该信号通路发挥抗炎作用。