186升麻族植物中的三萜皂苷及其药理作用

介绍升麻族植物三萜皂苷类化学成分及其药理活性的研究进展。综述了该族植物中69个环菠萝蜜烷型三萜皂苷类化合物及其解毒、抗炎、抑制核苷转运、抗病毒及抗骨质疏松等方面的药理活性。     

牛膝中三萜皂苷抑制破骨细胞分化作用的研究

目的：通过牛膝中三萜皂苷类成分对破骨细胞分化的影响,探讨牛膝防治骨质疏松症的作用机理。方法：建立破骨细胞分化体外实验模型,在甲状旁腺素（PTH）的诱导下,骨髓细胞分化形成TRAP阳性破骨样细胞。在细胞培养过程中,分别加入2、20、200μM的各组三萜皂苷样品进行干预,考察每组样品对破骨细胞形成的影响。结果：考察的7个三萜皂苷类成分均能不同程度地抑制破骨细胞分化,其中竹节参苷IVa和木鳖子皂苷Ib抑制作用最强,且其抑制作用具有可逆性。结论：牛膝中三萜皂苷类成分可有效抑制破骨细胞形成,提示其可能作为骨吸收抑制剂用于防治骨质疏松症。     

湖北海棠总黄酮对成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响

目的：探讨湖北海棠总黄酮及其主要成分根皮苷对大鼠成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响。方法：取新生大鼠颅骨,用改良组织块消化法分离成骨细胞。MTT法检测药物对成骨细胞增殖的影响,对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸酶（AKP）的活性。分离培养大鼠破骨细胞。加药共培后检测抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）活性,检查骨吸收陷窝变化。结果：湖北海棠总黄酮能明显促进成骨细胞增殖;提高成骨细胞内碱性磷酸酶活性。湖北海棠主要成分根皮苷能提高成骨细胞内碱性磷酸酶活性;降低抗酒石酸酸性磷酸酶活性,减少骨吸收陷窝数目,与对照组比较差异有统计学意义。结论：湖北海棠总黄酮能促进成骨细胞的增殖和分化,其主要成分根皮苷能促进成骨细胞的分化,抑制破骨细胞的活性和嗜骨活性。     

青娥丸不同萃取部位对成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响

目的 探讨青娥丸不同萃取部位对大鼠成骨细胞增殖分化及破骨细胞活性的影响.方法 取新生大鼠颅骨,用改良组织块法消化分离成骨细胞,MTT法检测药物对成骨细胞增殖的影响,对硝基苯二钠基质动力学法测定细胞内碱性磷酸.酶(AKP)的活性.分离培养大鼠破骨细胞,加药共培后检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)活性.结果 复方青娥丸RJ-1,R J-3,J-4,乙醇RJ-5四个萃取部位,OD -2,OD -3,0D -4,全方水煮OD -5四个不同提取物均能促进成骨细胞增殖;RJ-1,J-2两个萃取部位,生杜仲等6个不同提取物均能提高成骨细胞内碱性磷酸酶活性.复方青娥丸石油醚等6个萃取部位,生杜仲等6个不同提取物均降低破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶活性.与对照组比差异有显著性.结论 复方青娥丸多种部位能促进成骨细胞的增殖和分化,抑制破骨细胞的活性.从而维持骨代谢平衡.     

老鹳草素对破骨细胞Ⅱ型碳酸酐酶mRNA表达的影响

目的:研究老鹳草素(geraniin)对培养的破骨细胞(OC)Ⅱ型碳酸酐酶(CAⅡ)mRNA表达的影响,探讨其抗骨质疏松症作用的分子机制。方法:应用原位杂交技术检测不同浓度老鹳草素和乙酰唑胺干预下对培养的OC CAⅡ mRNA表达的影响。结果:与空白对照组和乙酰唑胺组比较老鹳草素10-7mol/l浓度组能明显降低OC CAⅡ mRNA表达。与空白对照组比较,老鹳草素10-8mol/l、10-9mol/l浓度组能降低OC CAⅡ mRNA表达,但作用弱于乙酰唑胺组。老鹳草素10-10mol/l浓度组对OC CAⅡ mRNA表达无影响。随着老鹳草素浓度的增加(10-10mol/l～10-7mol/l),DAB染色变浅,阳性表达减少,呈浓度依赖性降低积光分度和阳性单位,升高平均灰度。结论:老鹳草素抗骨质疏松症作用的机制可能与老鹳草素下调OC中CAⅡ mRNA的表达有关。     

大血藤对破骨细胞活性及成骨细胞增殖分化作用的研究

该研究采用1α, 25-(OH)₂VitD₃诱导兔骨髓细胞法获得破骨细胞,以形态学观察、HE染色、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色来鉴定破骨细胞,用TRAP⁺细胞计数、TRAP活力测定和骨吸收陷窝的数量及面积来检测大血藤对破骨细胞分化及骨吸收功能的影响。培养MC3T3-E1Subclone 14(小鼠颅顶前骨细胞亚克隆14)细胞,用MTT法、碱性磷酸酶活力测定检测大血藤对其增殖和分化的影响。结果表明大血藤醇提物和水煎物低、中、高剂量组(2,20,200 mg·L^-1)对破骨细胞分化及骨吸收功能具有抑制作用,并具有剂量依赖性。大血藤醇提物和水煎物低、中剂量组具有促进MC3T3-E1Subclone 14细胞增殖分化的作用,说明大血藤对骨质疏松有一定的防治作用,这种作用可能是通过抑制破骨细胞活性和促进成骨细胞增殖分化来实现的。     

仙茅苔黑酚类酚苷对去卵巢大鼠骨代谢和破骨细胞形成分化的影响

目的 探讨仙茅苔黑酚类酚苷(orcinol glucoside in Curculigo orchioideson,COOG)对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢及破骨细胞形成分化的影响.方法 3月龄Sprague-Dawley大鼠被随机分为正常对照组和去卵巢组.再将去卵巢大鼠分为5组,连续12周分别灌胃给0.5％的羧甲基纤维素...     

肠道菌群法研究黄芪对防风中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷代谢的影响

目的采用肠道菌群法研究黄芪对防风中主要活性成分升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷代谢的影响,从而探讨防风-黄芪药对的配伍机制。方法采用肠道菌群法,比较不同时间点防风组和防风-黄芪组以及防风单体组和防风单体-黄芪组中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素的质量浓度。结果防风-黄芪组中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的质量浓度均高于防风组,升麻素的质量浓度均低于防风组。单体-黄芪组中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷的质量浓度均高于单体组,升麻素的质量浓度均低于单体组。结论黄芪能抑制防风中升麻素苷和5-O-甲基维斯阿米醇苷的水解反应,减缓其代谢。     

冰片对血肿瘤屏障通透性的影响及机制

目的观察天然冰片对体外血肿瘤屏障(blood tumor barrier,BTB)模型通透性和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPKs)信号转导通路相关激酶表达与激活的影响。方法大鼠C6脑胶质瘤细胞与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)共培养建立BTB模型后,设空白组,冰片低、中、高剂量组(25、50、100μg/m L),每组7个时点(0、10、30、60、120、180、240 min),每个时点3个样本。空白组在冰片组给药同时更换空白培养基,冰片组给不同剂量冰片,给药后不同时间点收集细胞。辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)流量测定BTB通透性,Western blot检测细胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated protein kinase,ERK),磷酸化ERK(phosphorylation extracellular signal regulated protein kinase,P-ERK),P38MAPK,磷酸化P38MAPK(phosphor-P38,P-P38MAPK),氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和磷酸化JNK(phosphorylation c-Jun N-terminal kinase,P-JNK)的表达。结果与本组0 min比较,低、中、高剂量组各时间点通透率升高(P0.01),P-ERK表达先升高,在30 min达极高值,逐渐恢复初始水平(P0.05)。与空白组比较,低剂量组10~240 min HRP通透率升高(P0.01),30、60 min PERK蛋白表达升高(P0.05),低、中、高剂量组180 min P-JNK表达升高(P0.05),240 min P-JNK表达降低(P0.05)。与低剂量组比较,中剂量组10~180 min P-ERK表达升高(P0.05),30~180 min通透率升高(P0.05),180 min和240 min P-JNK表达降低(P0.05)。与中剂量组比较,高剂量组10~180 min通透率升高(P0.05),10~180 min P-ERK表达升高(P0.05),180 min和240 min P-JNK表达降低(P0.05)。结论冰片通过激活MAPKs信号通路的ERK磷酸化进而可逆性下调相关蛋白的表达,达到调节可逆性BTB开放的效果。     

针灸对骨髓源性破骨细胞形成数和 IL-6 mRNA表达的影响

目的:探讨针灸对骨髓源性破骨细胞形成数和白细胞介素6信使RNA(IL-6 mRNA)表达的影响。方法:进行骨髓源性破骨细胞培养、鉴定及IL-6 mRNA基因表达水平的检测。结果:模型组破骨细胞形成数明显多于假手术组(P<0.01),针刺后破骨细胞形成数显著低于模型组(P<0.01);模型组与假手术组比较,骨髓细胞IL-6 mRNA表达呈有意义增高(P<0.01),而针刺后其升高的水平明显低于模型组(P<0.01)。结论:(1)针刺有效调节白细胞介素6(IL-6)的分泌,使IL-6 mRNA表达下降;(2)针刺使破骨细胞形成数减少。     

基于转录组学研究毛冬青三萜皂苷对脂多糖诱导小鼠肠损伤的保护作用及其机制

目的 探讨毛冬青三萜皂苷(Ilex pubescens triterpenoid saponin,IPTS)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠肠损伤的作用及潜在机制。方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和IPTS低、中、高剂量(88、176、264mg/kg)组,给予药物干预7d,ipLPS诱导小鼠小肠损伤,造模7h后,采用苏木素-伊红(HE)染色法观察小鼠回肠组织病理变化;检测小鼠血清中丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性;采用qRT-PCR和Western blotting法检测回肠组织炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α) mRNA和肠屏障紧密连接蛋白ZO-1、Occludin mRNA及蛋白表达。通过转录组学测序挖掘IPTS作用于回肠的潜在机制。结果 与模型组比较,IPTS组小鼠回肠组织完整,氧化应激损伤改善(P<0.001),回肠炎症因子水平降低(P<0.01),肠屏障恢复(P<0.05、0.01、0.001)。RNA-seq测序结果显示,与对照组比较,模型组共筛选出2584个差异表达基因;与模型组比较,IPTS高剂量组共筛选出259个差异表达基因;这些差异表达基因主要富集在免疫球蛋白A(immunoglobulinA,IgA)相关的肠道免疫、花生四烯酸代谢、B细胞受体、瞬时受体电位(transient receptor potential,TRP)通道炎症调控、亚油酸代谢等信号通路。结论 IPTS可以改善LPS诱导的小鼠小肠损伤,可能与花生四烯酸代谢、IgA相关的肠道免疫代谢以及TRP通道炎症调控通路密切相关。     

重楼多指标UPLC定量分析及其化学品质综合评价

目的探讨10种重楼药材中7种有效成分含量,并进行化学成分整合评控,为其资源评价提供了科学依据。方法收集不同产地55批重楼药材,采用UPLC法测定重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ、薯蓣皂苷、重楼皂苷H、纤细薯蓣皂苷的含量,进一步采用TOPSIS数学模型对含量结果进行归一化与多指标数据集成化,获得重楼中7种指标的化学品质综合指数。结果 10种重楼药材的综合评价排名由高到低依次为长柱重楼(Ci=0.275 5)多叶重楼(Ci=0.273 2)大理重楼(Ci=0.269 8)滇重楼(Ci=0.244 5)南重楼(Ci=0.234 5)狭叶重楼(Ci=0.159 1)黑籽重楼(Ci=0.141 6)矮重楼(Ci=0.117 8)七叶一枝花(Ci=0.115 1)毛重楼(Ci=0.114 9),表明不同种重楼化学综合质量差异较大,其长柱重楼、多叶重楼和大理重楼的化学综合质量优于滇重楼,南重楼与滇重楼的结果较为接近,可作为滇重楼资源扩充的优势品种。结论通过TOPSIS整合评控对重楼类中药材的质量评价有一定的参考依据。     

黄芪甲苷配伍三七总皂苷对脑缺血大鼠BMSCs移植后神经修复的影响

目的 探讨黄芪甲苷IV（astragaloside IV,AST IV）与三七总皂苷（Panax notoginseng saponins,PNS）配伍联合骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）移植对脑缺血大鼠神经功能修复的影响。方法 大鼠随机分为对照组、模型组、AST IV（10 mg/kg）与PNS（25 mg/kg）低剂量组、AST IV（20 mg/kg）与PNS（50 mg/kg）高剂量组、BMSCs输注组、BMSCs输注联合AST IV（10 mg/kg）与PNS（25 mg/kg）低剂量组、BMSCs输注联合AST IV（20 mg/kg）与PNS（50 mg/kg）高剂量组。全骨髓贴壁法分离、纯化BMSCs,流式细胞术检测BMSCs表面标志物CD29、CD90、CD34、CD45阳性表达率。各给药组给予药物进行干预,采用大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）建立局灶性脑缺血模型,采用Longa法测定各组大鼠神经功能缺损症状;采用苏木素-伊红（HE）染色与尼氏染色测定各组大鼠脑组织病理变化;采用免疫荧光法检测各组大鼠海马区BMSCs和神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase,NSE）阳性表达;采用Western blotting法测定各组大鼠脑组织脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）和胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line derived neurotrophic factor,GDNF）蛋白表达。结果 成功分离培养BMSCs,表面标志物CD29、CD90、CD34、CD45鉴定符合BMSCs特征。大鼠脑缺血后出现神经功能缺损症状及脑组织病理损伤,模型组大鼠神经功能缺损评分和脑组织细胞损伤率显著升高（P<0.01）,尼氏体数量显著减少（P<0.01）;各给药组均能够不同程度减轻上述病理改变,其中效应最强为BMSCs输注联合AST Ⅳ＋PNS高剂量组（P<0.01）,优于单用药物和单用BMSCs输注。大鼠脑缺血后神经元损伤,输注BMSCs后,细胞可在缺血侧脑组织增殖并分化为神经元,药物联合BMSCs输注能够增强BMSCs在大鼠脑内的增殖和分化。大鼠脑缺血后,BDNF和GDNF蛋白表达增加,各药物组均能够不同程度上调其表达,其中效应最强为BMSCs输注联合ASTⅣ＋PNS组（P<0.01）,优于单用药物和单用BMSCs输注。结论 AST Ⅳ配伍PNS能够促进BMSCs移植的存活,靶向修复脑缺血后受损神经元,其机制可能与改善脑缺血后脑内局部微环境,促进移植干细胞的存活、增殖和分化有关。     

合欢皮总皂苷抗肿瘤作用靶点鉴定与分子机制解析

合欢皮作为常用中药,临床常用于治疗失眠、焦虑、肿瘤等。现代药理中针对合欢皮总皂苷(TSAJ)抗肿瘤活性多有报道,但由于单体成分分离困难,药理机制难以开展。该研究采用MTT法和Hoechst 33258染色法,确认了TSAJ对肝癌细胞的生长抑制作用,构建了表面修饰有TSAJ的固相亲合微球,利用该固相微球特异性地从人肝癌细胞裂解液中富集靶点蛋白,再利用高分辨质谱对富集到的靶点蛋白进行鉴定。采用Matabo Analyst 3.0处理数据,筛选并确定了Exportin-2,Beta-actin-like protein 2,Myosin-9,Protein transport protein Sec61 subunit beta,Cytochrome c oxidase copper chaperone等5个靶点蛋白。这些蛋白分别具有调控细胞凋亡及细胞生长、分化、运动等功能,提示TSAJ的抗肿瘤机制可能与诱导细胞凋亡及抑制肿瘤血管生成有关。综上所述,该研究利用TSAJ修饰的固相亲和微球,特异性富集并鉴定了TSAJ的靶点蛋白,从靶点源头上解释了TSAJ抗肿瘤作用机制,同时也为中药复杂体系的分子药理机制研究提供了一种全新的思路。     

穿山龙皂苷的药理作用及机制的研究现状

穿山龙属于薯蓣科植物,广泛分布于我国的华北、东北、青海等地区,其根茎是一种重要的中药材,在我国具有几千年的应用历史。据中医学记载,该药材具有止咳化痰、祛风止痛、舒筋活血等功效。现代研究表明,该药材的主要活性成分为皂苷,具有抗肿瘤、抗炎、降血脂、抑菌和抗病毒等作用。鉴于其诸多的生物学活性及药理作用,针对其开发和应用具有良好的前景。该文对穿山龙皂苷的药理活性、治疗作用及机制的研究现状加以总结,为进一步研发穿山龙皂苷提供理论基础。     

升麻无公害种植技术探讨＊

升麻是东北地区重要道地药材之一。近年来，随着市场需求量增大，导致升麻野生资源日益减少。目前，升麻人工栽培技术研究处于探索阶段，并未形成完整的栽培体系。因此，可直接以无公害种植标准对升麻药材进行无公害种植生产研究并推广。为了指导无公害升麻药材生产，生产安全有效、质量稳定的中药材，本文依据本课题组多年研究结果，结合升麻药材的生长特性和研究现状，探索建立升麻药材无公害栽培技术体系，促进升麻药材无公害、标准化、产业化发展。     

超高效液相色谱-高分辨质谱法同时测定类叶牡丹中9种三萜皂苷类成分

目的建立超高效液相色谱-高分辨质谱法(UPLC-FT/MS)同时测定类叶牡丹Cauorlhyllum robustum中9种三萜皂苷类成分的方法。方法采用正离子模式;色谱柱:ACE Excel 3 C_(18)(100 mm×2.1 mm,3.0μm);保护柱:ACE Excel 3C_(18)(12.5 mm×4.6 mm,3.0μm);流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B)溶液,梯度洗脱,体积流量0.40 m L/min,柱温35℃。结果定量分析的类叶牡丹中三萜皂苷类成分在考察的浓度范围内呈良好的线性关系(r0.996);加样回收率和RSD分别在98.49%~107.03%和1.00%~3.33%。结论本研究建立的同时测定类叶牡丹中9种三萜皂苷类成分的UPLC-FT/MS定量分析方法灵敏度高、分辨率高、质量稳定并且简便、准确,可为综合评价类叶牡丹的质量提供参考。     

毛冬青三萜皂苷对动脉粥样硬化大鼠肠道菌群的影响

目的探讨毛冬青三萜皂苷对动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)大鼠肠道菌群的影响。方法采用高脂饮食联合ip维生素D3诱导AS大鼠模型,给予辛伐他汀和毛冬青三萜皂苷进行干预,检测各组大鼠血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、一氧化氮(nitric oxide,NO)、内皮素-1(endothelin-1,ET-1)、血管紧张素-Ⅱ(angiotensin-Ⅱ,Ang-Ⅱ)水平;采用苏木素-伊红(HE)染色法观察各组大鼠胸主动脉病理变化;通过高通量测序检测各组大鼠肠道菌群变化。结果与模型组比较,毛冬青三萜皂苷组AS斑块减少,血管内皮功能改善,血清中TC、ET-1和Ang-Ⅱ水平显著降低(P0.05、0.01),HDL-C、NO水平明显升高(P0.05、0.01),NO/ET-1显著升高(P0.05、0.01)。16S rRNA测序结果显示,模型组大鼠肠道菌群紊乱,经毛冬青三萜皂苷干预后大鼠肠道菌群结构改善,拟杆菌等益生菌相对丰度增加,大肠杆菌等致病菌相对丰度降低。结论毛冬青三萜皂苷可以调节AS大鼠肠道菌群结构,对AS大鼠具有较好的治疗作用。     

基于UPLC指纹图谱和多成分定量评价不同产地升麻药材质量

目的 采用超高效液相色谱法（UPLC）建立升麻药材指纹图谱,并同时测定3种有效成分的含量,评价不同产地升麻药材质量的差异。方法 采用UPLC法进行测定,色谱柱为Agilent SB C₁₈（100 mm×2.1 mm,1.8 μm）;流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液,梯度洗脱,体积流量为0.3 mL/min,波长为320 nm,柱温为35 ℃,进样量为1μL;建立15批升麻药材指纹图谱,通过对照品比对并结合质谱分析,对共有峰进行鉴定,并对3种成分的含量进行测定;对15批升麻药材指纹图谱进行相似度评价及主成分分析（principal component analysis,PCA）,利用正交偏最小二乘法-判别分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis,OPLS-DA）寻找不同产地升麻药材的差异性成分。结果 升麻药材指纹图谱有16个共有峰,指认出其中3个峰,分别为咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸;除辽宁产区的3批样品外,其余12批相似度均大于0.95;PCA将15批升麻药材划分为2类,OPLS-DA法确定7个差异标志物,差异显著性排序,分别为峰7＞峰11＞峰9＞峰8＞峰10＞咖啡酸＞峰4。辽宁产区咖啡酸、阿魏酸和异阿魏酸总含量明显高于其它产地。结论 该方法能有效地分析不同产地升麻药材质量的差异性,为不同产地升麻药材质量的评价提供参考。     

基于网络药理学黄芩-黄连药对治疗2型糖尿病作用机制探讨

目的探讨黄芩-黄连药对治疗2型糖尿病(T2DM)的作用机制。方法借助中药系统药理学分析平台(TCMSP)检索黄芩、黄连的化学成分和作用靶点,通过OMIM、TTD、Drugbank、Digsee等多个数据库查询与T2DM相关的基因。通过Uni Prot数据库查询靶点对应的基因,进而运用Cytoscape3.2.1构建化合物-靶点(基因)网络、蛋白相互作用(PPI)网络筛选出核心靶点,最后通过DAVID进行基因本体(GO)功能富集分析和基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,研究其作用机制。结果化合物-靶点网络包含42个化合物和相应靶点213个,关键靶点涉及PTGS2、PTGS1、HSP90AA1、HSP90AB1、NOS2等。PPI核心网络包含15个蛋白,关键蛋白涉及TNF、IL6、INSR等。GO功能富集分析得到GO条目108个(P0.05),其中生物过程(BP)条目87个,分子功能(CC)条目9个,细胞组成(MF)条目12个。KEGG通路富集筛选得到24条信号通路(P0.05),涉及胰岛素抵抗通路、T2DM通路、胰岛素信号传递通路等。结论黄芩-黄连中的活性成分主要通过DPP4、PPARG、IL6、PPARD、TNF等靶点调节炎症细胞因子、作用于胰岛素受体协同治疗T2DM。