RNA干扰技术抑制胰腺癌细胞PANC-1突变型K-ras基因表达的实验研究

构建特异性针对胰腺癌细胞株PANC-1的重组质粒pcensil-1-P1(阴性对照pGensil-1-HK)并采用脂质体介导的方法转染胰腺癌细胞.应用RT-PCR法和蛋白免疫印迹(westem bloning)法检测PANC-1细胞K-ras基因mRNA和蛋白的表达,CCK-8方法测量细胞生长曲线.结果测序证实质粒表达载体构建成功,PANC-1细胞突变型K-ras mRNA及蛋白表达较非特异性转染组以及未转染组、阴性对照组相比明显减少,细胞生长受到明显抑制(P＜0.05).认为RNA干扰技术对特异性转染的胰腺癌细胞的突变K-ras基因表达有抑制作用,使细胞生长受到抑制;本研究为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法.     

Sirtinol联合K-ras基因RNA干扰对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨Sirtinol联合K-ras基因RNA干扰对胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响.方法:用50μmol/m L的Sirtinol和50 nmol K-ras si RNA处理胰腺癌PANC-1细胞48 h,分为C组(无加药处理),K组(加K-ras si RNA处理),S组(加Sirtinol处理),(K+S)组(加K-ras si RNA和Sirtinol处理);Western blot检测SIRT1蛋白的表达情况,Q-PCR检测K-ras m RNA水平和周期蛋白Cyclin D1 m RNA水平,MTT检测细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况.结果:Western blot结果显示相对于C组和K组,S组和(K+S)组中的SIRT1蛋白的表达明显下降;Q-PCR结果显示K组和(K+S)组中的K-ras m RNA水平分别是C组的0.454±0.037、0.413±0.032倍,差异具有统计意义;MTT结果显示C组、K组、S组和(K+S)组的A值分别是0.814±0.025、0.634±0.038、0.613±0.036、0.401±0.019,相对于C组,K组、S组和(K+S)组的A值明显下降,其中(K+S)组最明显;Q-PCR结果显示K组、S组和(K+S)组中的Cyclin D1 m RNA水平分别是C组的0.693倍±0.046倍、0.634倍±0.032倍、0.400倍±0.034倍,差异具有统计学意义,其中(K+S)组下降最明显;流式细胞仪显示C组、K组、S组和(K+S)组的凋亡率分别是4.29%±0.246%、7.4 6 9%±0.4 5 7%、8.2 0 6%±0.4 9 0%、12.272%±0.675%,相对于C组,K组、S组和(K+S)组的凋亡率明显上升,其中(K+S)组最明显.结论:Sirtinol联合K-ras si RNA可以更明显的抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖和促进其凋亡.     

短发夹状RNA对人肝癌细胞环氧合酶-2的抑制作用

目的:构建针对人环氧合酶-2(COX-2)基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒,观察其在不同时间点对人不同肝癌细胞株COX-2表达的影响.方法:以人COX-2mRNA编码区作为RNA干扰靶点,构建shRNA真核表达载体质粒WBH1和WBH2,应用阳离子脂质体分别转染人肝癌细胞株HepG2和Bel7402,利用逆转录聚合酶链反应和Westernblot法分别观察两株细胞转染后24,48,72,和96hCOX-2mRNA和蛋白的表达变化,检测抑制效果.结果:质粒在HepG2细胞和Bel7402细胞中的转染率分别约为60%和54%.WBH1导入细胞24,48,72和96h后,逆转录聚合酶链反应检测COX-2mRNA表达抑制率,HepG2细胞分别为18.5%,88.6%,52.8%和42.4%(P<0.01).Bel7402细胞分别为9%,45.1%,70.1%和56.3%(P<0.01).Westernblot法检测蛋白表达抑制率,HepG2细胞分别为10.3%,80.5%,45.3%和39.0%(P<0.01);Bel7402细胞分别为8.3%,40.2%,66.4%和35.6%(P<0.01).质粒WBH2对COX-2的表达无影响(P>0.05).结论:针对人COX-2的shRNA能高效特异的抑制不同肝癌细胞株的COX-2表达.HepG2细胞和Bel7402细胞分别以48h和72h抑制效果最明显.56.3%(P<0.01).Westernblot法检测蛋白表达抑制率,HepG2细胞分别为10.3%,80.5%,45.3%和39.0%(P<0.01);Bel7402细胞分别为8.3%,40.2%,66.4%和35.6%(P<0.01).质粒WBH2对COX-2的表达无影响(P>0.05).结论:针对人COX-2的shRNA能高效特异的抑制不同肝癌细胞株的COX-2表达.HepG2细胞和Bel7402细胞分别以48h和72h抑制效果最明显.     

短发夹状RNA干扰窖蛋白-1表达对人肝细胞增殖的影响

目的 探讨体外下调窖蛋白-1(Cav-1)的表达对人肝细胞增殖的影响.方法 构建Cav-1特异性短发夹状RNA(shRNA)表达载体psiRNA-CAV1,转染人正常肝细胞系(CHL),抗菌素Zeocin筛选单克隆细胞株,建立Cav-1低表达的人肝细胞模型(CAV7).四甲基偶氮唑盐法检测Cav-1下调对肝细胞增殖的影响,Western blot检测Erk1/2和Akt等增殖生长相关信号蛋白表达和活性的变化. 结果 正常肝细胞有高水平的Cav-1表达,稳定转染psiRNA-CAV1后,Cav-1表达减少约70%;Cav-1表达下调后,肝细胞的增殖先变快(24 h和72 h,P＜0.05;96 h,P＜0.01),后减慢;增殖相关蛋白p-Akt和p-Erk1/2的表达减少,即Akt和Erk1/2两条通路受到抑制. 结论 Cav-1可能在正常肝细胞的增殖中起重要作用.     

短发夹状RNA抑制survivin基因在肝癌细胞中的表达

目的 构建抗凋亡因子survivin的短发夹状RNA(shRNA)，观察其在肝癌细胞株HepG2、SMMC—7721中对survivin基因表达的抑制作用。方法 设计，合成两对survivin编码基因的反向重复序列，中间分别间隔4和8个nt，分别定向克隆至载体pTZU6 1的U6转录启动子下，构建pshRNA—survivin1和pshRNA—survivin2重组质粒，与表达survivin基因的质粒pEGFP—Cl—survivin共转染肝癌细胞株HepG2和SMMC—7721，荧光显微镜下观察融合蛋白中GFP的表达以分析pshRNA—survivin对survivin基因表达的抑制作用。结果 酶切分析和测序证实pshRNA—survivin1和pshRNA—survivin2构建成功；两组shRNA对survivin的表达均有明显的抑制作用，抑制率达80％以上；两重组质粒在HepG2和SMMC—7721两种细胞中抑制目的基因的作用无明显差异；反向重复序列中间隔4或8个nt构建的shRNA，对抑制目的基因的表达无显著差异。结论 构建的pshRNA—survivin重组质粒能有效抑制survivin基因在肝癌细胞株HepG2、SMMC—7721中的表达。     

短发夹状RNA抑制RhoA基因在HepG2细胞中的表达

目的构建针对人RhoA基因的短发夹状双链RNA(shRNA)真核表达载体,观察其对人肝癌细胞株HepG2 RhoA表达的特异性抑制效应。方法设计合成针对RhoA mRNA编码序列两个不同靶点的核苷酸片断,并定向克隆到真核表达载体Pgenesil-2的U6启动子下,构建重组质粒phsRNA-RhoA1和pshRNA-RhoA2,不针对任何基因组序列的重组质粒pshRNA-HK作为阴性对照。脂质体法转染到HepG2细胞后,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)分别检测RhoA基因表达的抑制效应。结果酶切鉴定和测序结果证实重组质粒均构建成功。转染HepG2后,pshRNA-RhoA2组RhoA基因mRNA和蛋白的表达水平均显著降低,与pshRNA-HK组和空白细胞组相比,差异有统计学意义(r=-19.28,t=-7.08,P<0.05)。而pshRNA-RhoA1组抑制效应不明显,差异无统计学意义(r=-0.16,t=-0.30,P>0.05)。结论构建的重组质粒pshRNA-RhoA2能特异有效地抑制RhoA基因在肝癌细胞HepG2中的表达,为进一步研究RhoA基因在肝癌中的作用提供了有效的分子工具。     

靶向胰腺癌PANC-1细胞整合素连接激酶基因RNA干扰质粒的构建及鉴定

目的:构建整合素连接激酶(integrin-linkedkinase,ILK)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)重组质粒并检测其对胰腺癌PANC-1细胞ILK基因表达的干扰效率,为进一步研究胰腺癌中ILK基因功能奠定实验基础和理论依据.方法:设计并构建3条含有针对ILK基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列的重组质粒并进行DNA测序.通过阳离子脂质体Lipofectamine 2000将重组质粒转入人胰腺癌细胞株Panc-1细胞中,G418压力筛选至得到稳定转染细胞克隆,利用Real-Time PCR和Western blot检测ILK基因的表达抑制情况.筛选出干扰效率最高的重组质粒.结果:经DNA测序证实胰腺癌PANC-1细胞ILK基因的R NA干扰重组质粒构建成功;重组质粒稳定转染Panc-1细胞后(各组转染效率均>90%),各实验组ILK基因表达均被有效地抑制,其中重组质粒-2的干扰效率最高,其mRNA及ILK表达显著下调,其抑制率分别为93.01%和65.69%;ILK mRNA表达较阴性对照组、空质粒组表达量显著下降(0.090±0.009vs 1.147±0.110,1.005±0.121,P<0.01).结论:成功构建ILK基因RNA干扰重组质粒,重组质粒能有效抑制胰腺癌Panc-1细胞ILK基因表达.为进一步研究ILK在胰腺癌中的基因功能奠定基础.     

抑制MDR1基因表达shRNA RNAi系统的构建

目的构建抑制多药耐药基因(MDR1)表达的短发夹RNA(sh RNA)真核表达载体系统.方法根据MDR1基因已知序列,设计两段21个碱基的MDR1特异性靶序列,合成两对62nt 并含有编码shRNA序列的寡核苷酸,双链退火后,克隆到经过BamH I和Xba I双酶切后线性 PG E-1载体的U6启动子下游,重组构建RNA干扰(RNAi)质粒.结果对重新构建的pshRNA-MDR1载体经P CR扩增后行电泳分析,并对含有插入基因片段行测序分析.结果表明,62个碱基均成功插入到预计位点,并且序列完全一致.结论载体的成功构建为研究其对MDR1 基因表达的抑制作用打下基础,同时使我们发展了在体内合成siRNA的方法.     

RNA介导Survivin基因沉默对胰腺癌细胞Panc-1细胞株凋亡及增殖的影响

目的观察靶向封闭survivin基因对胰腺癌细胞株Panc-1增殖和凋亡的影响，探讨survivin基因在胰腺癌的发生、发展中作用：方法设计2对survivin-shRNA，体外转录制备shRNA。利用脂质体转染技术将survivin-shRNA转染胰腺癌细胞株（Panc-1），RT-PCR检测survivin-mRNA水平；MTT法检测细胞生长情况并绘制细胞生长曲线；细胞形态学观察及流式细胞仪分析细胞凋亡。结果转染2对survivin-shRNA可分别使Panc-1细胞survivin-mRNA水平下降54．86％，52．19％；MTT法检测结果显示：转染两对survivin-shRNA24、48、72小时对细胞增殖无明显影响（P〉0．05）；细胞形态学观察及流式细胞仪分析结果显示：转染两对survivin-shRNA 24、48、72小时对细胞凋亡无明显影响（P〉0．05）。结论应用RNAi技术，将survivin-shRNA转染胰腺癌细胞（Panc-1），能成功介导survivin基因沉默，达到部分靶向封闭survivin的目的：部分靶向封闭survivin对胰腺癌细胞株Panc-1凋亡及增殖无明显影响。提示：survivin在胰腺癌细胞增殖与凋亡调控中所起的作用可能并非关键性的。因而以survivin为靶基因的基因治疗对胰腺癌可能无效。     

短发夹状双链RNA抑制丙型肝炎病毒IRES介导的基因表达

目的研究载体表达的短发夹状双链RNA（shRNA）对丙型肝炎病毒（HCV）IRES介导的基因表达的特异性抑制作用。方法构建HCV IRES调控的绿色荧光蛋白表达载体（pIRES—GFP）和虫荧光索酶表达载体（p5′ UTR—Luc），以及针对HCV IRES的shRNA表达载体（pshRNA-HCV）。共转染HepG2细胞，于转染后24、48、72h观察绿色荧光的强弱，用Western blot检测绿色荧光蛋白的表达，半定量逆转录聚合酶链反应法检测GFP的mRNA水平。双荧光索酶系统检测虫荧光索酶活性。结果pshRNA-HCV作用组绿色荧光强度明显弱于未干扰组，GFP蛋白表达量及虫荧光素酶活性降低60％～70％，半定量逆转录聚合酶链反应显示pshRNA-HCV导致了GFP基因mRNA水平的降低。结论针对HCV IRES的shRNA能够显著和特异地抑制该区域调控的蛋白表达水平及mRNA水平，该研究结果为利用RNA干扰技术治疗HCV感染进行了初步探索。     

Identification of effective siRNA against K-ras in human pancreatic cancer cell line MiaPaCa-2 by siRNA expression cassette

AIM: We shall construct the small interfering RNA (siRNA) expression cassette (SEC) targeting activated K-ras gene sequence, identify more effective siRNA sequence against K-ras gene in human pancreatic cancer cell line MiaPaCa-2 by SEC and reveal the anti-cancer effects of RNA interference (RNAi) and its therapeutic possibilities. METHODS: Three different sites of SECs were constructed by PCR. K1/siRNA,K2/siRNA and K3/siRNA are located at sites 194,491 and 327, respectively. They were transfected into MiaPaCa-2 cells by liposome to inhibit the expression of activated K-ras. In the interfering groups of sites 194 and 491, we detected the apoptosis in cells by FACS after they were incubated for 48 h, then we tested the alternation of K-ras gene in MiaPaCa-2 cells by RT-PCR immunofluorescence, respectively. RESULTS: Introduction of the Kl/siRNA and K2/siRNA against K-ras into MiaPaCa-2 cells leads to increased apoptosis, and the number of apoptotic cells is increased compared with control cells. The tests of RT-PCR immunofluorescence show the effects of inhibiting expression of activated K-ras gene by RNA interference in the Kl/siRNA and K2/siRNA groups. We also find that the introduction of K3/siRNA has no effect on MiaPaCa-2 cells. CONCLUSION: Kl/siRNA and K2/siRNA can inhibit the expression of activated K-ras but K3/siRNA has no effect, demonstrating that Kl/siRNA and K2/siRNA are effective sequences against K-ras gene and K3/siRNA are not. We conclude that specific siRNA against K-ras expression may be a powerful tool to be used therapeutically against human pancreatic cancer.     

Growth inhibition induced by short hairpin RNA to silence survivin gene in human pancreatic cancer cells

BACKGROUND:Survivin is known to be overexpressed in various human malignancies,including pancreatic cancer,and mediates cancer cell proliferation and tumor growth,so the regulation of this molecule could be a new strategy for treating pancreatic cancer.In this study,short hairpin RNAs (shRNAs) specific to survivin were introduced into human pancreatic cancer Patu8988 cells to investigate the inhibitory effects on survivin expression and cell proliferation in vitro and in vivo.METHODS:Three kinds of shRNA sp...     

健择对胰腺癌细胞株蛋白质表达的影响

目的观察健择致胰腺癌细胞株蛋白质变化的影响,寻找一些在化疗过程中出现的蛋白质,为临床治疗提供理论依据.方法利用蛋白质组学技术,分析胰腺癌细胞株SW-1990在加入健择和5-FU后其蛋白质谱的变化,最后鉴定其差异表达的蛋白质.结果培养细胞受抑制约50%时,健择为1～100 ng/ml,5-FU为250～2 500 ng/ml.质谱鉴定了9个差异表达的蛋白质,其中对照组3个,加药组6个.结论健择对细胞株的作用明显优于5-FU.β-肌动蛋白、MGC:19713等某些高表达的蛋白质可能成为观察化疗效果的重要指标.     

胰腺细针穿刺活检组织K-ras突变检测的诊断价值

目的 检测内镜超声引导下细针穿刺穿刺物中K-ras基因的突变,探讨其对胰腺癌早期诊断的价值.方法 收集27例胰腺癌、9例其他恶性肿瘤及14例良性胰腺占位患者的细针穿刺物,应用肽核酸(PNA)钳制PCR法检测K-ras突变.结果 胰腺癌患者K-ras突变阳性率为88.9%,其他恶性肿瘤为44.4%,良性胰腺占位为35.7%,胰腺癌与其他两种病变差异显著(P=0.013,P=0.001).胰腺癌与其他恶性肿瘤比较,K-ras基因突变的敏感性、特异性、阳性预测率、阴性预测率、准确率分别为88.9%、55.6%、85.7%、62.5%、80.6%,差异显著(P=0.013);与良性胰腺占位病变比较,分别为88.9%、64.3%、82.8%、75.0%、80.5%,差异亦显著(P=0.001).联合穿刺物细胞学检查和K-ras基因突变检测,胰腺癌的阳性率高达96.3%.结论 胰腺组织穿刺物的K-ras基因突变检测可提高胰腺癌诊断的阳性率.     

胰腺癌及相关胰腺疾病组织中K-ras12、13密码子突变的检测及其临床诊断价值

目的 研究K-ms基因第12、13位密码子突变在胰腺导管腺癌及相关胰腺疾病组织中的定量检测及其临床意义.方法 收集经手术切除的130例(胰腺导管腺癌105例,胰腺腺鳞癌8例,胰腺黏液腺癌2例,内分泌癌3例,十二指肠及壶腹部恶性肿瘤6例,胰腺良性疾病6例)有明确病理诊断的组织标本及临床资料,应用双荧光探针联合肽核酸钳制实时定量PCR方法检测组织中K-ras基因第12、13密码子的突变量,以突变量＞100拷贝为阳性计算突变阳性率.结果 胰腺导管腺癌、腺鳞癌、黏液腺癌、内分泌癌、十二指肠及壶腹部恶性肿瘤、胰腺良性疾病的K-ras12密码子突变量的中位数及四分位数分别为4062(495,10800)、238(45,8420)、15(9,21)、3(3,16)、2283(73,5037)和21(8,56);突变阳性率分别为84.8％ (89/105)、50.0％(4/8)、0、0、66.7％ (4/6)和16.7％(1/6).胰腺导管腺癌的K-ras12密码子突变量及阳性率与胰腺腺鳞癌、十二指肠及壶腹部恶性肿瘤差异无统计学意义,而较胰腺黏液腺癌、内分泌癌、胰腺良性疾病显著增加(P值均＜0.05).通过接受者操作特征(ROC)曲线分析,胰腺导管腺癌K-ras 12密码子突变的曲线下面积为0.727,诊断胰腺导管腺癌的敏感性及特异性分别为84.8％、64.0％.胰腺导管腺癌的K-ras基因第12密码子突变量与患者生存期显著相关.胰腺导管腺癌的K-ras 13密码子突变量及阳性率与其他胰腺疾病的差异无统计学意义.结论 K-ras12密码子基因突变对胰腺癌有较好的鉴别诊断及患者预后判断价值.     

High proportion of mutant K-ras gene in pancreatic juice of patients with pancreatic cystic lesions

BACKGROUND/AIMS: It was recently reported that the quantitative analysis of mutant K-ras gene in pancreatic juice could be useful for the diagnosis of pancreatic cancer. This methodology was applied to patients with pancreatic cystic lesions. METHODS: DNA was extracted from pancreatic juice collected at the time of endoscopy with injection of secretin. The ratio of the K-ras mutant allele to the wild-type allele was measured by two methods to detect and semiquantify mutant K-ras gene: polymerase chain reaction/preferential homoduplex formation assay and enriched polymerase chain reaction/enzyme linked mini-sequence assay. RESULTS: A high frequency of K-ras mutation was detected (more than 2% of all K-ras genes) in six of 14 patients (43%) with pancreatic cysts. This frequency was similar to those detected in patients with pancreatic adenocarcinoma and in intraductal papillary neoplasms of the pancreas. In contrast, the frequency of mutation was low (less than 2%) in patients without either pancreatic cysts or pancreatic neoplasms. CONCLUSIONS: K-ras gene mutation may be derived from duct cells in the pancreas with a high potential for tumorigenesis. Therefore careful follow up of patients with a pancreatic cyst is recommended if they are found to have a high level of the mutant gene in the pancreatic juice.     

γ-氨基丁酸对胰腺癌SW1990细胞生长及VEGF表达的影响

目的观察γ-氨基丁酸（GABA）对胰腺癌SW1990细胞生长及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法采用MTT法和流式细胞术（FCM）检测GABA对胰腺癌SW1990细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期的影响,放射免疫分析法检测cAMP含量,RT—PCR检测VEGF mRNA表达,Western blot检测VEGF蛋白含量。结果GABA促进胰腺癌SW1990细胞生长,抑制细胞凋亡,同时促进细胞内cAMP增加。随着GABA浓度增加（80～320μmol／L）,VEGF mRNA及蛋白表达明显增加。结论GABA影响胰腺癌细胞增殖、凋亡和血管形成,可能参与调节肿瘤的生长与转移。     

胰腺星状细胞对胰腺癌AsPC-1细胞侵袭转移的影响

目的 探讨胰腺星状细胞(PSCs)对胰腺癌细胞侵袭转移的影响及基质细胞因子-I(SDF-1)在此过程中的作用.方法 常规分离、培养PSCs,收集及浓缩PSCs条件培养液(PSC-CM),应用不同浓度的PSC-CM、抗SDF-1抗体(anti-SDF-1)及两者联合应用处理AsPC-1细胞,采用MTT法检测AsPC-1细胞的增殖,Transwell小室检测细胞迁移,体外侵袭实验观察细胞侵袭能力.结果 对照组及0.25、0.5、1 μg/μl PSC-CM组AsPC-1细胞增殖的吸光度值(A490)分别为0.437 ±0.041、0.472±0.048、0.553±0.057、0.690±0.051,PSC-CM呈剂量依赖性促进细胞增殖,其中0.5、1μg/μl PSC-CM组与对照组间以及0.5 μg/μl与1μg/μl PSC-CM组间的差异具有统计学意义(P值均＜0.05).对照组、anti-SDF-1组、PSC-CM组及PSC-CM± anti-SDF-1组细胞增殖的A490值分别为0.407±0.028、0.416±0.030、0.629±0.048、0.481±0.049;穿膜细胞数分别为(35.3±7.1)、(34.8±5.6)、(140.9±12.7)、(56.5±5.9)个;侵袭细胞数分别为(27.1±2.9)、(29.1±4.2)、(81.5±8.2)、(46.4±4.4)个.anti-SDF-1组与对照组间的差异无统计学意义,PSC-CM组细胞的增殖、迁移、侵袭能力较对照组显著增强(P＜0.05或P＜0.01),PSC-CM± anti-SDF-1组细胞的增殖、迁移、侵袭能力较PSC-CM组显著降低,但仍显著高于对照组(P＜0.05或P＜0.01).结论 PSC-CM可促进AsPC-1的增殖、迁移及侵袭,其机制为部分通过SDF-1/CXCR4受体配体系统.     

二甲双胍对人胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖与凋亡的影响

目的观察二甲双胍对人胰腺癌细胞株CFPAC-1增殖、凋亡的影响,探讨其相关分子机制。方法应用1、2．5、5、10、20、40、60mmol／L二甲双胍处理人胰腺癌CFPAC-1细胞24、48、72h,以未处理的细胞作为对照组。采用CCK-8法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞仪分析细胞周期,AnnexinV／PI双染法检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测磷酸化AMPK（p-AMPK）、FAS、cyclinD1、Bcl-xl、Bax、caspase-3、survivin蛋白的表达。结果二甲双胍呈浓度及时间依赖性抑制CFPAC-1细胞的增殖。40mmol／L二甲双胍处理细胞48h后,G0／G1细胞比例显著增多[（65．93±0.27）％比（42．89±1．02）％],G2／M期、s期细胞比例显著减少[（22．01±2．95）％比（38．28±4．93）％,（13．58±0．43）％比（20．12±3．38）％],差异均有统计学意义（P值均〈0．05）;细胞凋亡率从对照组的（3．01±0．49）％增加到（32．97±3．19）％（P〈0．05）;p-AMPK、Bax、caspase-3表达增强,FAS、cyclinD1、Bcl-xl、survivin表达减弱。结论二甲双胍可以显著抑制CFPAC-1细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能通过激活AMPK信号通路,下调FAS、cyclinD1、survivin表达及Bcl-xl／Bax比值,上调caspase-3表达所致。