怀牛膝愈伤组织悬浮培养及其多糖含量的初步研究

目的：研究怀牛膝悬浮培养条件及其对愈伤组织中ABPS含量的影响。方法：采用正交试验和单因素试验，研究接种时间、接种量、碳源添加及pH对细胞生长量及多糖含量的影响。结果和结论：适宜ABPS生产的培养基是1／4MS＋6-BA0．5mg·L^-1＋2，4-D1．0mg·L^-1＋蔗糖2％＋葡萄糖2％＋果糖1％，pH6．0，培养时间50d，接种量7g·L^-1。     

适宜于中医药特点的复方药效物质基础研究模式的探讨

在文献调研的基础上，总结了近年来中药复方药效物质基础研究模式，针对各研究模式不足之处进行了评述，提出适宜于中医药特点的复方药效物质基础研究模式，预测中药复方药效物质基础研究的发展趋势，为中药复方药效物质基础研究提供思路。     

明党参愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养的研究

目的:建立明党参愈伤组织的诱导及其细胞悬浮培养的技术体系.方法:采用正交试验法研究不同植物激素对明党参叶柄、根和叶片愈伤组织诱导的影响,以及明党参不同外植体细胞的悬浮培养.结果:叶柄最易诱导出愈伤组织,其次是根和叶片,4种植物激素对明党参根和叶柄愈伤组织的诱导都具有极显著的效果,其中诱导叶柄愈伤组织形成的最佳激素组合为0.5 mg·L~(-1) NAA+0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+0.1 mg·L~(-1) KT+0.5 mg·L~(-1) 6-BA,培养14 d左右,诱导率达到100%.此外,明党参叶柄细胞培养至21 d时,细胞量和多糖均达到最大值,分别1 090.28,36.85 mg·L~(-1).结论:明党参叶柄是愈伤组织诱导的最佳外植体和细胞悬浮培养体系的最佳细胞来源.     

培养基成分对怀牛膝愈伤组织诱导及牛膝多糖含量的影响

目的:研究培养基成分对怀牛膝愈伤组织诱导形成及牛膝多糖含量的影响。方法:以怀牛膝无菌苗的叶片、茎段为材料,采用正交设计研究基本培养基,碳源,2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、6-苄基腺嘌呤(6-BA)、N-苯基-N′-噻二唑-5-脲(TDZ)、水解酪蛋白(CH)对愈伤组织诱导和多糖含量的影响。结果:诱导叶片愈伤组织形成的适宜培养基为B₅+2mg·L^-12,4-D+0.5mg·L^-16-BA+30g·L^-1葡萄糖+1g·L^-1CH,诱导茎段愈伤组织形成的适宜培养基为B₅+2mg·L^-12,4-D+1mg·L^-16-BA+30g·L^-1葡萄糖+0.5g·L^-1CH;有利于叶片愈伤组织中多糖含量提高的培养基是LS+1mg·L^-16-BA+1mg·L^-1TDZ+30g·L^-1蔗糖,有利于茎段愈伤组织中多糖含量提高的培养基是LS+1mg.L^-12,4-D+0.5mg·L^-16-BA+1mg·L^-1TDZ+30g·L^-1葡萄糖。结论:初步建立了怀牛膝叶片、茎段诱导愈伤组织的适宜培养条件,为通过植物组织细胞培养途径生产牛膝多糖提供了依据。     

桑叶凝集素的提取工艺优化研究

凝集素是一类非酶非免疫来源的蛋白或糖蛋白，能够与细胞表面的糖残基进行可逆的特异性结合［1］。凝集素不仅具有凝集血细胞、精细胞的作用，还参与生物体内的一些重要生理和病理过程，因此，凝集素在细胞分离鉴定、细胞及亚细胞表面结构研究、转基因植物抗虫研究等方面具有重要应用，是研究生物体内细胞癌变、受精、分化及分子识别等生命过程的有利工具［2-4］。桑树Morus alba L.小乔木或灌木，我国各地均有栽培［5］。现代药理研究表明，桑叶具有疏散风热，清肝名目等功效［5］，但有关桑叶凝集素的研究未见报道，本研究首次从桑叶中提取得到凝集素(Morus alba lectin, MAL)，采用正交试验法对其提取工艺进行初步研究，为进一步研究桑叶凝集素奠定基础。     

中药滴眼剂药学研究的常见问题及建议

中药滴眼剂是中药眼用制剂的常用剂型，属于眼用液体制剂，目前申报较多的中药眼用制剂仍为滴眼剂。中药眼用制剂是指由药材提取物、药材制成的直接用于眼部发挥治疗作用的制剂，分为：眼用液体制剂（滴眼剂）、眼用半固体制剂（眼膏剂）等。也有以固态药物形式包装，另备溶剂，临用前配成溶液或混悬液的制剂［1］。《中国药典》2005年版二部对滴眼剂定义为：系指药物与适宜辅料制成的无菌水性或油性澄明溶液、混悬液或乳状液，供滴入的眼用液体制剂,也可将药物以粉末、颗粒或片状形式包装，另备溶剂，在临用前配成澄明溶液或混悬液［2］。由此可见，中药滴眼剂也应为无菌制剂。安全、有效、质量可控是药品应具有的基本特性，也是药品评价的基本原则。药品的质量与原辅料、生产过程控制、质量研究与质量标准制定、稳定性研究、包装贮藏考察等全过程密切相关，需要从原料到生产贮藏进行全程质量控制。但是，在对中药滴眼剂审评中经常发现原料药和辅料的标准、来源不明确，辅料选择依据不足，工艺、质量研究不充分等方面存在的问题，严重影响了产品的质量与评价。在此进行总结分析并提出建议。     

培养条件对西洋参悬浮细胞生物量和 活性成分的影响

目的:研究主要理化因子对西洋参细胞悬浮培养的影响.方法:利用组织培养技术结合高效液相色谱法和紫外分光光度法,考察接种量、培养基种类、基质pH和光照条件对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb1以及西洋参多糖含量的影响.结果:当接种量为25 g·L~(-1)时,西洋参细胞的干重增殖倍数显著增加;通过考察Ms,SH,B_5 3种培养基对西洋参细胞的影响,结果表明MS培养基最有利于西洋参细胞生长,B_5培养基最有利于人参皂苷和西洋参多糖的合成.3种培养基中西洋参细胞多糖含量均高于栽培西洋参;pH变化对西洋参细胞生长影响不大,pH 6.0时,最有利于人参皂苷Re和西洋参多糖的合成;光照培养显著促进西洋参细胞次生代谢物的合成,但对多糖合成没有太大影响.结论:接种量、培养基种类、基质pH和光照条件对西洋参悬浮细胞生长,人参皂苷Re,Rb_1以及西洋参多糖合成有显著影响.     

大量元素和植物生长物质对怀牛膝愈伤组织生长及多糖量的影响

目的 研究大量元素和植物生长物质对怀牛膝愈伤组织生长及怀牛膝多糖量的影响.方法 以怀牛膝无菌苗的叶片、茎段为材料,采用正交试验设计方法研究培养基中大量元素和植物生长物质6-BA、IBA、NAA和2,4-D对怀牛膝愈伤组织生长的影响,并在愈伤组织形成高峰期30 d时,采用酚一硫酸比色法对其中多糖的量进行检测,对所得实验数据进行极差分析、方差分析比较.结果 大量元素的添加量对愈伤组织的诱导、生长和多糖的量无显著影响,6-BA对怀牛膝愈伤组织多糖量影响影响显著.结论 诱导怀牛膝愈伤组织形成多糖的适宜培养基是1/4MS+6-B.A0.5 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L.     

金复康对大鼠大肠癌癌前病变的改善作用及尿液代谢物研究

目的：考察二甲肼诱发大肠癌癌前病变大鼠的尿液中内源性小分子代谢物谱的变化过程，以及中药金复康干预下大鼠代谢谱的变化过程。方法：利用基于氯甲酸乙酯衍生、GCMS技术的代谢组学方法。结果：经主成分分析表明，模型组大鼠的代谢谱具有随时间逐步偏离起始点的趋势，而金复康干预组大鼠的代谢谱则表现出先偏离再回归起始点的代谢谱变化轨迹，正常组大鼠的代谢谱在实验过程中没有出现明显的变化。对影响模型组大鼠与正常组大鼠代谢谱分离的权重变量进行鉴定和研究，发现三羧酸循环、色氨酸循环、多胺代谢等代谢通道的波动，以及肠道菌群代谢的紊乱与二甲肼诱导的大肠癌癌前病变相关。结论：代谢组学研究表明，金复康能有效逆转二甲肼诱导的大肠癌癌前病变大鼠的代谢谱的偏移，代谢组学的研究结果与病理实验结果相一致。     

三叶青颗粒状愈伤组织悬浮培养系的建立及培养条件的优化

目的建立三叶青颗粒状愈伤组织悬浮培养系,并筛选出适合三叶青细胞生长和总黄酮积累的较佳培养条件。方法比较了基础培养基类型、碳源、氮源、激素等对三叶青颗粒状愈伤组织悬浮细胞生长及黄酮积累的影响。结果三叶青颗粒状愈伤组织悬浮培养可以采用两步法进行:先在MS培养基(含3%蔗糖、30 mmol/L总氮浓度、NH4+-NO3-为1∶2、6-苄氨基嘌呤4 mg/L、吲哚丁酸1.5 mg/L)上培养24 d,再更换到B5培养基(含5%蔗糖、30 mmol/L总氮浓度、NH4+-NO3-为0∶1、6-BA 2 mg/L、吲哚丁酸1.5 mg/L)中培养16 d收获黄酮。结论采用悬浮培养方式生产三叶青颗粒状愈伤组织不仅可以大大地缩短生产周期,而且细胞培养物中的总黄酮量也明显高于原植株及固体培养的愈伤组织,具有较大的可行性。     

磷素对怀牛膝耐铜毒性的影响研究

目的:通过施磷(P)来调控怀牛膝对铜(Cu)的吸收和累积,防止怀牛膝过量吸收重金属Cu.方法:采用2因素完全设计,用自制PVC管栽培.结果与结论:Cu处理间、P处理间以及Cu,P交互间怀牛膝生物量差异都达到显著水平,土壤中P,Cu均为100 mg·kg~(-1)时生物量最大;低Cu可以增加怀牛膝产量,Cu超过200 mg·kg~(-1)后,怀牛膝产量、质量均下降,但对药材中活性成分齐墩果酸和脱皮甾酮的含量无影响.P的施入可以减轻高Cu对植株的毒害,怀牛膝产量增加,重金属Cu含量降低,但是当土壤Cu超过200 mg·kg~(-1)后,怀牛膝药材中Cu高于20.0.mg·kg~(-1)的限度,因此要生产出合格的怀牛膝药材,种植基地土壤中Cu一定要低于200 mg·kg~(-1).     

新疆雪莲细胞悬浮系的建立和黄酮类活性成分的产生

目的:建立新疆雪莲的悬浮培养体系。方法:研究不同培养基、培养基初始pH、碳源、接种量、植物生长物质含量对雪莲细胞生长和黄酮合成的影响。结果:N₆液体培养基在pH5.8、蔗糖含量50g·L^-1、接种量60-80g·L^-1FW时有利于细胞生长和黄酮合成,附加BA0.2mg·L^-1+NAA2mg·L^-1有利于黄酮合成,而附加BA0.5mg·L^-1+NAA3mg·L^-1则对生长有利。结论:培养条件的优化可有效提高雪莲悬浮细胞的生长和总黄酮的合成。     

牛膝的HPLC/UV/MS指纹图谱研究

目的：采用HPLC／UV／MS法构建牛膝药材的指纹图谱。方法：采用Agilent ZorbaxSB-C18柱；甲醇与0．1％甲酸进行梯度洗脱；流速为1．0ml／min。结果：得到分离度、重现性均较好的牛膝药材HPLC／UV指纹图谱，标示了4个共有峰，并借助HPLC／MS技术对其主要色谱峰进行了初步归属。结论：牛膝药材指纹图谱的构建，为控制其质量提供了依据。     

波浪式WAVE生物反应器悬浮培养枇杷细胞生产熊果酸的研究

采用波浪式WAVE生物反应器放大培养枇杷悬浮细胞,研究细胞生长及熊果酸(UA)的累积情况.摇瓶和反应器中,以细胞的干重和UA的含量为指标进行对比试验;反应器中1 L和5 L工作体积下,以培养液中元素代谢、细胞的干重、UA的含量为指标进行对比试验;生物反应器中,1 L的工作体积下,以接种量、转速、转动角度为因素开展正交试验筛选最佳的组合.反应器中细胞的干重增长及UA含量比摇瓶中高出了105.5%,27.65%;生物反应器中不同的工作体积下,培养液中元素的代谢、细胞的干重及UA的累积情况相似;生物反应器中,接种量为80 g,转速为26 r·min^-1,角度为6°是最佳组合,接种后100 h收获,细胞的干重为19.01 g·L^-1,UA质量分数为27.750 mg·g^-1.结果表明WAVE生物反应器比摇瓶更适合枇杷细胞悬浮培养,并且可实现1 L到5 L的培养放大.     

怀牛膝与红牛膝、紫花地榆与白花地榆的紫外谱线组法鉴别

应用紫外吸收光谱谱线组法鉴别（怀）牛膝ＡｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａＢＬ．及红牛膝ＡｃｈｙｒａｎｔｈｅｓｂｉｄｅｎｔａｔａＢｌｕｍｅｆ．ＲｕｂｒａＨＣＯ．的根，紫花地榆ＳａｎｇｕｉｓｏｒｂａｏｆｉｃｉｎａｌｉｓＬ．及白花地榆ＳａｎｇｕｉｓｏｒｂａｃａｎａｄｅｎｓｉｓＬ．根的研究。     

怀牛膝中甾酮类成分的分离与鉴定

为了阐明怀牛膝中具有促进成骨细胞增殖作用的甾酮类化学成分,采用硅胶柱色谱、ODS反相柱色谱和制备型高效液相色谱等方法分离,从怀牛膝大孔树脂50%乙醇洗脱组分中分离得到了5个甾酮类化合物,并通过UV、NMR和MS等波谱确定了其化学结构分别为β-蜕皮甾酮(β-ecdysterone)(1)、25S-牛膝甾酮(25S-inokosterone)(2)、25R-牛膝甾酮(25R-inokosterone)(3)、旌节花甾酮C(stachysterone C)(4)和旌节花甾酮D(stachysterone D)(5),其中化合物旌节花甾酮C为首次从牛膝中分离得到。     

牛膝不同炮制品镇痛抗炎作用研究

采用小鼠扭体法、热板法对牛膝不同炮制品进行了镇痛作用比较,结果表明,牛膝不同炮制品都有一定程度的镇痛作用,其中以酒炙牛膝镇痛作用强而持久。以小鼠由巴豆油所致的耳肿进行抗炎作用比较,结果显示,酒炙牛膝抗炎作用最显著。     

牛膝“泛糖”机制研究

目的 对牛膝“泛糖”机制进行研究。方法 采用正交试验研究牛膝“泛糖”的主要影响因素。结果 环境温度是牛膝“泛糖”的主要因素，其次是相对湿度和药材水分。最佳贮藏条件是环境温度25℃，相对湿度60％，药材水分11％。结论 牛膝药材在环境温度35℃以下，相对湿度70％以下，药材水分9％～13％条件下，可安全贮存。     

怀牛膝根成分的分离与鉴定

目的：研究怀牛膝Achyranthes bidentata根的三萜类化学成分。方法：利用凝胶、正相和反相硅胶色谱反复进行分离和纯化，通过理化、质谱和核磁共振波谱等技术鉴定化合物结构。结果：从怀牛膝根的水溶部分中分离得到7个化合物，分别鉴定为牛膝皂苷A(achyranthoside A，1)、牛膝皂苷E(achyranthoside E，2)、木鳖子皂苷Ib(momordin Ib，3)、竹节参苷IVa(chikusetsusaponin IVa，4)、竹节参苷IVa甲酯(chikusetsusaponin IVa methyl ester，5)、竹节参苷V(chikusetsusaponin V，6)、竹节参苷V甲酯(chikusetsusaponin V methyl ester，7)。结论：化合物1和2为首次从该植物根中分离得到的天然化合物。