柠檬苦素在大鼠体内代谢产物与代谢途径的UHPLC-Q-Orbitrap HRMS分析

目的：采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)分析鉴定柠檬苦素在大鼠体内的代谢产物,探究柠檬苦素单剂量灌胃给药后在大鼠体内原型成分和代谢产物分布的性别差异性,并推测代谢途径。方法：采用Thermo Scientific Accucore^TM C₁₈色谱柱(3mm×100mm,2.6μm),以0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)为流动相进行梯度洗脱(0～1min,5%B;1～6min,5%～20%B;6～18min,20%～50%B;18～23min,50%～80%B;23～25min,80%～95%B;25～30min,95%B),流速0.3mL·min^-1,柱温30℃。在电喷雾离子源(ESI)正离子模式及扫描范围m/z 100～1 500条件下采集生物样品的质谱数据。收集并制备灌胃给药后的血浆、组织(心、肝、脾、肺、肾、胃和小肠)、尿液及粪便样品,对其中柠檬苦素原型成分及代谢产物进行鉴定。结果：雌、雄大鼠的粪便、胃、小肠及雌鼠的心、肝、脾、肺和肾...     

基于UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS鉴定参芪降糖胶囊在大鼠体内的代谢产物

目的 研究参芪降糖胶囊在大鼠血浆、胆汁、尿液和粪便中的代谢产物及其代谢途径。方法 采用UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS技术,以0.1%甲酸溶液（A）-乙腈（B）为流动相进行梯度洗脱,并采用ESI离子源,分别在正、负离子模式进行全扫描和二级质谱扫描,获得化合物的一级和二级质谱数据,结合文献报道、对照品裂解规律及药物代谢反应规律,对大鼠ig参芪降糖胶囊混悬液后的生物样品进行分析鉴定。结果 在大鼠体内共鉴定出125个化合物,包括47个原型成分（PA1～PF）和78个代谢产物（MA1～ME14）,其中2个为新代谢产物,分别为MC15（五味子甲素双脱甲基后葡萄糖醛酸化产物）和MD3（去氢茯苓酸的硫酸酯化产物）,4个为新化合物,分别为MC14：（6R,7R）-2,3,10,11-tetramethoxy-6,7-dimethyl-5,6,7,8-tetrahydrodibenzo[a,c][8]annulene-1,7-diol、MC16：（6R,7R）-2,3,10-trimethoxy-6,7-dimethyl-5,6,7,8-tetrahydrodibenzo[a,c][8]annulene-1,7,11-triol、MD1：（R）-2-（（3R,3aR,6S,7S,9bR）-6-（2-carboxyethyl）-3a,6,9b-trimethyl-7-（prop-1-en-2-yl）-3a,4,6,7,8,9b-hexahydro-3H-cyclopenta[a]naphthalen-3-yl）-6-methylhept-5-enoic acid和MD4：（3S,5R,10S,13R,14R,16R,17R）-4,4,10,13,14,17-hexamethyl-2,3,4,5,6,10,12,13,14,15,16,17-dodecahydro-1H-cyclopenta[a]phenanthrene-3,16-diol。结论 参芪降糖胶囊在大鼠体内的代谢途径主要涉及脱羟基、脱甲基、脱水、水解、还原氢化、甲基化、葡萄糖醛酸化、硫酸酯化和多种反应类型的复合反应等。初步阐明了参芪降糖胶囊的体内代谢特征,同时为探索其生物活性成分及作用机制提供参考。     

马兜铃水提物在大鼠体内代谢产物的定性分析

目的：基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱法(UPLC-Q-TOF-MS^E),定性分析马兜铃水提物(AFE)和马兜铃酸Ⅰ(AAⅠ)大鼠体内马兜铃酸类物质(AAs)代谢产物的差异。方法：该实验选取SD大鼠,分别连续灌胃给予AFE(110 g·kg^-1·d^-1)和AAⅠ(5 mg·kg^-1·d^-1)5 d,收集血清、尿液和粪便。采用ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相甲醇(含0.01%甲酸+5 mmol·L^-1乙酸铵,A)-水(含0.01%甲酸+5 mmol·L^-1乙酸铵,B)梯度洗脱(0～1.0 min,10%B;1.0～7.0min,10%～75%B;7.0～7.2min,75%～95%B;7.2～10.2min,95%B;10.2～10.3min,95%～10%B;10.3～12.0min,10%B),流速0.3 mL·min^-1     

5,7-二甲氧基香豆素和6,7-二甲氧基香豆素在大鼠体内的代谢产物鉴定与代谢途径分析

目的 采用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱（UHPLC-Q-Orbitrap HRMS）技术对5,7-二甲氧基香豆素和6,7-二甲氧基香豆素在大鼠血浆,组织（心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠）,尿液和粪便中的代谢产物进行鉴定分析,并推测其在大鼠体内的代谢途径。方法 雄性SD大鼠ig给予5,7-二甲氧基香豆素和6,7-二甲氧基香豆素（100 mg/kg）,收集血浆、组织、尿液以及粪便样品。样品处理后,采用Thermo Scientific Accucore^TM C₁₈色谱柱（100 mm×3 mm,2.6 μm）,以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液为流动相梯度洗脱,在电喷雾电离源正离子模式下采集生物样品的质谱数据。采用Xcalibur采集数据,利用Compound Discoverer 3.1软件的化合物代谢产物预测模板进行分析,结合相关文献以及Mass Frontier 7.0软件对代谢产物进行鉴定。结果 在大鼠的生物样本中检测到33个5,7-二甲氧基香豆素代谢产物,21个6,7-二甲氧基香豆素代谢产物。在血浆、尿液、粪便、心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠中分别鉴定出8、28、23、2、10、3、10、13、7、7个5,7-二甲氧基香豆素代谢产物和7、19、14、7、7、4、7、13、3、8个6,7-二甲氧基香豆素代谢产物。结论 通过液质联用技术推测出了33个5,7-二甲氧基香豆素代谢产物和21个6,7-二甲氧基香豆素代谢产物,阐明了2种香豆素在大鼠体内通过去甲基化、羟基化、水解、还原、甲基化、磺酸化、葡萄糖醛酸化等途径进行代谢,对2种香豆素的代谢特点进行了比较分析,为进一步研究中药中2种香豆素的作用机制和作用途径奠定了基础,同时也为药物代谢研究提供一种综合研究方法。     

秦岭岩白菜入血成分及其代谢产物的UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS分析

目的：研究秦岭岩白菜提取物在大鼠体内的入血原型成分及代谢产物。方法：采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱法(UHPLC-Q Exactive Focus MS/MS)技术,通过比对秦岭岩白菜提取液、空白血清和含药血清的图谱差异,根据保留时间、相对分子质量,以及一级、二级离子碎片,解析秦岭岩白菜提取物经大鼠灌胃给药后血清中的原型成分和代谢产物,检测条件为流动相选择甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)梯度洗脱(0～40 min,5%～95%A;40～45 min,95%A),流速设定0.3 mL·min^-1,进样量1μL,加热电喷雾离子源,检测范围m/z 80～1 200,正、负离子扫描模式。结果：大鼠口服给药后,共在血清中检测到35个移行成分,其中6个为原型成分,29个为代谢产物。经鉴定6个原型成分分别为熊果苷、mallonanoside A、岩白菜素、ardimerin、水杨酸、鞣花酸,29个代谢产物主要是来自含有没食子酸、mallonanoside A、岩白菜素、儿茶素、鞣花酸等结构单元的化合物代谢物,其代谢途径主要为葡萄糖醛酸化、硫酸酯化、甲基化...     

八珍益智方中非挥发性成分在大鼠体内的代谢产物

目的 分析八珍益智方中非挥发性成分在大鼠体内的代谢产物.方法 大鼠灌胃给予八珍益智方水煎液(13.95 g/kg)后,采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电轨道阱串联质谱联用(UHPLC-LTQ-Orbitrap-MS)法分析其血浆、胆汁、尿液、粪便中的非挥发性成分.结果 共鉴定出6个原型及40个代谢产物,主要发生Ⅰ相代...     

黄连水提液中木兰花碱和木兰花碱单体代谢动力学差异

目的：探讨黄连水提液中木兰花碱和木兰花碱单体代谢动力学差异。方法：采用大鼠体外肠渗透液-肝微粒体温孵联动模型,考察木兰花碱体外肝微粒体代谢动力学特性,并采用高效液相色谱-线性离子阱/静电场轨道阱高分辨质谱法(HPLC-LTQ/Orbitrap MS)对木兰花碱代谢产物进行定性鉴别,分析木兰花碱代谢途径,考察木兰花碱与黄连中其他成分代谢性相互作用。结果：黄连水提液中木兰花碱的米氏常数[K_m,(0.53±0.16)μmol·L^–1]低于木兰花碱单体[(0.85±0.12)μmol·L^–1,P<0.05],表明黄连水提液中木兰花碱对大鼠肝微粒体的亲和性大于木兰花碱单体;黄连水提液组最大反应速度(V_max)、肝固有清除率(CL_int)及肝清除率(CL)均低于木兰花碱单体组(P<0.05),黄连水提液组半衰期(T_1/2,44.22 min)较木兰花碱组(37.35 min)延长(P<0.01),表明黄连水提液中木兰花碱在大鼠肝微粒中代谢和消除速率变...     

UPLC-Q-TOF/MS鉴定大鼠灌服枳壳提取物后的入血成分及其代谢产物

目的:对枳壳进行血清药物化学研究,探讨枳壳提取物在大鼠体内的药效物质基础。方法:利用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术,通过比较在相同检测条件下枳壳提取物、空白血浆以及给药血浆的图谱差异,根据相对保留时间、精确相对分子质量、二级质谱裂解碎片及代谢产物的中性丢失等鉴定和推测大鼠灌胃给予枳壳提取物后的血中移行成分及其代谢产物。结果:枳壳提取物口服给药后,从血浆中鉴定和表征了74个入血成分,其中49个为原型成分(包括二氢黄酮类、多甲氧基黄酮、柠檬苦素类、香豆素类及生物碱类),25个为代谢产物(包括黄酮苷类和多甲氧基黄酮类化合物的葡萄糖醛酸结合物、硫酸结合物、羟基化产物,以及葡糖醛酸化与硫酸化产物)。结论:入血成分及其代谢产物可能为枳壳体内直接作用的药效成分,其中生物碱、多甲氧基黄酮和香豆素类化合物主要以原型入血并发挥作用,而指标成分柚皮苷和新橙皮苷等主要通过水解成苷元而发挥功效。     

基于UHPLC-Q-TOF-MS/MS技术鉴定薄荷在大鼠体内的入血成分及代谢产物

目的研究薄荷Mentha haplocalyx在大鼠体内的入血成分及代谢产物。方法采用超高效液相色谱-飞行时间质谱(UHPLC-Q-TOF-MS/MS)联用技术鉴定薄荷入血成分及代谢产物。采用Eclipse Plus C18色谱柱(100 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B),梯度洗脱,体积流量0.3 m L/min,进样量5μL。结果建立了大鼠给药后血浆样品的分析测定方法,并且与空白生物样品、薄荷提取物和对照品的保留时间及质谱离子碎片信息对比,共鉴定了28个入血原型成分、39个代谢产物,其中1个为未曾报道过的木犀草素的新代谢产物。结论薄荷在大鼠体内的代谢途径包括氧化、还原、甲基化、硫酸酯化、葡萄糖醛酸化等,其中以II相反应为主。所建立的方法简单可靠,为揭示薄荷的药效物质基础提供理论依据。     

荜茇中3种酰胺类生物碱在不同种属肝微粒体中代谢差异比较

胡椒碱、荜茇明宁碱和墙草碱是荜茇中主要的酰胺类成分,具有多种药理活性,为了阐明这3种成分在5个不同种属肝微粒体中代谢差异,应用超高效液相色谱串联双压线性离子阱静电场轨道阱质谱(UHPLC-LTQ-Orbitrap MS)采集这3种化合物的全扫描图谱及二级三级质谱图,获取碎片离子信息,结合其质谱裂解规律和代谢产物精确质谱数据,比较3种生物碱分别在人、恒河猴、比格犬、大鼠以及小鼠肝微粒体中的代谢差异,并快速鉴定出3个胡椒碱代谢产物、2个荜茇明宁碱代谢产物及1个墙草碱代谢产物。结果显示荜茇中酰胺类生物碱的主要代谢类型为苯环亚甲二氧基开环脱甲基和氧化反应,且在种属间存在代谢率差异,该研究为进一步阐明荜茇中胡椒碱类成分体内代谢途径提供了实验依据。     

大鼠灌胃“五虎汤”后尿中挥发性成分的分析

目的:研究中药复方“五虎汤”大鼠灌胃后尿中的挥发性成分。方法:采用气质联用的方法对大鼠给药前后的尿液进行分析。结果:在给药大鼠的尿液中检测到18个与空白尿液相区别的成分,鉴定了14个,其中的7个成分在复方中也同时检测到。结论:检测到的区别成分可能来源于中药五虎汤,其中的一些成分与中药五虎汤的药效相关。     

关黄柏醇提部位化学拆分组分分析及其对热证大鼠的影响

目的:探讨关黄柏醇提部位化学成分拆分的合理性及各拆分组分对热证大鼠的作用。方法:选用95%乙醇提取,结合乙酸乙酯萃取、大孔吸附树脂和阳离子交换树脂等处理对关黄柏醇提部位化学组分进行拆分,拆分组分采用UPLC-QTOF/MS分析并进行主成分分析;采用左甲状腺素钠片诱导大鼠热证模型,观察各拆分组分对热证大鼠中枢神经递质及能量代谢相关物质含量的影响。结果:关黄柏经过95%乙醇提取、乙酸乙酯萃取、大孔树脂和阳离子交换树脂处理得到生物碱组分、非生物碱组分和乙酸乙酯组分,产率分别为0.65%,4.70%,2.50%;主成分分析各拆分组分分布集中在非常明显的不同区域上,各组分在成分组成上存在非常明显的差别,各拆分组分间主要药效成分基本无交叉;关黄柏醇提部位各拆分组分可在不同程度上降低热证大鼠血清及肝脏中与中枢神经递质及能量代谢相关的递质、激素、酶类的含量,改善热证大鼠中枢神经递质释放和能量代谢。结论:关黄柏醇提部位发挥"寒"药性的药效物质基础主要为生物碱组分和乙酸乙酯组分。     

双水相体系分离富集黄柏中盐酸小檗碱

目的利用双水相体系分离富集黄柏药材中的盐酸小檗碱。方法采用非离子表面活性剂PEG400/(NH4)2SO4双水相体系萃取黄柏药材中的盐酸小檗碱,考察了PEG400浓度、(NH4)2SO4盐浓度、萃取温度、水浴时间、pH值和料液比等因素对盐酸小檗碱萃取率的影响。结果盐酸小檗碱在PEG400浓度为15%、(NH4)2SO4浓度为3.4mo.lL-1、pH值为9.0和水浴温度为70℃、水浴时间为30min、料液比为1.0时,萃取率为99.52%,提高了盐酸小檗碱的浓度。结论本文方法所形成双水相体系操作简便、萃取率高,方法重复性好,可适用于分离盐酸小檗碱。     

HPLC法测定两种黄柏及其炮制品中黄柏内酯和黄柏酮

目的 建立同时测定黄柏及其炮制品中黄柏内酯和黄柏酮的高效液相色谱方法.方法 以Agilent C18为分析色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-水-磷酸(45:55:0.2)为流动相,检测波长为205 nm,柱温为35℃,体积流量:1.0mL/min作为色谱条件.结果 黄柏内酯和黄柏酮分离良好,线性范围依次为0.720～14.40μg、0.0524～1.048μg;平均加样回收率(n=6)依次为100.2%和99,9%;RSD分别为1.7%、1.9%;关黄柏和川黄柏经炮制后,黄柏内酯及黄柏酮的量均有所下降.结论 该方法 准确,操作较为简便易行,精密度及重复性良好,可用于黄柏及其炮制品中黄柏内酯和黄柏酮的质量控制.     

关黄柏炒炭前后饮片化学成分的变化规律分析

目的:探究关黄柏炒炭前后饮片化学成分的变化规律,为关黄柏和关黄柏炭饮片的质量标准制定提供依据。方法:采用HPLC测定,流动相乙腈-0.4 mol·L~(-1)氯化铵水溶液梯度洗脱,柱温35℃,流速1.0 m L·min~(-1),检测波长215 nm。分析关黄柏炒炭前后饮片化学成分组成及含量的变化,对其中7种主要化学成分进行定量分析。结果:10批关黄柏饮片中,木兰花碱、盐酸黄柏碱、盐酸药根碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、黄柏内酯、黄柏酮的质量分数分别为2.468~6.783,1.947~4.197,0.209~0.506,3.049~4.557,5.869~13.168,5.141~7.337,1.798~4.975 mg·g~(-1)。关黄柏炒炭后,除个别企业样品外,各化学成分含量均有减少,其中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀等生物碱类成分几乎殆尽;黄柏酮、黄柏内酯等小极性成分保存较多,9批关黄柏炭饮片中,黄柏内酯、黄柏酮的质量分数分别为3.164~6.483,0.281~1.614 mg·g~(-1)。结论:关黄柏饮片炒炭后,外观性状和内在成分变化明显,关黄柏饮片的质量标准难以应用于关黄柏炭。所购关黄柏炭饮片也因此难以做到炒炭程度统一,应根据关黄柏炒炭后的成分变化规律控制炒炭程度,进一步规范关黄柏和关黄柏炭饮片的质量标准。     

RP-HPLC法同时测定关黄柏中小檗碱、药根碱、巴马汀及黄柏酮含量的方法学研究

目的:建立HPLC法在相同色谱条件下同时测定关黄柏中小檗碱、巴马汀、药根碱和黄柏酮的含量。方法:采用RP-HPLC法梯度洗脱。Phenomenex Gemini C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);检测波长345 nm(检测小檗碱、药根碱、巴马汀)、210 nm(检测黄柏酮);流速l mL.min-1;柱温25℃。结果:在一定范围内,盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱和黄柏酮峰面积积分值Y与进样量X线性关系良好,加样回收率分别为98.94%,101.17%,96.22%,98.90%,具有较好的精密度、重复性和稳定性。同时对关黄柏药材市场品进行了含量测定。结论:该方法用于测定黄柏药材中小檗碱、巴马汀、药根碱和黄柏酮的含量操作简便、准确、重复性好。     

HPLC-MS/MS法鉴定黄连碱在糖尿病大鼠尿液、粪便、胆汁中的代谢产物＊

目的 黄连碱是黄连中一种主要的异喹啉类生物碱,具有较好的抗糖尿病药理活性。探讨黄连碱在正常和糖尿病大鼠体内的代谢产物及其代谢途径是否存在差异。方法 本实验采用SD大鼠禁食12 h后腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备糖尿病大鼠模型。造模成功后分别单次灌胃正常和糖尿病大鼠黄连碱（剂量20 mg/kg）,收集给药后0~48 h的尿液和粪便以及0~36 h的胆汁样品,采用高分辨HPLC-MS/MS技术对生物样品中的药物原型及代谢物进行鉴定。选用Agilent TC-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm,5 μm）,以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温25℃。质谱使用电喷雾离子源（ESI）,正、负离子检测模式,扫描范围m/z 50~700。对各色谱峰质谱图进行分析,根据准分子离子峰判断相对分子质量,进一步根据各色谱峰的主要碎片离子、保留时间等信息以及相关文献数据,推测化合物的结构。结果 黄连碱在正常和糖尿病大鼠体内可发生较广泛的Ⅰ相和Ⅱ相代谢,在大鼠尿液、粪便、胆汁共鉴定出14个代谢产物,其中尿液10中个、粪便中11个、胆汁中8个;Ⅰ相代谢物5个,主要为羟基化物和去甲基化物,Ⅱ相代谢物9个,主要为葡萄糖醛酸化物,但由COP脱氢后生成的M1再次硫酸酯化的产物M4在糖尿病大鼠胆汁中未检出。结论 本课题组推测M1在糖尿病和正常大鼠胆汁中代谢过程的差异是黄连碱产生降糖作用的关键,但其他代谢产物量上的差异有待进一步研究确定。本研究为黄连碱的药效学和药理学研究提供一定的物质基础。     

基于HPLC/DAD/MS的降压复方决明提取物入血成分研究

目的:研究复方决明提取物(由决明子、野菊花、夏枯草组成)的入血成分,为其药效物质基础研究提供参考。方法:选取雄性SD大鼠为实验对象,以40 g(生药)/kg剂量灌胃给予复方决明提取物及单味药材。给药血浆首先采用直接蛋白沉淀法考察复方决明提取物入血成分及存在形式;后对其进行盐酸水解,并在280 nm和360 nm下分析吸收入血的主要苷元,进行来源归属和定性研究。结果:直接沉淀法制备的给药血浆与空白血浆比,新增成分主要为葡萄糖醛酸结合产物。酸解后,在280 nm波长下有11个入血成分,此类成分多来源于决明子,其中3号峰为橙黄决明素,7为黄决明素,10为大黄素,11号为大黄酚。360 nm下新增4个峰,主要来源于野菊花,其中12号峰为木犀草素,13为芹菜素,15为合金欢素。结论:本研究主要对复方决明提取物的入血成分进行了初探,并对其来源进行归属。此研究的开展有利于阐明复方决明提取物的药效物质基础,为其临床用药及后续进一步开发提供参考。     

LC-MS/MS分析大鼠口服清清颗粒后血浆中9种成分的药代动力学

目的:建立同时测定大鼠血中9个成分(白芍苷、芍药苷、甘草苷、黄芩苷、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、甘草酸、黄芩素、汉黄芩素)含量的方法,并将该方法用于清清颗粒的药代动力学研究。方法:采用Promosil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.3 m L·min~(-1),柱温35℃;采用正离子模式;分为两段时间检测,前7min只检测白芍苷、芍药苷和甘草苷,8~17 min检测其余化合物。结果:各成分的线性关系良好(r0.998);日间和日内精密度RSD均15%;准确度的相对回收率90.58%~108.67%。9种成分的达峰时间(tmax)依次为(0.25±0),(0.25±0),(0.25±0),(0.25±0),(1.00±0.10),(6.33±0.82),(1.00±0.11),(0.25±0),(3.12±1.15)h,半衰期(t1/2)依次为(0.21±0.02),(6.72±2.10),(2.70±0.36),(6.90±1.55),(5.16±0.95),(4.34±1.02),(4.74±2.52),(4.79±1.48),(5.78±2.41)h,药峰浓度(Cmax)依次为(3.08±0.94),(10.01±2.17),(18.73±2.84),(36.18±7.57),(50.76±10.61),(793.70±214.08),(54.73±18.01),(207.35±27.58),(50.79±5.95)μg·L~(-1)。结论:该方法简便、准确、重复性好,专属性强,可用于清清颗粒的药代动力学研究。