| 婆娑双树基因4干扰载体对儿童睾丸卵黄囊瘤的转染及干扰效果评价 |
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| 引用本文： | 吕敏,张浩川,同毓龙,林孝坤,陈聪德,陈肖鸣.婆娑双树基因4干扰载体对儿童睾丸卵黄囊瘤的转染及干扰效果评价[J].中华小儿外科杂志,2016(9):673-676. |
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| 作者姓名： | 吕敏 张浩川 同毓龙 林孝坤 陈聪德 陈肖鸣 |
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| 作者单位： | 325000,温州医科大学附属第一医院小儿外科 |
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| 摘 要： | 目的 构建婆娑双树基因SALL4的特异性干扰载体并转染儿童睾丸卵黄囊瘤细胞,评价干扰效果,为研究SALL4基因功能提供实验工具.方法 针对不同干扰位点,设计4条特异性siRNA和1条阴性对照序列.构建SALL4干扰质粒载体pGPU6/GFP/Neo-SALL4 shRNA,分空白对照组(Blank组)、阴性对照组(NC组)、单加转染试剂组(MOCK组)、干扰组(SALL4-homo-483、SALL4-homo-1874、SALL4-homo-951、SALL4-homo-3110),分别转染体外培养的儿童睾丸卵黄囊瘤细胞,采用荧光定量PCR和Western bolt技术比较各组细胞SALL4基因mRNA及蛋白表达情况,筛选出最佳干扰序列.结果 荧光定量PCR结果显示,Blank组、NC组、MOCK组、干扰组(SALL4-homo-483、SALL4-homo-951、SALL4-homo-1874、SALL4-homo-3110) SALL4基因mRNA的表达水平分别为100％、(118.0±18.0)％、(128.0±15.0)％、(91.0±21.0)％、(25.0±8.0)％、(59.0±11.0)％、(49.0±13.0)％.SALL4-homo-951、SALL4-homo-3110相比Blank组、NC组、MOCK组mRNA表达下降,差异有统计学意义(F=3.63,P＜0.05).Western bolt的检测结果显示Blank组、NC组、MOCK组、干扰组(SALL4-homo-483、SALL4-homo-951、SALL4-homo-1874、SALL4-homo-3110)SALL4基因蛋白表达水平分别为1、1.1±0.1、1.3±0.3、1.7±0.4、0.2±0.1、0.9±0.2和0.4±0.1.相对Blank组、NC组、MOCK组,SALL4干扰组中SALL4-homo-951、SALL4-homo-3110均能降低蛋白表达,其中SALL4-homo-951降低最多,差异有统计学意义(F=7.96,P＜0.05).结论 SALL4-homo-951、SALL4-homo-3110均能有效干扰SALL4基因在儿童卵黄囊瘤中的表达,其中SALL4-homo-951干扰效果最佳,可用于下一步实验研究.
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| 关 键 词： | 睾丸卵黄囊瘤 基因表达 转染 |
Efficacy of RNA interference after a transfection of SALL4 shRNA vector in pediatric testicular yolk sac tumor |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Yolk sac tumor of testis Gene expression Transfection |
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