| 人工锌指蛋白真核表达载体的构建及表达 |
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| 引用本文： | 魏勇,应大君,朱楚洪,侯春丽,崔晓萍.人工锌指蛋白真核表达载体的构建及表达[J].第三军医大学学报,2008,30(2):134-137. |
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| 作者姓名： | 魏勇 应大君 朱楚洪 侯春丽 崔晓萍 |
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| 作者单位： | 第三军医大学基础医学部解剖学教研室,重庆市生物力学与组织工程重点实验室,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的 构建人工锌指蛋白ZFP基因的真核表达载体,检测其在真核细胞的表达情况,从而探讨人工锌指蛋白作为人工转录因子DNA结合域的可能性.方法 全基因合成人工锌指蛋白(putative zinc finger protein,ZFP)的核酸序列并克隆入pEGFP-N1及pIRES2-EGFP真核表达载体中,构建重组质粒pEGFP-N1/ZFP及pIRES2-EGFP/ZFP-Flag,通过酶切、菌落PCR及测序来鉴定重组载体的正确性.脂质体DOTAP体外转染重组质粒于COS-7细胞中,用荧光显微镜、RT-PCR、Western blot方法鉴定ZFP在该细胞中的表达.结果 正确构建了pEGFP-N1/ZFP、pIRES2-EGFP/ZFP-flag重组表达质粒,并且在COS-7细胞中成功进行了人工锌指蛋白ZFP的表达.结论 采用生物信息学手段获得的假定的锌指蛋白基因序列可以在真核细胞内正常表达.
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| 关 键 词： | 人工锌指蛋白 真核表达载体 COS-7细胞 |
| 文章编号： | 1000-5404（2008）02-0134-04 |
| 收稿时间： | 2007-07-10 |
| 修稿时间： | 2007-09-18 |
Construction of eukaryotic expressing vector of artificial zinc finger protein gene and its expression |
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| WEI Yong,YING Da-jun,ZHU Chu-hong,HOU Chun-li,CUI Xiao-ping.Construction of eukaryotic expressing vector of artificial zinc finger protein gene and its expression[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2008,30(2):134-137. |
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| Authors: | WEI Yong YING Da-jun ZHU Chu-hong HOU Chun-li CUI Xiao-ping |
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| Keywords: | EGFP |
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