栀子酸调节胆汁淤积大鼠SHP-LRH-1信号通路的实验研究

目的：研究栀子酸(geniposidic acid，GPA)对α-萘异硫氰酸酯(α-naphthyl isothiocyanate，ANIT)诱导胆汁淤积 大鼠胆汁酸代谢小分子异源二聚体伴侣受体(small heterodimer partner，SHP)与肝受体同源物1(liver receptor homologue 1，LRH-1)信号通路的调节。方法：将50只SD大鼠随机分为5组，分别为空白组、ANIT组、ANIT+GPA 100 mg/kg组 (AG100组)、ANIT+GPA 50 mg/kg组(AG50组)、ANIT+GPA 25 mg/kg组(AG25组)，每组10只，连续给药10 d，空白组和 ANIT组用生理盐水灌胃，ANIT+GPA各组给予GPA，给药的第8天，除空白组外，其余各组用ANIT(65 mg/kg)灌胃1 次造模，继续给药至第10天，测血清总胆固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)和总胆汁酸(total bile acids，TBA)的含量；分离并培养大鼠原代肝细胞(rat primary hepatocytes，RPH)，将RPH分为空白组、40 μmol/L ANIT 组、40 μmol/L ANIT+GPA 4.00，1.00，0.25 mmol/L组(A4G，A1G和A0.25G组)，real-time RT-PCR检测RPH中SHP和胆汁 酸合成关键酶胆固醇7α羟化酶(cytochrome P450 family 7 subfamily A member 1，CYP7a1) mRNA转录水平，蛋白印迹法检 测SHP和CYP7a1蛋白表达；沉默实验中，将RPH分为空白对照组、阴性转染组、siRNA-LRH-1组(ZR组)、siRNA-LRH- 1+GPA 4.00，1.00，0.25 mmol/L组(ZR4G、ZR1G、ZR0.25G组)，检测SHP，CYP7a1和LRH-1蛋白和基因的表达；过表 达实验中，将RPH又分为空白对照组、阴性转染组(空白转染siRNA-阴性组)、LRH-1过表达组(LRH-1过表达质粒，OE 组)、LRH-1过表达质粒+GPA 4.00，1.00，0.25 mmol/L组(OE4G，OE1G，OE0.25G组)，检测SHP，CYP7a1和LRH-1蛋 白和基因的表达。结果：在体实验中，与空白对照组比较，ANIT组的TC和TBA均显著升高(均P<0.01)、TG无差别； 与ANIT组比较，AG100组和AG50组的TC和TBA均显著降低(均P<0.01)。RPH实验中，与空白对照组比较，ANIT组中 SHP的蛋白和基因水平均显著降低(均P<0.01)，CYP7a1的蛋白和基因水平均显著升高(均P<0.01)；与ANIT组比较， A4G和A1G组的SHP基因和蛋白水平均显著升高(均P<0.01)，A0.25G组SHP基因和蛋白水平均升高(P<0.05)，A4G和A1G 组的CYP7a1基因和蛋白水平均显著降低(均P<0.01)。LRH-1沉默实验中，与阴性转染组比较，ZR组中CYP7a1和LRH-1 蛋白和基因均显著抑制(均P<0.01)，SHP无变化；与ZR组比较，ZR4G，ZR1G和ZR0.25G组SHP基因和蛋白水平均显 著升高(均P<0.01)，LRH-1和CYP7a1无显著变化。LRH-1过表达实验中，与阴性转染组比较，OE组的CYP7a1和LRH-1 蛋白和基因均显著抑制(均P<0.01)，SHP无变化；与OE组比较，OE4G和OE1G组SHP基因和蛋白水平均显著升高(均 P<0.01)，OE0.25G组SHP基因显著升高(P<0.05)，LRH-1和CYP7a1无显著变化。结论：RPH中LRH-1的过表达能上调 CYP7a1的活性，GPA可以改善ANIT诱导的胆汁淤积大鼠的生物化学水平和肝脏病理，其机制可能与GPA激活大鼠 RPH中SHP造成LRH-1的消耗来降低CYP7a1的表达有关。

Effect of geniposidic acid on SHP-LRH-1 signaling pathway in cholestasis rats