| 人源特异性抗狂犬病毒二价Fab094-DDD抗体的制备及鉴定 |
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| 引用本文： | 耿以如,熊四平,唐 奇,张 晓,陈 雅,徐亚如,周 荧,仇镇宁,冯振卿,朱 进.人源特异性抗狂犬病毒二价Fab094-DDD抗体的制备及鉴定[J].南京医科大学学报,2016(6):693-699. |
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| 作者姓名： | 耿以如 熊四平 唐 奇 张 晓 陈 雅 徐亚如 周 荧 仇镇宁 冯振卿 朱 进 |
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| 作者单位： | 南京医科大学病理学系;卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学病理学系;卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 211166,卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 211166,卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学病理学系;卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学病理学系;卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学第二附属医院耳鼻喉科,江苏 南京 210011,卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 211166,南京医科大学病理学系;卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 211166,卫生部抗体技术重点实验室,江苏 南京 211166;南京军区军事医学研究所,江苏 南京 210002 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81273325,81202370);江苏省社会发展项目(BE2011842) |
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| 摘 要： | 目的:利用蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)调节亚基(R亚基)的二聚体化功能结构域(DDD)的二聚化功能,制备具有中和活性的人源特异性抗狂犬病毒二价抗体?方法:优化合成linker-C-DDD序列,设计引物扩增抗狂犬病毒抗体Fab094的Fd段和轻链可变区序列(Vκ),通过overlap PCR将Fab094的Fd段和linker-C-DDD基因重组为Fd-DDD,将其和Vκ分别克隆到真核表达载体中,共转染293Free style细胞,表达纯化该抗体?应用SDS-PAGE?Western blot?ELISA?免疫共沉淀?亲和力测定及免疫荧光试验检测该抗体的免疫学特性,用荧光抗体病毒中和试验检测其中和活性?结果:成功构建了全人源抗狂犬病毒二价抗体Fab094-DDD的真核表达载体,获得的二价Fab094-DDD抗体与抗原保持着较好的亲和力,能特异性结合狂犬病毒,中和效价为213.2 U/mg?结论:成功制备了抗狂犬病毒二价Fab094-DDD抗体,具有较高的中和活性,为进一步研发狂犬病治疗性抗体药物奠定了基础,对于其他疾病双表位人源特异性抗体的制备也具有借鉴作用?
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| 关 键 词： | 狂犬病毒 二价抗体 中和活性 双表位抗体 |
| 收稿时间： | 2016/2/16 0:00:00 |
Generation and characterization of a human neutralizing bivalent antibody Fab094-DDD against rabies virus |
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| Geng Yiru,Xiong Siping,ang Qi,Zhang Xiao,Chen Y,Xu Yaru,Zhou Ying,Qiu Zhenning,Feng Zhenqing and Zhu Jin.Generation and characterization of a human neutralizing bivalent antibody Fab094-DDD against rabies virus[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2016(6):693-699. |
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| Authors: | Geng Yiru Xiong Siping ang Qi Zhang Xiao Chen Y Xu Yaru Zhou Ying Qiu Zhenning Feng Zhenqing and Zhu Jin |
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| Institution: | Department of Pathology;Key Laboratory of Antibody Technique of Ministry of Health,NJMU,Nanjing 211166,Department of Pathology;Key Laboratory of Antibody Technique of Ministry of Health,NJMU,Nanjing 211166,Key Laboratory of Antibody Technique of Ministry of Health,NJMU,Nanjing 211166,Key Laboratory of Antibody Technique of Ministry of Health,NJMU,Nanjing 211166,Department of Pathology;Key Laboratory of Antibody Technique of Ministry of Health,NJMU,Nanjing 211166,Department of Pathology;Key Laboratory of Antibody Technique of Ministry of Health,NJMU,Nanjing 211166,Department of Otolaryngology,the Second Affiliated Hospital of NJMU,Nanjing 210011,Key Laboratory of Antibody Technique of Ministry of Health,NJMU,Nanjing 211166,Department of Pathology;Key Laboratory of Antibody Technique of Ministry of Health,NJMU,Nanjing 211166 and Key Laboratory of Antibody Technique of Ministry of Health,NJMU,Nanjing 211166;Huadong Medical Institute of Biotechniques,Nanjing 210002,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | rabies virus bivalent antibodies neutralizing activity bispecific antibodies |
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