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正交设计优化翼梗五味子ISSR-PCR反应体系
引用本文:吴 生,熊宇婷,谢 砚,顾 蔚.正交设计优化翼梗五味子ISSR-PCR反应体系[J].医学教育探索,2011,42(5):976-979.
作者姓名:吴 生  熊宇婷  谢 砚  顾 蔚
作者单位:1. 陕西师范大学 西北濒危药材资源开发国家工程实验室,陕西 西安 710062 2. 药用资源与天然药物化学教育部重点实验室,陕西 西安 710062 3. 陕西师范大学生命科学学院,陕西 西安 710062
基金项目:国家自然科学基金资助项目(31070293);国家“十一五”科技支撑计划项目(2006BAI06A13-06)
摘    要:目的 对影响翼梗五味子ISSR-PCR扩增反应的各因素进行优化,建立稳定的反应体系。方法 基于正交极差分析方法,以Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTP和引物5因素4水平的正交试验对翼梗五味子ISSR-PCR反应体系进行优化。结果 翼梗五味子ISSR-PCR的最佳反应体系(20 μL)为:Taq酶1.00 U、Mg2+ 1.50 mmol/L、模板DNA 40.00 ng、dNTP 0.25 mmol/L、引物0.50 μmol/L。筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并确定了每个引物的最佳退火温度。结论 所建立的翼梗五味子ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、重复性好等优点,为翼梗五味子的分子水平研究提供实验依据。

关 键 词:翼梗五味子  ISSR-PCR  正交优化  多态性  退火温度

Optimization for ISSR-PCR reaction system on Schisandra henryi by orthogonal design
WU Sheng,XIONG Yu-ting,XIE Yan,GU Wei.Optimization for ISSR-PCR reaction system on Schisandra henryi by orthogonal design[J].Researches in Medical Education,2011,42(5):976-979.
Authors:WU Sheng  XIONG Yu-ting  XIE Yan  GU Wei
Abstract:
Keywords:Schisandra henryi Clarke  ISSR-PCR  orthogonal optimization  primer  annealing temperature
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