MG-132对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化与凋亡的影响

目的：探讨蛋白酶体抑制剂MG-132对体外培养的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）转分化和凋亡的影响及其机制。方法：体外培养HK-2细胞，随机分组：对照组，TGF-β1刺激组（5ug／L），MG-132组（2．5μmol／L），MG-132＋TGF-融组（MG-132 2.5μmol／L孵育30min后再加TGF-β1 5μg／L）。培养24h后收集细胞，RT-PCR法检测Smurf1、Smurf2和Smad7 mRNA的表达；Western免疫印迹检测Smurf1、Smurf2、Smad7和P-IκB-α和IκB-α蛋白表达；免疫组织化学检测胞浆中Fn和α-SMA的表达；Hoechst 33258染色免疫荧光检测细胞凋亡形态变化，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果：TGF-β1刺激组HK-2 Smurf1、Smurf2 mRNA及蛋白表达水平较对照组高（P〈0．05），但Smad7 mRNA及蛋白表达水平较对照组低（P〈0．05），且胞浆中FN和α-SMA水平较对照组高（P〈0．05）。MG-132＋TGF-β1组与TGF-β1刺激组比较，Smurf1、Smurf2 mRNA表达降低（P〈0．05），Smad7 mRNA略升高（P〉0．05），而Srnad7蛋白明显升高（P〈0．05），胞浆中Fn和α-SMA表达减少。MG-132组、MG-132＋TGF-β1组分别与对照组及TGF-β1组比较，P-IκB-α和IκB-α蛋白浓度升高，细胞凋亡率增加，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：MG-132可抑制TGF-132诱导的HK-2 Smurf1、Smurf2的表达，促进Smad7表达，抑制其降解，减轻FN和α-SMA的表达，从而抑制HK-2转分化；另-方面，MG132可能通过抑制TGF-β1诱导的HK-2细胞NF-κB活化促进HK-2细胞凋亡。