四神丸含药血清抑制人结肠癌细胞有氧糖酵解的效应及机制

目的 探究四神丸含药血清对人结肠癌细胞HCT116有氧糖酵解的影响和作用机制。方法 采用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测四神丸含药血清（2.5%、5%、10%）处理结肠癌HCT116细胞24、48、72 h的细胞活力；微量法检测细胞培养液中乳酸浓度和细胞内葡萄糖含量，以及己糖激酶（HK）和果糖-6-磷酸激酶（PFK）活性；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测葡萄糖转运酶1（GluT1）mRNA含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测GluT1、甲基转移酶样3（MettL3）蛋白表达；免疫荧光染色法检测细胞GluT1表达；比色法检测N6-甲基腺苷（m⁶A）RNA甲基化水平。结果 与空白组比较，2.5%、5%、10%四神丸含药血清24 h对HCT116细胞活力均无明显影响，10%四神丸含药血清在48 h可明显抑制HCT116细胞活力（P<0.05），故后续实验选用10%四神丸含药血清，给药时间为48 h。与空白组比较，10%四神丸含药血清能够降低乳酸生成（P<0.05），并下调细胞对葡萄糖摄取（P<0.05），并降低糖酵解关键限速酶HK和PFK的活性（P<0.05），同时四神丸含药血清还可降低GluT1蛋白（P<0.01）及其mRNA表达（P<0.05），并减少表达GluT1的细胞比例（P<0.01）。与空白组比较，四神丸含药血清还能降低MettL3蛋白含量（P<0.05）及m⁶A RNA 甲基化水平（P<0.01）。结论 四神丸能够抑制结肠癌细胞糖酵解，其作用机制可能与降低MettL3过表达，抑制m⁶A RNA甲基化，下调GluT1及细胞内HK、PFK等有氧糖酵解相关酶的活性有关。

Inhibitory Effect and Mechanism of Sishenwan-containing Serum on Aerobic Glycolysis in Human Colon Cancer Cells