松弛素对TGF—β诱导的内皮细胞间质化的抑制作用

目的：探讨松弛素（RLX）对TGF-α诱导的内皮细胞间质化现象的影响。方法：采用体外分离的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）作为体外细胞模型，通过TGF—β 10ng／mL诱导内皮细胞间质化，100ng／mL和200ng／mLRLX分别预处理，再与TGF—β联合培养48h。光镜下观察细胞形态学改变，CCK-8实验和transwell实验检测细胞增殖和迁移能力，免疫荧光单双染技术观察vimentin和CD31的表达变化，蛋白免疫印迹技术观察各实验组vimentin、CD31、ve—cadherin和α-SMA的蛋白表达。结果：阴性对照组内皮细胞呈铺路石样生长，TGF—β诱导组细胞形态向梭形转化，呈扩散迁移趋势。与阴性对照组相比，TGF—β诱导组细胞增殖、迁移能力明显增强；而RLX可抑制TGF—β诱导的增殖和迁移。免疫荧光单染结果显示，与阴性对照组相比，TGF—β诱导组内皮细胞特异性蛋白CD31表达下调而间质细胞标志性蛋白vimentin明显上升；与SGF—β组相比，RLX联合TGF—β处理组CD31表达上调而vimentin表达下调。免疫荧光双荣结果显示，阴性对照组以内皮性质的细胞为主，仅存在少量的CD31和vimentin双阳性细胞；TGF—β诱导组双阳性细胞明显增多；与TGF—β组相比，RLX联合TGF—β处理组间质效应的双阳性细胞下调，而内皮效应的双阳性细胞增多。蛋白免疫印迹结果显示，与阴性对照组相比，TGF—β诱导组内皮细胞特异性蛋白CD31（0．36±0．076vs0．88±0．086）和ve—cadherin（0．54±0．046vs1．09士0．13）表达下调而间质细胞标志性蛋白vimentin（0．72±0．102vs0．21±0．081）和α-SMA（0．88±0．084vs0．24±0．046）明显上升（P〈0．05）；与TGF—β组相比，RLX联合TGF—β处理组CD31（0．67±0．09、0．59±0．12vs0．36±0．076）和ve-cadherin（0．85±0．09、0．72±0．064 vs 0．54±0．046）表达上调，而vimentin（0．56±0．0u、0．48±0．06 vs 0．72±0．102）和α—SMA（0．65±0．081、0．54士0．032 vs 0．88±0．084）表达下降（P〈0．05），且呈剂量依赖性。结论：RLX可抑制TGF—β诱导的内皮细胞向间质化细胞转化。