LAMP结合核酸试纸条技术快速检测粪便中艰难梭菌的方法研究

目的 研究利用环介导等温扩增（loop–mediated isothermal amplification，LAMP）结合核酸试纸条技术建立艰难梭菌（Clostridium difficile，CD）的快速检测方法，为艰难梭菌检测提供一种快速检测的方法。方法 收集2016年1月至2017年12月杭州市临安区第一人民医院临床感染性腹泻患者的粪便标本201份。根据艰难梭菌毒素A基因特异序列设计引物，选择6条最佳引物，用LAMP环介导等温扩增曲线、钙黄绿素目视法和核酸试纸条测试实验结果，再优选反应体系，最后检测粪便中的艰难梭菌。结果 LAMP法能在60℃条件下扩增1h检出艰难梭菌，对1株艰难梭菌和7株非艰难梭菌检测，只有艰难梭菌能检出阳性扩增，设计的引物具有良好的特异性。脱氧核糖核酸（deoxyribo nucleic acid，DNA）检出限为0.8pg/μl。结论 LAMP结合核酸试纸条技术快速检测粪便艰难梭菌具有敏感度高、操作简便、特异性强、可视化、方便快捷的特点，适用于艰难梭菌的快速检测。

Study on the Rapid Detection Method of Clostridium Difficile in Stool Combined with Loop-mediated Isothermal Amplification and Nucleic Acid Test Strip Technology