甲基汞对雄性小鼠生殖细胞的毒性作用

目的：研究甲基汞（MeHg）对雄性小鼠生殖细胞氧化损伤、细胞周期、细胞凋亡及其凋亡相关蛋白表达的影响。方法：应用MTT法检测MeHg对雄性小鼠生殖细胞的毒性；采用TBA比色法、OPA荧光法和KI比色法分别检测睾丸生殖细胞中脂质过氧化产物MDA、H₂O₂的含量和GSH-Px酶活性；采用AO/EB染色法和流式细胞术2种方法检测细胞凋亡；采用流式细胞术检测MeHg对细胞周期的影响；应用免疫组织化学方法检测与线粒体途径细胞凋亡相关Caspase-9和CytC蛋白表达。结果：体外给予0.1、1.0、10.0和100.0 μmol•L^-1 的MeHg，随着甲基汞染毒剂量的增加，细胞存活率逐渐降低，作用2、4、8、24和48 h时，1.0、10.0和100.0 μmol•L^-1各剂量组与对照组比较差异有显著性（P<0.05）。体内给予1/100、1/50和1/10 LD₅₀的MeHg，随着甲基汞染毒剂量的增加，睾丸组织中MDA和H₂O₂含量有所增加，各剂量染毒组MDA含量与对照组比较差异具有显著性（P<0.05）。H₂O₂含量随着甲基汞染毒剂量的增加，1/50 LD₅₀、1/10 LD₅₀组与对照组比较差异有显著性（P<0.01）。GSH-Px酶活性随着甲基汞染毒剂量的增加有所降低，各剂量染毒组与对照组比较差异均具有显著性（P<0.05）。随着染毒剂量的增大，凋亡率先增加，1/50 LD₅₀达到最大，1/10 LD₅₀组逐渐降低，1/10 LD₅₀组与对照组比较差异具有显著性（P<0.05）。采用流式细胞术检测，G₂/M期细胞百分数增加，1/50 LD₅₀染毒组时与对照组比较差异具有显著性（P<0.05）。Caspase-9与CytC阳性表达为棕黄色染色。分析结果表明，MeHg各剂量染毒组CytC表达先增加，随着染毒剂量的增加而逐渐降低，CytC表达各剂量染毒组与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)，Caspase-9 的表达在1/50 LD₅₀组达到最高，1/50和1/10 LD₅₀ 组与对照组比较差异具有显著性(P<0.01)。结论：甲基汞可以引起生殖细胞氧化损伤，影响细胞周期进程，使细胞有丝分裂延迟，并可能诱导细胞凋亡和凋亡相关蛋白的改变，对雄性生殖细胞具有细胞毒性作用。

Toxicity of methyl mercury on male mouse germ cells

Objective To study the effects of methyl mercury(MeHg) on oxidative damage,changes of cell cycle,apoptosis,and apoptosis-related protein expression in male mouse germ cells.Methods The cytotoxicity of MeHg on germ cells of male mice was measured by MTT assay.The content of malondiadehyde(MDA) and hydrogen peroxide(H2O2) and the activitiy of glutathione peroxidase(GSH-Px) in testicle germ cells were detected by TBA and KI colorimetric method and OPA fluorescence method.Apoptotic rate was measured by flow cyt...