两种非接触共培养方法诱导山羊BMSCs向成软骨细胞分化的实验研究

【摘要】 目的 本文探讨利用两种非接触共培养方法诱导山羊骨髓基质干细胞（Bone marrow stem cells，BMSCs）向成软骨细胞分化的方法和可行性。方法山羊髂后上棘穿刺取骨髓进行BMSCs的培养、扩增、鉴定，软骨细胞取自山羊的最后一根肋骨游离缘，采用Transwell共培养板法和三维立体共培养方法进行非接触共培养，Transwell 共培养板法共培养分三组，分别为BMSCs不诱导组、BMSCs仅由成软骨诱导培养液诱导组和BMSCs经transwell板共培养诱导组。三维材料中立体非接触共培养法分为24孔板底有软骨细胞的实验组和无软骨细胞的对照组，负载BMSCs的PLGA材料悬浮在24孔板中。在第3周分别通过甲苯胺蓝染色（Toluidine blue staining）、阿利新蓝染色（Alican blue staining）、II型胶原免疫荧光（collagen II immunofluoresence）、II型胶原免疫组化（collagen II immunochemical staining）进行组织学鉴定，在第2周进行collagen II、COL2a Q-PCR进行成软骨的鉴定，同时做collagen I 和osteopontin的QPCR检测成骨基因表达。结果 从山羊髂后上棘分离出的细胞增殖迅速，第四代时鉴定表明所获取的细胞具有干细胞特征。软骨细胞增殖至第三代时形态去分化表现不明显。甲苯胺蓝染色、II型胶原免疫荧光及PCR结果显示两种共培养方法诱导的BMSCs均有成软骨表现，在Transwell板共培养法时共培养诱导BMSCs成软骨效果稍弱于成软骨诱导液，无论是成软骨诱导液组还是共培养组都发现成骨基因osteopontin表达也有上调 。结论 采用两种非接触共培养方法均能促进山羊BMSCs向成软骨细胞分化，但是Q-PCR提示存在成骨风险。

In vitro chondrogenisis of the goat bone marrow mesenchymal stem cells directed by chondrocytes with monolayer and 3-dimetional indirect co-culture system