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1.
目的探讨物理性刺激对骨膜软骨生成方面的影响,以期培养出一种与正常关节软骨更相似的软骨组织。方法从新西兰大白兔胫骨近端内侧取下骨膜,将骨膜固定在支架上,然后将细胞支架悬吊在旋转瓶内,用水流产生的剪切应力去刺激骨膜。通过宏观观察、体积大小测量、组织切片染色与细胞外基质(ECM)成分的比较及生物力学测试分析软骨体外生长的最佳环境。结果宏观观察发现软骨生长的方向与水流的方向相同。组织切片染色可见有两层不同形态的软骨细胞和不同密度的ECM,免疫组织化学染色见在剪切应力的刺激下,软骨表面可分泌浅层蛋白质及润滑剂,且在不同大小的剪切应力刺激时,软骨表面还会产生不同厚度的表层。结论剪切应力刺激能使骨膜上的干细胞分化形成软骨,同时证明力学环境不仅影响细胞的分化与生长,而且影响细胞的形态与ECM的分泌。 相似文献
2.
目的:检测神经纤维瘤蛋白在先天性脊柱侧凸患者成骨细胞和软骨细胞中的表达。方法:6例先天性脊柱侧凸患者,在后路手术时取髂骨及髂骨生长板,分离、培养成骨细胞和软骨细胞,分别行碱性磷酸酶染色和甲苯胺蓝染色。逆转录-多聚酶链反应(RT—PCR)检测神经纤维瘤蛋白mRNA.间接免疫荧光和Westemblot检测神经纤维瘤蛋白在成骨细胞和软骨细胞中的表达。结果:先天性脊柱侧凸患者成骨细胞和软骨细胞中存在Ⅱ型神经纤维瘤蛋白表达,该蛋白主要分布在细胞浆,所表达蛋白为三磷酸鸟苷酶活化蛋白(GAP)活性较弱的Ⅱ型异构体。结论:先天性脊柱侧凸患者成骨细胞和软骨细胞中存在神经纤维瘤蛋白表达,但该蛋白是否通过对成骨细胞和软骨细胞的影响导致骨骼系统异常还有待于进一步研究。 相似文献
3.
三维立体培养法诱导去分化软骨细胞Ⅱ型胶原的重新表达 总被引:2,自引:0,他引:2
目的用藻酸盐三维立体培养法及离心管聚集体诱导培养法促进去分化的永生化软骨细胞第50代(IHACs50)重新表达软骨细胞的Ⅱ型胶原标志性表型。方法利用藻酸盐三维立体培养法以及离心管聚集体诱导培养法分别诱导培养去分化的永生化人关节软骨细胞第50代,然后用Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的免疫组织化学染色、Ⅱ型胶原的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测、激光共聚焦显微镜检测、胶原定量检测该永生化软骨细胞的Ⅱ型胶原表型表达情况。结果免疫组织化学染色、激光共聚焦显微镜检测、RT-PCR检测分别提示藻酸盐三维立体培养法和离心管聚集体诱导培养法使去分化永生化人关节软骨细胞的Ⅱ型胶原染色阳性以及621 bp的Ⅱ型胶原mR- NA表达,Western blot和3H-脯氨酸标记SDS-PAGEⅡ型胶原定量检测发现前者促进Ⅱ型胶原分泌较后者多。结论去分化永生化人关节软骨细胞可以经不同的诱导方法而重新表达Ⅱ型胶原表型,藻酸盐三维立体培养法因与软骨细胞的生理环境相似,故促进Ⅱ型胶原重新表达较多。 相似文献
4.
目的:通过去势大鼠骨质疏松骨折模型,研究骨质疏松骨痂软骨细胞的增殖及IGF-Ⅰ的表达情况.方法:建立去势大鼠骨质疏松及骨折模型,在术后10~40d内取材,行IGF-Ⅰ和PCNA免疫组化染色,观察骨质疏松骨折骨痂内软骨细胞的增殖及IGF-Ⅰ的表达情况.结果:骨质疏松性骨痂组织中IGF-Ⅰ早期上调表达,可以促进骨膜生发层细胞和骨折断端间充质细胞增殖、分化;IGF-Ⅰ在骨折后期一部分成熟软骨细胞中表达,可能延缓了软骨细胞向终末分化,在维持软骨细胞表型过程中发挥一定的作用.结论:IGF-Ⅰ在骨质疏松性骨折愈合过程中可能发挥着重要的调节作用. 相似文献
5.
粘多糖贮积症Ⅳ型酶学诊断与产前诊断 总被引:2,自引:0,他引:2
王和 《中华妇幼临床医学杂志(电子版)》2006,2(1):58-59
粘多糖贮积症Ⅳ型(Morquio病)是常染色体隐性遗传病。它包括粘多糖贮积症Ⅳa型与粘多糖贮积症Ⅳb型两个亚型。Ⅳa型是由半乳精-6-硫酸盐硫酸酯酶缺乏所致,Ⅳb型为β-D半乳糖苷酶缺乏所致。粘多糖贮积症Ⅳ型主要导致硫酸软骨素(CS)和硫酸角质素(KS)降解障碍,在骨和软骨细胞沉积,使骨发育障碍。 相似文献
6.
Objective To determine the best duration for exerting the cyclic pressure under which the tissue-engineered cartilage is constructed. Methods Free chondrocytes isolated from rabbit articular cartilage were seeded into polylactic acid-co-glycolic acid(PLGA) scaffolds after expansion in vitro, and ran-domized into 4 groups. In Groups 1 to 3, chondrocytes were cultured under daily cyclic pressure (0 ~ 200 kPa, 0.1Hz) for 4 hours, 8 hours, 12 hours respectively; Group 4 was a control in which no pressure was exerted. In each group, after 2 weeks of culture, the tissue engineered cartilages were observed in vitro and assessed by his-tological staining of liE. Next, the content of DNA and the secretion of type Ⅱ collagen and GAG in cartilages were detected quantitatively. Results Under the daily cyclic pressure (0 ~200 kPa, 0.1 Hz), the scaf-fold-chondrocytes complex in the group of 8 hours got the largest volume, smooth, lucidus, and elastic surface, the most queuing chondrocytes, and the highest content of type Ⅱ collagen and GAG (P < 0.01). Conclusions Since chondrecytes are baro-senstive, the metabolism of chondrocytes can be affected by the time of cyclic pressure. Under the effect of 0 ~200 kPa, 0.1Hz, the daily cyclic pressure of 8 hours may be optimal for chondrocytes to multiply and synthesize extracellular matrixes such as type Ⅱ collagen and GAG. 相似文献
7.
兔关节软骨细胞的分离、培养和形态学特征 总被引:9,自引:2,他引:7
[目的]探讨兔关节软骨细胞的分离、培养方法,观察单层高浓度培养时细胞表型表达情况.[方法]无菌条件下,从 2周龄新西兰白兔的颞颌关节及四肢关节髁突面削取软骨片,采用机械-酶消化法分离软骨细胞,经台盼蓝拒染计数,将细胞按 1× 106个 /孔接种于 6孔培养板,传代培养,描绘生长曲线.利用相差显微镜及透射电镜观察细胞形态.应用甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫组化对细胞进行鉴定.[结果]每克软骨能获取 1 5× 106个软骨细胞,活性率为 95%.培养 2~ 3 d,细胞贴壁、变形,呈多角形; 8 d左右,细胞融合成层.透射电镜观察显示细胞核圆形,有丰富的粗面内质网、高尔基体及分泌的基质成分.甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原染色阳性.细胞传至 5代后,出现"成纤维细胞样".[结论]本研究建立了简单易行的软骨细胞分离、培养方法;初代、第 2代细胞生长良好,适合于实验研究;软骨细胞 5代培养后,细胞表型发生改变. 相似文献
8.
Objective To determine the best duration for exerting the cyclic pressure under which the tissue-engineered cartilage is constructed. Methods Free chondrocytes isolated from rabbit articular cartilage were seeded into polylactic acid-co-glycolic acid(PLGA) scaffolds after expansion in vitro, and ran-domized into 4 groups. In Groups 1 to 3, chondrocytes were cultured under daily cyclic pressure (0 ~ 200 kPa, 0.1Hz) for 4 hours, 8 hours, 12 hours respectively; Group 4 was a control in which no pressure was exerted. In each group, after 2 weeks of culture, the tissue engineered cartilages were observed in vitro and assessed by his-tological staining of liE. Next, the content of DNA and the secretion of type Ⅱ collagen and GAG in cartilages were detected quantitatively. Results Under the daily cyclic pressure (0 ~200 kPa, 0.1 Hz), the scaf-fold-chondrocytes complex in the group of 8 hours got the largest volume, smooth, lucidus, and elastic surface, the most queuing chondrocytes, and the highest content of type Ⅱ collagen and GAG (P < 0.01). Conclusions Since chondrecytes are baro-senstive, the metabolism of chondrocytes can be affected by the time of cyclic pressure. Under the effect of 0 ~200 kPa, 0.1Hz, the daily cyclic pressure of 8 hours may be optimal for chondrocytes to multiply and synthesize extracellular matrixes such as type Ⅱ collagen and GAG. 相似文献
9.
骺板软骨细胞复合三维支架体外构建组织工程软骨的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
目的探讨将骺板软骨细胞复合三维支架经体外培养,构建组织工程软骨的效果及其生物学特点. 方法将3周龄幼兔第1代骺板软骨细胞与液态的生物凝胶混合,接种于聚磷酸钙纤维/L-聚乳酸(CPPF/PLLA)三维支架材料,构建组织工程软骨组织块,连续培养4周.行大体、倒置显微镜及组织学、Ⅰ型和Ⅱ型胶原免疫组织化学光镜观察,定量检测硫酸糖胺多糖(GAG)含量. 结果构建的组织工程软骨块在培养过程中能保持其初始外形,种子细胞呈稳定的三维均相分布,外观逐渐呈乳白色、半透明,硬度亦不断增加.培养1周有软骨细胞陷窝形成,2周后形成富含Ⅱ型胶原和蛋白聚糖、具有典型软骨组织结构的工程化软骨,且Ⅰ型胶原逐渐转为阴性.4周时构建软骨的组织结构与天然骺板软骨相类似,硫酸GAG含量平均为天然骺板软骨的34%以上. 结论骺板软骨细胞复合三维支架体外培养可生成典型软骨,且可形成类似天然骺板软骨的组织结构,能满足修复骺板缺损的基本要求.体外培养1~2周可能是植入体内修复骺板缺损的较佳时机. 相似文献
10.
关节软骨属于透明软骨,自身没有血供,无淋巴引流,无神经分布,软骨细胞是高度分化的组织细胞,成熟的关节软骨中软骨细胞的分裂能力非常有限,因此软骨损伤后修复能力差。早在1743年Hunter就提出“骨软骨一旦破坏,就不能得到修复”的观点,而关节软骨损伤及其修复问题,长期以来也一直是困扰骨科基础研究与临床治疗的棘手问题。随着社会的现代化进程和人口的老龄化,由于外伤和退变引起的关节软骨损伤患者显著增多,为此如何解决关节软骨修复的问题日益显得重要。 相似文献