| HCT116-p53-/-细胞中p53基因突变子模型的建立 |
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| 引用本文： | 马淑梅,汪海娇,刘扬,张洁琼,施丹,易贺庆,吴丽珉,刘晓冬.HCT116-p53-/-细胞中p53基因突变子模型的建立[J].吉林大学学报(医学版),2008,34(4):713-716. |
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| 作者姓名： | 马淑梅 汪海娇 刘扬 张洁琼 施丹 易贺庆 吴丽珉 刘晓冬 |
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| 作者单位： | (吉林大学公共卫生学院 卫生部放射生物学重点实验室，吉林 长春 130021) |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金
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吉林省科技厅科技发展计划
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教育部留学回国人员科研启动基金 |
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| 摘 要： | 目的：合成p53基因突变子及构建真核表达载体,并在HCT116-p53-/-细胞中建立248W和273H突变子表达模型，为研究p53突变子在肿瘤发生中的作用及通过封闭p53突变子的方法进行肿瘤基因治疗提供实验基础。方法：以野生型p53基因为模板，采用引物重叠PCR定点突变技术，合成p53基因248W和273H突变子，并利用基因重组技术构建出表达载体，用脂质体转染法建立模型，Western blotting检测p53突变子蛋白。结果：经基因测序后证实第248位密码子由精氨酸（CGG）突变为色氨酸（TGG），第273位密码子由精氨酸(CGT)突变为组氨酸（CAT），说明成功合成p53突变子，构建的表达载体转染HCT116细胞后，经Western blotting检测，以特异表达条带与内参GAPDH的比值做为相对值进行半定量比较，特异蛋白表达显著升高，证实模型建立成功。结论：通过引物重叠PCR定点突变技术成功构建p53基因248W和273H突变子，并在HCT116细胞中成功表达。
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| 关 键 词： | p53 转染 定点诱变 Western blotting |
| 收稿时间： | 2007-11-05 |
Establishment of expression model of p53 mutants in HCT116-p53~(-/-) cells |
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| MA Shu-mei,WANG Hai-jiao,LIU Yang,et al.Establishment of expression model of p53 mutants in HCT116-p53~(-/-) cells[J].Journal of Jilin University: Med Ed,2008,34(4):713-716. |
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| Authors: | MA Shu-mei WANG Hai-jiao LIU Yang |
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