小鼠诺如病毒分离鉴定及病毒衣壳蛋白（VP1）基因测序分析

目的 对来自广东地区感染小鼠诺如病毒（Murine Norovirus，MNV）的小鼠进行病毒分离鉴定，对病毒的衣壳蛋白（VP1）基因进行测序和序列分析，绘制系统发生树，了解广东地区MNV的分子遗传特征和进化来源。方法 采用RAW264.7细胞对RT-PCR检测为阳性的小鼠样本进行病毒分离，通过细胞病变、RT-PCR、间接免疫荧光试验、测序方法对病毒分离株进行鉴定。应用RT-PCR技术针对15株MNV分离株的VP1基因的1626个核苷酸片段进行基因扩增，将扩增产物连接在pMD18-T 载体后转化到大肠杆菌中进行克隆。通过氨苄青霉素平皿筛选，将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定及序列分析。将这15 株MNV分离株与从GenBank获得的19株MNV参考株进行序列比较分析，基于VP1基因的1626核苷酸片段构建系统发生进化树，一起进行分子流行病学研究。结果 从80个小鼠样本中分离到了15株MNV病毒，通过细胞病变试验、RT-PCR试验、间接免疫荧光试验和测序分析鉴定确认分离到的病毒为MNV。序列分析结果显示MNV分离株的VP1蛋白基因全长均为1626个核苷酸，广东地区15株MNV分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别在89.7~100%和94.8~100%之间， 15株MNV分离株与其他19株MNV参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别在87.5~92.9%和92.4~98.2%之间。进化树分析表明来自设施A和设施D的13株病毒之间的亲缘关系较近，同属一个进化分支。来自设施B 的ZD-1毒株和设施C的ZYY-163毒株与来自广东（K162）、日本（S7-P2、S7-PP3）、韩国（K4）和德国（Berlin/04/06/DE、 Berlin/05/06/DE）同属另一个进化分支。结论 成功分离到15株MNV病毒。遗传进化分析表明广东地区的MNV分离株来源并不相同，来自设施B和设施C的MNV分离株与国外分离株的亲缘关系较近，而来自设施A和设施D的13株MNV分离株可能是本地固有的毒株。