| 基于cAMP-PKA信号通路的淫羊藿苷促进骨形成研究 |
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| 引用本文： | 石文贵,李雪雁,陈克明,马小妮,谢艳芳.基于cAMP-PKA信号通路的淫羊藿苷促进骨形成研究[J].中国现代应用药学,2015,32(2):131-136. |
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| 作者姓名： | 石文贵 李雪雁 陈克明 马小妮 谢艳芳 |
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| 作者单位： | 兰州理工大学生命科学与工程学院，兰州 730050,兰州理工大学生命科学与工程学院，兰州 730050,兰州军区兰州总医院骨科研究所，兰州 730050,兰州军区兰州总医院骨科研究所，兰州 730050,兰州理工大学生命科学与工程学院，兰州 730050 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81270963)；甘肃省科技重大专项计划资助项目(092NKDA025) |
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| 摘 要： | 目的研究淫羊藿苷是否通过c AMP-PKA信号通路来促进成骨细胞(osteoblast,OB)成熟矿化。方法以1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷分别处理体外培养的大鼠颅骨OB细胞和人类乳腺癌细胞(MCF-7)不同时间后,免疫荧光染色法检测2种细胞内雌激素受体(ERα)的核转位情况。待P1代OB细胞铺满80%皿底后,采用1×10?5 mol·L?1的2’,3’-双脱氧腺苷(2’,3’-dideoxyadenosine,DDA)抑制胞内腺苷酸环化酶(adenylate cyclase,AC),同时以1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷分别作用于正常组和信号阻断组不同时间后,ELISA检测细胞内c AMP的含量。以终浓度为1×10?6 mol·L?1蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂KT5720处理细胞,同时以1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷分别作用于信号阻断组和正常组,3 d和6 d后检测胞内碱性磷酸酶(ALP)活性;药物处理48 h后,Real-time PCR检测I型胶原(collagen I,COL I)、Runx-2、ALP m RNA的表达量;Western blot检测COL I、Runx-2蛋白表达量。结果淫羊藿苷作用于细胞4 h后,MCF-7胞内ERα发生明显的核转位,而OB细胞在所有时间点都未检测到明显核转位现象,结合本课题组前期的淫羊藿苷雌激素比较试验说明,淫羊藿苷促进成骨细胞成骨性分化并不主要依赖于其雌激素活性。淫羊藿苷促OB细胞后,胞内c AMP迅速升高,处理1 h后与对照组相比具有显著性差异。加入DDA阻断AC后,淫羊藿苷促胞内c AMP升高的作用消失。1×10?5 mol·L?1淫羊藿苷能够显著地促进胞内ALP的活性,成骨性分化相关的因子COL I、Runx-2和ALP的基因表达也相应增高,同时COL I和Runx-2蛋白表达量也显著增加。当采用KT5720抑制PKA的活性之后,ALP活性下降,成骨性分化的指标也随之降低。结论淫羊藿苷促进OB细胞成骨性分化并不主要依赖于其雌激素活性,而是通过迅速提高成骨细胞内c AMP的含量,激活胞内c AMP-PKA信号通路,进而促进成骨性相关因子的表达,来促进OB细胞成熟矿化。
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| 关 键 词： | 淫羊藿苷 成骨细胞 c AMP 蛋白激酶A |
| 收稿时间： | 2014/7/28 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2/2/2015 12:00:00 AM |
Icariin Promote Bone Formation Dependent on cAMP-PKA Signaling Pathway |
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| SHI Wengui,LI Xueyan,CHEN Keming,MA Xiaoni and XIE Yanfang.Icariin Promote Bone Formation Dependent on cAMP-PKA Signaling Pathway[J].The Chinese Journal of Modern Applied Pharmacy,2015,32(2):131-136. |
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| Authors: | SHI Wengui LI Xueyan CHEN Keming MA Xiaoni and XIE Yanfang |
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| Institution: | School of Life Science and Engineering, Lanzhou University of Technology, Lanzhou 730050, China,School of Life Science and Engineering, Lanzhou University of Technology, Lanzhou 730050, China,Institute of Orthopaedics, Lanzhou General Hospital, Lanzhou Command of CPLA, Lanzhou 730050, China,Institute of Orthopaedics, Lanzhou General Hospital, Lanzhou Command of CPLA, Lanzhou 730050, China and School of Life Science and Engineering, Lanzhou University of Technology, Lanzhou 730050, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | icariin osteoblast cAMP protein kinase A(PKA) |
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