| 重组人骨形态发生蛋白4基因腺相关病毒载体对兔骨髓基质干细胞生物学行为的影响 |
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| 引用本文： | 董智勇,郑召民,邝冠明,李佛保.重组人骨形态发生蛋白4基因腺相关病毒载体对兔骨髓基质干细胞生物学行为的影响[J].中华创伤骨科杂志,2007,9(1). |
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| 作者姓名： | 董智勇 郑召民 邝冠明 李佛保 |
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| 作者单位： | 1. 青岛市胶州中心医院骨科
2. 510080,广州,中山大学附属第一医院脊柱外科 |
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| 基金项目： | 教育部霍英东教育基金“优选资助课题”(94020)，广东省自然科学基金项目(036643) |
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| 摘 要： | 目的应用重组人骨形态发生蛋白4基因腺相关病毒载体(AAV-hBMP4)转染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),观察其对BMSCs生物学行为的影响,从而为骨组织工程寻找理想的病毒载体及种子细胞。方法全骨髓法培养兔BMSCs,按感染复数(MOI)值不同设定为四组,分别转染兔BMSCs,观察病毒量对细胞形态的影响。选取影响最小的MOI值,进行后续实验。转染兔BMSCs,MTT法描记细胞生长曲线,观察AAV对细胞增殖活性的影响。以重组增强型绿色荧光蛋白基因的腺相关病毒载体(AAV-EGFP)为参照,行流式细胞仪检测,计算转染效率。AAV-hBMP4与对照病毒AAV-EGFP分别转染细胞,观察细胞形态,行碱性磷酸酶(ALP)染色、Von Kossa染色及ALP含量测定,观察成骨活性。兔肌袋实验观察异位成骨情况。结果MOI值为5×10~4 vg/cell时,AAV对细胞形态影响最小,以此值进行后续实验。AAV转染后,细胞增殖活性良好,转染效率为55％～65％。AAV-hBMP4转染后,细胞形态呈现典型的成骨改变,ALP染色及Von Kossa染色均出现成骨的特征性改变,而AAV-EGFP组无上述改变。细胞上清ALP含量测定显示,实验组ALP含量显著增高,与对照组比较差异有统计学意义(t=218．65,P＜0．01)。兔肌袋实验术后4周组织学检测可见大量钙盐沉积,矿化结节形成。结论AAV-hBMP4转染效率高,对BMSCs的增殖活性影响小,AAV-hBMP4转染的BMSCs可望成为组织工程化骨的理想种子细胞。
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| 关 键 词： | 骨组织工程 骨形态发生蛋白4 腺相关病毒 骨髓基质干细胞 基因治疗 |
Biological effects of transfection of AAV-hBMP4 on rabbit's bone marrow stromal cells |
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| DONG Zhi-yong ZHENG Zhao-min KUANG Guan-ming.Biological effects of transfection of AAV-hBMP4 on rabbit''''s bone marrow stromal cells[J].Chinese Journal of Orthopaedic Trauma,2007,9(1). |
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| Authors: | DONG Zhi-yong ZHENG Zhao-min KUANG Guan-ming |
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| Institution: | DONG Zhi-yong ZHENG Zhao-min KUANG Guan-ming Department of Spine Surgery,The First Affiliated Hospital,Sun Yat-sen University,Guangzhou SlO080,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bone tissue engineering Bone morphogenetic protein 4(BMP4) Adeno-associated virus(AAV) Bone marrow stromal cells(BMSCs) Gene therapy |
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