左旋肉碱修饰的壳聚糖-硬脂酸协载槲皮素口服紫杉醇纳米胶束的制备、表征及在体肠循环研究

目的 制备左旋肉碱修饰的壳聚糖-硬脂酸（LC-SA/CS-SA）纳米胶束，包载紫杉醇（PTX）且协载槲皮素，考察胶束特性，并以大鼠在体肠循环评估给药系统对PTX口服吸收的促进作用。方法 将硬脂酸（SA）通过酰胺化反应接枝于壳聚糖（CS），形成共聚物CS-SA；采用核磁共振H谱、红外光谱鉴定产物结构；以PTX为主药，槲皮素为辅药，采用激光粒径分析、Zeta电位分析和HPLC分析分别考察了胶束的粒径、Zeta电位、载药量、包封率；透射电子显微镜观察胶束形貌；芘荧光探针法测定LC-SA/CS-SA胶束的临界胶束浓度（critical micelle concentration，CMC）；透析袋法考察胶束的体外释放行为；大鼠在体肠吸收实验评估载药胶束的促吸收作用。结果 红外与核磁结果表明SA通过酰胺键接枝于CS；协载槲皮素的LC-SA/CS-SA载PTX胶束呈类球形，粒径为（148.3±1.7）nm，多分散系数（PDI）为0.16±0.07，Zeta电位为（24.600±0.167）mV，CMC为14.31 μg/mL；体外释放结果表明，与市售紫杉醇注射剂相比，协载槲皮素的LC-SA/CS-SA载PTX胶束、LC-SA/CS-SA载PTX胶束具有明显缓释效应；大鼠在体肠吸收实验表明，协载槲皮素的LC-SA/CS-SA胶束对载药PTX的胃肠吸收具有显著促进作用。结论 构建的协载槲皮素的LC-SA/CS-SA载PTX胶束性能优良，促进了PTX的大鼠肠吸收，具有增强药物口服吸收潜力。     

枳实薤白桂枝汤HPLC指纹图谱及10种指标成分含量测定研究

目的建立枳实薤白桂枝汤HPLC指纹图谱分析方法和复方中10种指标成分(辛弗林、槲皮素、桂皮酸、厚朴酚、柚皮苷、腺苷、香豆素、橙皮苷、和厚朴酚、新橙皮苷)含量测定方法,开展相关评价分析。方法采用HPLC法建立枳实薤白桂枝汤指纹图谱,开展相似度评价研究;测定复方中10个指标成分,分析复方中药材不同配伍对其量的变化影响;采用聚类分析等化学计量学方法,对获取相关数据进行分析,评价枳实薤白桂枝汤的质量控制相关指标的影响和价值。结果 10批样品的相似度在0.376～0.990,部分批次相似度大于0.9(5批),说明10批样品相似度差异较大。10批样品中S1～S3、S5、S6、S8、S10为一组,S4、S9为一组,S7单独为一组。共标定了30个特征峰,经主成分分析,主成分1～6是影响药材样品质量评价的主要因子;30个特征峰中对样品分组起关键作用的成分为21(新橙皮苷)、26、29(和厚朴酚)、3、23、17、30(厚朴酚)、5、24(香豆素)、28和7。含量测定结果显示,除槲皮素外,其余9种成分在测定的质量浓度范围内线性关系、精密度、稳定性和重复性良好;不同配伍会对药材中相关成分产生增加或抑制溶出的作用。结论所建立的HPLC方法可用于同时测定枳实薤白桂枝汤中10种化学成分的含量,该方法高效、准确、重复性好,可用于枳实薤白桂枝汤的质量控制和评价。     

基于网络药理学和分子对接技术的抗病毒颗粒治疗新型冠状病毒肺炎（COVID-19）的潜在物质基础研究

目的通过网络药理学及分子对接技术探寻抗病毒颗粒治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的潜在物质基础。方法借助TCMSP检索抗病毒颗粒中板蓝根、连翘、石膏、知母、芦根、地黄、广藿香、石菖蒲、郁金的化学成分和作用靶点。通过Uni Prot数据库查询靶点对应的基因,进而运用Cytoscape3.6.1构建药材-化合物-靶点(基因)网络,通过DAVID进行基因本体(GO)功能富集分析和KEGG通路富集分析,预测其作用机制,将药材-化合物-靶点网络中排名前15的成分与新型冠状病毒(SARS-Co V-2)3CL水解酶进行分子对接,同时将比枯枯灵、木犀草素、槲皮素与血管紧张素转化酶Ⅱ(ACE2)进行分子对接。结果药材-化合物-靶点(基因)网络包含药材8个、化合物75个、靶点255个。GO功能富集分析得到GO条目161个(P0.05),其中生物过程(BP)条目65个,细胞组成(CC)条目36个,分子功能(MF)条目60个。KEGG通路富集筛选得到131条信号通路(P0.05)。分子对接结果显示抗病毒颗粒中比枯枯灵、木犀草素、槲皮素等核心活性化合物与SARS-Co V-23CL水解酶的亲和力与临床推荐化学药相似。结论抗病毒颗粒中的活性化合物比枯枯灵、木犀草素、槲皮素等能通过与ACE2结合作用于PTGS2、HSP90AB1、PTGS1等靶点调节多条信号通路,从而可能发挥对COVID-19的治疗作用。     

Quercetin protects against cisplatin‐induced acute kidney injury by inhibiting Mincle/Syk/NF‐κB signaling maintained macrophage inflammation

Acute kidney injury (AKI) with high incidence and mortality is the main cause of chronic kidney disease. Previous studies have indicated that quercetin, an abundant flavonoid in plants, exhibited renoprotective role in AKI. However, the underlying mechanism is largely unknown. In this study, we try to explore whether quercetin protects against AKI by inhibiting macrophage inflammation via regulation of Mincle/Syk/NF‐κB signaling. The results demonstrated that quercetin can significantly inhibit expression and secretion of IL‐1β, IL‐6, and TNF‐α in LPS‐induced bone marrow‐derived macrophages (BMDMs) and reduce activity of Mincle/Syk/NF‐κB signaling in vitro. We also found that quercetin can strongly reduce the concentration of serum creatinine, BUN, IL‐1β, IL‐6, and TNF‐α in cisplatin‐induced AKI model. Furthermore, quercetin down‐regulated protein levels of Mincle, phosphorylated Syk and NF‐κB in kidney macrophages of AKI, as well as inhibited M1, up‐regulated M2 macrophage activity. Notably, the down‐regulation of LPS‐induced inflammation by quercetin was reversed after adding TDB (an agonist of Mincle) in BMDMs, suggesting that quercetin suppresses macrophage inflammation may mainly through inhibiting Mincle and its downstream signaling. In summary, these findings clarified a new mechanism of quercetin improving AKI‐induced kidney inflammation and injury, which provides a new drug option for the clinical treatment of AKI.     

槲皮素对脑出血大鼠神经细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的作用研究

目的通过观察大鼠脑出血后神经细胞凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达的动态变化及槲皮素的干预作用,探讨槲皮素可能的神经保护作用及机制。方法以雄性健康SD大鼠通过自体血注入法制备大鼠脑出血模型,并随机分为假手术组、脑出血模型组、槲皮素低剂量组、槲皮素高剂量组,共4组,每组30只;槲皮素低剂量组和槲皮素高剂量组分别给予槲皮素10、50 mg/(kg·d)腹腔内注射,假手术组和脑出血模型组给予同等体积生理盐水腹腔内注射,每日1次,连续7 d;各组大鼠分别在术后第6小时、1天、2天、3天、7天通过前肢放置试验评分法评估神经功能缺损,采用TUNEL法检测血肿周围神经细胞凋亡,采用Western blot法检测血肿周围Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。结果与模型组比较,槲皮素低剂量组在脑出血后第3天、7天及槲皮素高剂量组在第2天、3天、7天的前肢放置试验评分和Bcl-2蛋白表达均明显增加(P<0.01);与模型组比较,槲皮素低剂量组在第3天、7天及槲皮素高剂量组在第1天、2天、3天、7天的神经细胞凋亡率和Bax蛋白表达均明显降低(P<0.01)。结论槲皮素能减轻脑出血后神经功能损伤,其机制可能与上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,从而减少神经细胞凋亡有关。     

石草鞋化学成分分离鉴定

目的:研究石草鞋乙醇提取物的化学成分,对石草鞋全草进行分离鉴定。方法:取石草鞋全草,用90%乙醇回流提取,经低压浓缩后得石草鞋浸膏。将上述浸膏加水超声溶解后依次用石油醚、二氯甲烷和正丁醇萃取。将所得正丁醇部分萃取物过硅胶色谱柱,以石油醚-丙酮-甲醇(80∶20∶0~0∶20∶80)系统梯度洗脱,经过结晶、重结晶、离心分离、过硅胶和LH-20羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)纯化。将二氯甲烷萃取物以石油醚-丙酮-甲醇(50∶50∶0)系统梯度洗脱,合并相同组分,再经过离心分离、硅胶和葡聚糖Sephadex LH-20等反复分离、纯化。根据ESI-MS,~1H-NMR和~(13)C-NMR等波谱数据分析鉴定结构。结果:从石草鞋乙醇提取物正丁醇部分中鉴定了7化合物,二氯甲烷部分中鉴定了8化合物。分别鉴定为对羟基苯甲醛(1),3,5-二甲氧基4-羟基苯甲酸(2),苯甲酸(3),桂皮酸(4),丹皮酚(5),槲皮素(6),6,7-二羟基香豆素(7),阿魏酸(8),对羟基苯甲酸(9),2,3-二羟基苯甲酸(10),3,4-二羟基苯甲酸(11),齐墩果酸(12),金丝桃苷(13),没食子酸(14),β-谷甾醇(15)。结论:所有化合物均为首次从该植物中分离得到。     

Bioactive composition and antibacterial activity of three herbal extracts (lemongrass,sage, and guava leaf) against oral bacteria: An in vitro study

ObjectiveThe objective of this study was to estimate the antibacterial activity of three different herbal extracts against oral bacteria and their bioactive composition.MethodsUsing the disk diffusion technique, the antibacterial activities of three different extracts (lemongrass, sage, and guava leaf) were evaluated against oral bacteria (Streptococcus mutans, Staphylococcus aureus, and Enterococcus faecalis). Additionally, the bioactive components of the herbal extracts were assessed by employing the gas chromatography-mass spectrometry technique.ResultsThe sage, lemongrass, and guava leaf extracts suppressed the proliferation of all three tested bacterial strains at different rates. The phytochemical analysis revealed that sage extract possessed the highest content of antioxidants, phenols, and flavonoid compounds. The gas chromatography-mass spectrometry analysis of the tested plants revealed the presence of vital bioactive compounds.ConclusionsLemongrass, sage, and guava leaf extracts have potent antibacterial activities, are rich in bioactive compounds, and could be utilized as natural remedies for the prevention of oral diseases.     

GEO芯片联合网络药理学和分子对接探讨归芍地黄汤治疗新生血管性年龄相关性黄斑变性的作用机制及实验验证

目的 基于高通量基因表达数据库(GEO)、网络药理学和分子对接技术分析归芍地黄汤对新生血管性年龄相关性黄斑变性的可能作用靶点和相关机制,并通过体内实验进行验证。方法 通过查阅文献及中国传统医学公共数据库(TCMSP)确定归芍地黄汤的主要成分及靶标,绘制成分-靶点网络拓扑图。通过整合GEO数据库和公共数据库对新生血管性年龄相关性黄斑变性的疾病靶点进行预测。使用Venny在线平台确定药物-疾病的交集靶点,构建蛋白质相互作用(PPI)网络图,利用Cytoscape软件筛选关键基因(Hub),利用R语言对交集靶点进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。将归芍地黄汤核心成分与靶基因之间进行分子对接,最后利用光学相干断层扫描和免疫组化显示组织病理学变化,荧光素眼底血管造影观察脉络膜新生血管膜渗漏情况,并验证其对靶基因表达水平的影响。结果 从GSE29801数据集中获得50个差异基因,筛选得到药物-疾病交集靶点134个。核心靶点包括白蛋白(ALB)、肿瘤蛋白p53(TP53)、蛋白激酶B1(Akt1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子(TNF)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(CASP3)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、过氧化氢酶(CAT)、表皮生长因子受体(EGFR)、缺氧诱导因子1A(HIF1A)。这些基因主要富集在对外来生物刺激的反应、对营养水平的反应和创口愈合等生物学过程中,参与衰老、氧化应激、免疫炎症反应和细胞凋亡等相关途径。分子对接预测显示,归芍地黄汤核心成分与丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、VEGFA、TNF-α、IL-6表现出稳定的结合。动物实验显示,归芍地黄汤减轻了激光造模诱导的眼底病变,下调了VEGF、TNF-α水平,且治疗前后BN大鼠p38 MAPK表达水平存在差异。结论 归芍地黄汤可以减轻脉络膜新生血管膜渗漏大鼠视网膜病变,揭示了归芍地黄汤治疗新生血管性年龄相关性黄斑变性可能与激活MAPK信号通路有关。     

基于网络药理学和分子对接探究布渣叶改善消化不良的作用机制

目的 基于网络药理学和分子对接技术探讨布渣叶Microcos paniculata Linn.对消化不良的潜在物质基础和作用机制。方法 通过检索TCMSP数据库、文献和SwissTargetPredicted数据库收集成分和靶点信息,利用GeneCards和OMIM数据库获得疾病靶点,利用软件R 4.2.1中Venndigram包构建韦恩图,获得布渣叶和疾病的共同靶点;将得到的共同靶点通过软件R 4.2.1做基因本体(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析,通过STRING网站和Cytoscape 3.9.2做PPI分析得到核心靶点;利用Cytoscape 3.9.2构建“成分-靶点”网络图获得核心成分,将获得的核心成分和核心靶点利用Mastro进行分子对接。结果 筛出154个靶点,核心靶点主要有蛋白激酶B1(Akt1)、细胞肿瘤抗原(TP53)、血管内皮生长因子(VEGFA)、表皮生长因子受体(EGFR)、白细胞介素-6(IL-6)、非受体酪氨酸激酶(SRC)、肿瘤坏死因子(TNF),布渣叶改善消化不良可能通过正向调节酶活性、伤口愈合、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)级联调控等生物过程,与磷脂酰激醇3-激酶(PI3K)-Akt信号通路、脂质代谢与动脉粥样硬化通路、流体剪切应力和动脉粥样硬化有关。分子对接结果表明,核心靶点与相对应的核心成分有比较稳定的对接,其中紫云英苷与SRC有强烈的对接活性。结论 布渣叶中多种活性成分通过多途径、多靶点来调节胃肠动力、修复胃肠黏膜屏障、抑制肠道炎症反应以发挥药效,可为后续进一步作用机制和物质基础研究提供一定的参考。     

HPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS法鉴定森登-4味涂剂中化学成分

目的 采用高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱（HPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS）法鉴定森登-4味涂剂中化学成分。方法 色谱条件：Shim-pack GIST-HP C₁₈色谱柱（150 mm×4.6 mm,5 μm）,流动相为乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱,体积流量0.35 mL/min,柱温为40 ℃,进样量为5 μL。质谱条件：检测方式Full MS/dd-MS²,扫描范围m/z 110～1 200。电喷雾离子源（ESI）,正、负离子模式扫描,喷雾电压4.20 kV（+）、3.80 kV（-）,碰撞能量（CE）30 eV。通过全方化学成分信息库,结合多级质谱碎片信息、对照品保留时间,鉴定森登-4味涂剂中化学成分。结果 在森登-4味涂剂中共鉴定出60个成分,包括16个黄酮类成分、13个有机酸类成分、11个环烯醚萜类成分、10个鞣质类成分、4个氨基酸类成分、4个脂肪酸类成分、2个三萜类成分,并考察了山栀苷、槲皮素、阿魏酸、克里拉京、齐墩果酸、脯氨酸、亚油酸的MS²图和可能的裂解途径。结论 对森登-4味涂剂中化学成分进行了快速、准确的鉴定,为其质量标准建立、药效物质挖掘和作用机制研究提供了实验基础。