水凝胶包埋酶(单凝胶和双网络凝胶)及磁性粒子固定化酶的制备及评价(英文)

酶固定化过程中,固定化酶的方法及其载体的选择是酶固定化过程的关键因素,适宜的固定化法和良好的载体微环境对酶活保持率提高和稳定性增强尤其重要。在本研究中,利用96孔微分析板评价了用于高通量筛选的水凝胶包埋酶(单凝胶和双网络凝胶)及磁性粒子固定化酶的制备方法及其对酶活性(保存时间,精度和重现性)的影响。胰蛋白酶(trypsin)成功地包埋在单凝胶和双网络凝胶中并且固定在磁性粒子上,然而,包埋在单凝胶和双网络凝胶,或固定在磁性粒子上的胃蛋白酶无法与底物反应。在对酶的适应性方面,与双网络凝胶比较,单凝胶和磁性粒子固定化法更加优越,适用于多种酶(如:胰蛋白酶,葡糖苷酸酶,CYP1A1)的固定。然而,我们也发现浸置后,以单凝胶包埋的固定酶有较多的损失。双网络凝胶包埋法只限于包埋胰蛋白酶,无法用于包埋其它酶,例如葡糖苷酸酶、CYP1A1和胃蛋白酶,因为双网络凝胶包埋法会由于丙烯酰胺和过硫酸胺的存在而使酶失去活性。在三种酶固定方法中,磁性粒子固定酶的方法能够最好地保留酶活性。另外,磁性粒子固定酶的稳定性比其他两种方法好,存放一周后胰蛋白酶和葡糖苷酸酶的活性没有任何下降。其次,磁性粒子固定法的重复利用重现性也良好。此外,尽管双网络凝胶法包埋酶的种类有限,但是我们认为通过改变丙烯酰胺等载体的选择和设计,改进载体微环境,可以使包埋酶的效率得到提高。     

羧甲基壳聚糖微球固定化AS1.398中性蛋白酶的制备和性质研究

以戊二醛为交联剂,制备羧甲基壳聚糖微球固定AS1．398中性蛋白酶。研究了羧甲基壳聚糖固定化酶微球的制备条件、固定化酶的适宜温度、pH、米氏常数和储存稳定性等性质。结果表明。在pH=7．0的中性环境下；交联剂与羧甲基壳聚糖摩尔比为0．4：1；干酶与羧甲基壳聚糖的质量比为0．125：1；在室温下交联至少4h。便可得到活力相对较高的固定化酶。自由酶和固定化酶的最适宜温度分别为40℃和65℃。在70℃下，固定化酶的热稳定性比自由酶要好。自由酶和固定化酶的最佳pH分别为7．0和6．0，固定化酶具有较宽的酸碱稳定性，在pH6～8都保持较高活力。固定化酶在5℃和35℃下储存1周后酶相对活力分别为97．6％和85．1％，而没有被固定的自由酶在5℃下储存1周酶相对活力仅为61．3％。自由酶和固定化酶的Km分别为5．66g／L和1．04g／L。     

星点设计-效应面法优化壳聚糖微球对凝血酶的固定化作用研究

目的 考察壳聚糖微球对凝血酶的固定化作用。方法 本研究以壳聚糖微球为载体,以戊二醛为交联剂将凝血酶固定于空白微球上,以固定化凝血酶的活性回收率为指标,采用星点设计-效应面法优化固定凝血酶的条件。结果 试验结果表明,壳聚糖微球固定凝血酶的最优条件是：凝血酶浓度69.32 U·mL^-1、戊二醛浓度0.18%、固定化时间1.88 h、固定化pH 7.08,凝血酶的活性回收率为81.55 %。结论 壳聚糖微球对凝血酶的固定化效果良好。     

葡萄糖氧化酶生物传感器的构建和性能研究

目的以固定化葡萄糖氧化酶酶膜构建葡萄糖生物传感器,并对其性能进行评价。方法优化载体及戊二醛交联固定化条件,制备性能良好的葡萄糖氧化酶酶膜,研究固定化酶的性能并用于构建葡萄糖传感器。结果固定化葡萄糖氧化酶的最适催化温度为40℃、pH为7.0;葡萄糖生物传感器的响应时间小于20 s,在0～1.5 g·L-1葡萄糖浓度范围内有良好的线性,具有很强抗干扰和稳定性。结论该葡萄糖生物传感器性能良好,可用于生物样品中葡萄糖测定。     

用固定化生长微生物细胞改善氨基酸调味液品质

利用固定化生长的酵母细胞和黑曲霉菌丝体 ,对酸法水解的氨基酸水解液进行发酵 ,除去水解液异臭味 ,使调味液的口味和风味得到明显改善 ,产品既有氨基酸调味液的特点 ,又具有酱油的风味     

酶的微胶囊化及其在生物医学中的应用

<正> 酶固定化技术在生物医学中的应用研究是近一、二十年的事,但是由于它具有某些特殊的优越性,因此发展迅速,方兴未艾.固定化酶的制备一般可采用五种基本技术:(1)微胶囊法;(2)吸附法;(3)共价结合法;(4)交联法;(5)包埋法.其中在医学中应用较广泛的是微胶囊法.本文就酶的微胶囊化方法及其在生物医学中的应用作以介绍. 酶的微型胶囊化早在1893年,Francis就利用木瓜蛋白酶来治疗白喉的假膜和结核性溃疡.目前,人们已经将酶作为药物在临床上广泛应用,取得了良好的疗效,发展成为酶疗法.但是,用于治疗的酶,本身是一种蛋白质,进入人体后会产生抗体。由于抗原抗体的反应,可导致过敏性休克.此外,作为药物使用的酶活     

藻多糖对固定化藻蓝蛋白抑癌作用的影响

目的 :　研究螺旋藻多糖 (PSP)对固定化藻蓝蛋白 (PC)抑癌作用的影响。方法 :　钝顶螺旋藻经热水抽提 ,脱蛋白 ,醇沉淀得粗多糖 PSP,PSP经 DEAE-Sephadex柱层析得到组分多糖 PSP 和 PSP 。将 PSP 溶液添加在接枝有 PC的组织培养聚苯乙烯培养孔内 ,对人胰腺癌SW1 990细胞进行无血清培养 48h。结果 :　 PSP浓度为 1 5 mg/L时 ,以多糖对癌细胞生长的抑制作用为主 ,而在 1 0 ,1 7.5 ,2 5 mg/L浓度时均以固定化 PC的抑制作用为主 ,多糖有一定的协同作用。固定化 PC浓度以 0 .0 2 mg/well为最佳浓度 ,对胰腺癌 SW1 990细胞的抑制作用最强 ,在 1 7.5mg/L PSP存在下 ,抑制率最高可达到 86%。结论 :　表面吸附 PSP可以进一步提高接枝 PC生物活性材料的抑癌活性     

固定化啤酒酵母细胞合成5’-三磷酸腺苷

用K-卡拉胶包埋啤酒酵母制成固定化细胞,在0.05mol/L葡萄糖,0.022mol/L腺苷酸,0.012mol/LMgSO_4·7H_2O,0.2mol/L氯化钾,0.2mol/L磷酸钾缓冲溶液(pH7.0)中,35℃反应4小时,5′-三磷酸腺苷转化率可达42%,在50ml三角烧瓶中分批反应,连续使用5次,5′-三磷酸腺苷转化率仍维持在37%以上。     

酶在有机溶剂中的生物催化性能及其固定化技术

在有机相中，酶具有与其在水相中相同的晶体结构，能够正确折叠和恢复活性，其活性严重依赖于干燥前水相的pH值，并受有机溶剂中水含量的影响。有机介质中水分子的存在对于保持天然蛋白质的活性构象和控制蛋白质表面基团的离子化状态具有重要作用。盐种类及有机介质对有机相中酶催化反应的对映体选择性有重要的影响。酶经固定化后，底物在酶分子间的传质阻力减少，酶活得以增大。固定化酶介质对固定化酶活具有较大的影响。文章还介绍了有机相中固定化酶的新方法。     

固定化β-羟丁酸脱氢酶的研究

目的研究固定化β-羟丁酸脱氢酶的性质及其临床应用价值。方法以壳聚糖为载体，使用戊二醛为交联剂共价键将β-羟丁酸脱氢酶固定化。结果酶蛋白偶联率为60．9％，酶的活性回收率为55．4％；原酶和固定化酶的km值分别为0．8&#215;10^-2g/ml和0．5&#215;10^-12g／ml；原酶最适温度为37℃，固定化酶最适温度为50℃；原酶最适pH值为8．0左右，固定化酶最适pH值为7．3左右。结论由于固定化酶具有较高的热稳定性（最适50℃）和低温稳定性（4℃8个月），可在较大的温度范围和较长时间内反复使用，有利于环保和降低试剂盒的成本。