人外周血T细胞活化状态对血卟啉单甲醚吸收的影响

目的：观察健康人外周血T细胞的活化状态对其吸收新型光敏剂血卟啉单甲醚(HMME)的影响。以期为进一步研究HMME-PDT对活化T细胞选择性作用提供实验依据。 方法： 以流式细胞仪检测孵育浓度和孵育时间对活化T细胞吸收HMME的影响。密度梯度法常规分离人外周血淋巴细胞，分别以多克隆刺激剂PHA和PDB+Ion刺激T细胞活化，同时设立未加刺激剂的静止T细胞作对照。在评价孵育浓度对T细胞吸收HMME的影响时，将上述处理的淋巴细胞分别与0、5、10、20、30和40 mg/L的HMME孵育1 h，经CD3抗体染色后进行T细胞HMME吸收分析。在评价T细胞活化状态对HMME吸收量与孵育时间相关性的影响时，将培养的淋巴细胞与10 mg/L的HMME分别孵育0-160 min后进行检测。 结果： T细胞的活化使其HMME吸收量的孵育浓度相关曲线以及孵育时间相关曲线较静止T细胞右移和上移。在一定孵育浓度范围内(5-20 mg/L)，活化T细胞对HMME的吸收量明显大于静止T细胞，差别具有统计学意义。然而，随着孵育浓度的进一步增加，活化T细胞与静止T细胞对HMME吸收量的差异逐渐减小。在10 mg/L HMME孵育浓度的条件下，不论活化与否，随着孵育时间的延长，T细胞内HMME的吸收量在逐渐增强。在15-60 min之间，活化T细胞HMME吸收量明显高于静止T细胞。 结论： 活化T细胞与静止T细胞HMME吸收量的差别取决于其孵育浓度和孵育时间，在一定孵育浓度和孵育时间范围内，活化T细胞HMME的吸收量明显高于静止T细胞，提示这可能有助于形成选择性删除活化T细胞的剂量关联和时间关联的HMME-PDT治疗窗口。     

光敏剂DE-03对癌细胞和移植瘤的光动力杀伤作用及光毒反应

用台盼蓝染色及TNS荧光法测定光敏剂DE-03对癌细胞的光动力杀伤作用。结果表明,S_(180),Hepa,U_(14)癌细胞经DE-03 8μg/ml处理和黑光照射20min,杀伤率分别为65.0±2.5%,69.7±2.5%和81.3±2.2%,对S_(180)细胞50%的杀伤浓度为6.93μg/ml。向移植瘤小鼠静脉注射DE-03或YHpD20mg/kg后48h,氨离子泵浦染料激光照射20min,对小鼠S_(180)、U_(14)移植瘤的瘤重抑制率,DE-03为52.2%、47.8%,YHpD为31.3%、40.6%。以耳指数为观察指标,DE-03的光毒反应低于YHpD。     

载声敏剂的高分子超声造影剂体内抑瘤效应及其副反应考察

目的通过对比观察载声敏剂血卟啉(HP)的高分子聚合材料聚乳酸羟基乙酸共聚物(PL-GA)超声微泡造影剂(HP-PLGA)的光敏副反应,并观察超声联合该载药微泡对小鼠H22肝癌皮下移植瘤的声动力治疗效果。方法将35只Balb/c小鼠分为5组,分别将不同浓度的HP-PLGA与单纯HP溶液经尾静脉注入各组小鼠体内,阳光辐照后比较观察不同组小鼠眼睛、背部皮肤、尾巴及肝脏产生的副反应。另建立小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,将荷瘤鼠随机分为A、B两大组进行处理,每组30只。A、B组又分为空白对照(C)组、单纯超声辐照(US)组、超声加空白微泡(US+MB)组、超声加单纯HP(US+HP)组和超声加载HPPLGA微泡(US+HP-PLGA)组,隔天处理一次,连续处理3次。A组荷瘤小鼠治疗后15d,比较各组荷瘤小鼠的质量抑瘤率;B组荷瘤小鼠治疗处理后继续喂养,观察各处理组小鼠的生存期。结果注射40mg/ml与20mg/ml单纯HP组小鼠背部皮肤出现明显的红斑焦痂,眼睛红肿,尾巴肿胀,肝脏出现损伤性病理改变,而其他各组无明显反应。与其他各处理组相比较,超声联合载声敏剂PLGA微泡组质量抑瘤率最大,平均生存天数最长,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论将声敏剂包裹进高分子造影剂内可以大大降低声敏剂的光敏毒性副反应,且该载声敏剂的高分子造影剂具有明显的体内抑瘤作用,为寻求一种安全、有效、靶向性高、毒副作用小的声动力抗肿瘤方法提供了新的思路和依据。     

血啉甲醚光动力疗法治疗兔脉络膜黑色素瘤的实验研究

目的探讨国产新型光敏剂血啉甲醚光动力疗法（PDT）治疗兔脉络膜黑色素瘤的效果。方法选择46只新西兰白兔（46只眼）建立脉络膜黑色素瘤模型。每日注射环孢素A以抑制免疫反应,用间接检眼镜和B超观察肿瘤生长,至瘤体为1．5～4．6mm厚度时,将46只兔（46只眼）分成两组,实验组41只眼,均静脉给予血啉甲醚10mg／kg体重,3h后用波长为630nm的氦氖激光进行照射,激光能量60～150J／cm^2。对照组5只眼,其中1只眼为空白对照,2只眼为血啉甲醚对照,2只眼为激光照射对照。PDT治疗后通过间接检眼镜、B超、彩色眼底照相观察瘤体变化4～5周,实验组16只眼分别在激光照射后24h和1周时处死,摘取眼球做病理检查,以观察疗效。结果实验组中,当激光能量≥70J／cm^2时,肿瘤生长受到明显抑制,其厚度明显缩小;在激光能量为60J／cm^2照射下,仅有部分肿瘤生长受到抑制。对照组兔眼肿瘤均在2～3周内迅速增大,甚至充满整个玻璃体腔。结论国产光敏剂血啉甲醚光动力疗法对脉络膜黑色素瘤具有一定治疗作用。     

ICG在PDT中对HPD光敏反应作用机制的研究

本文通过化学发光法测定ICG在630nm和514.5nm激光照射下对HPD光敏产生化学发光的影响。发现ICG可减少由HPD光敏产生的化学发光量,这种对光敏反应的抑制作用与光波长和剂量无关,与ICG的浓度有关。认为ICG作用的机制是降低HPD光敏产生的’O~2和ROS的氧化作用,从而抑制了化学发光反应。     

49种单体激光光敏剂体外对两株人癌细胞的光动力杀伤效应

目的比较４９种单体结构的激光光敏剂对两种人癌细胞的光动力杀伤效应。方法用ＭＴＴ试验的方法对人大肠癌细胞株ＳＷ１１１６和红白血病细胞株Ｋ５６２进行激光处理后,以细胞生存率确定５０％肿瘤细胞抑制率（ＩＣ５０）,观察各光敏剂对肿瘤细胞的光动力杀伤作用。结果４９种光敏剂用ＩＣ５０比较,位于前９位的单体光敏剂结构属血卟啉类,对Ｋ５６２和ＳＷ１１１６的ＩＣ５０均＜１．０μｇ／ｍｌ,目前临床上试用的血卟啉单甲醚（ＰＳＤ－００７）的ＩＣ５０处第１７位,对ＳＷ１１１６细胞和Ｋ５６２的ＩＣ５０分别为１．２５μｇ／ｍｌ和３．７５μｇ／ｍｌ。结论本组实验显示,新研制的单体光敏剂,从其光敏作用,前１６位单体可望取代ＰＳＤ－００７。     

Hematoporphyrin-mediated fluorescence reflectance imaging: application to early tumor detection in vivo in small animals

The in vivo early detection of subcutaneous human tumors implanted in small animals was studied by laser-induced fluorescence reflectance imaging (FRI), with a hematoporphyrin (HP) compound as an exogenous optical contrast agent. Tumor detection was shown to be possible just 3 days after the inoculation of tumor cells, when tumors were neither visible nor palpable. However, this detection capability is limited to a temporal window of approximately 100 h from HP administration and to a low optical contrast of the tumor (<2).     

血卟啉衍生物激光治疗动物移植瘤的实验研究

本文报告了用国产 HpD 加氦—氖激光治疗小鼠艾氏腹水癌的实验结果。HpD 加激光、单纯激光、单纯 HpD 治疗后4周的肿瘤抑制率分别为70%、2%、-5%。通过对治疗前后~3H—TdR 掺入法淋转试验等证明,该疗法对小鼠的免疫功能无抑制作用。HpD 激光治疗后电镜动态观察表明,最早出现损害的是线粒体和粗面内质网。     

声动力化学疗法对大鼠脑胶质瘤凋亡及相关基因表达的影响

目的 以大鼠颅内C6胶质瘤为实验模型,观察SDT组、单纯照射组、血卟啉单甲醚(HMME)组、对照组脑胶质瘤组织学变化、原位凋亡检测、Cyt-C和Caspase-3蛋白表达水平.结果 SDT组随着时间的延长,肿瘤组织坏死逐渐增加,24 h达到高峰;单纯照射组可见肿瘤组织坏死较SDT组明显少;对照组及HMME组标本各时间段胶质瘤细胞均未见坏死组织.原位凋亡检查见HMME组和对照组凋亡细胞极少,各时间点凋亡率无明显差别.处理后24 h,单纯照射组凋亡率明显高于HMME组和对照组(P＜0.01);处理后3、7 d,凋亡率与HMME组和对照组无明显差别.SDT组处理后24 h,凋亡率明显高于其他3组(P＜0.01).处理后3、7 d,凋亡率与其他3组无明显差别.HMME组和对照组各时间点Cyt-C和Caspase-3蛋白表达率无明显差别.单纯照射组Cyt-C和Caspase-3蛋白表达率高于HMME组和对照组(P＜0.01);处理3、7 d后Cyt-C和Caspase-3蛋白表达率与HMME组和对照组无明显差别.SDT组处理后24 h,Cyt-C和Caspase-3蛋白表达率明显高于其他3组(P＜0.01).处理后3、7 d,Cyt-C和Caspase-3蛋白表达表达率与其他3组无明显差别.结论 SDT对大鼠脑胶质瘤有明显的抑制效应,早期可能通过损伤线粒体后,释放Cyto-C,激活Caspase-3而直接启动胶质瘤细胞本身凋亡程序.     

声动力效应抑制卵巢癌细胞的体外实验

目的研究超声激活血卟啉对卵巢癌细胞抑制的体外效应。方法应用一定强度的超声激活血卟啉,采用四甲基偶氮唑蓝法、克隆形成率方法检测抑制卵巢癌细胞的作用,并用显微镜观察处理后细胞形态的变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果超声激活血卟啉对抑制细胞生长有明显作用(P<0.05),且随着血卟啉浓度的升高,抑制作用明显增强(P<0.05)。同时,超声激活血卟啉的效应与超声辐照时间有关。结论声动力处理抑制细胞生长作用明显,并可以诱导凋亡。