补骨脂素抗增生性瘢痕作用机制研究

目的探讨补骨脂素抗增生性瘢痕的作用机制。方法体外培养成纤维细胞,按随机数字表法分为正常组(培养正常成纤维细胞)、瘢痕组(培养增生性瘢痕成纤维细胞)、TGF-β1组(10 ng/ml TGF-β1处理增生性瘢痕成纤维细胞5 min^12 h)、Smurf2 RNA干扰组[Smad泛素化调节因子2(Smad ubiquitin regulatory factor2,Smurf2)siRNA转染增生性瘢痕成纤维细胞72 h]、补骨脂素组(10μmol/L补骨脂素处理增生性瘢痕成纤维细胞继续培养72 h)、补骨脂素+TGF-β1组(增生性瘢痕成纤维细胞加入补骨脂素培养72 h后加入TGF-β1培养6 h)。采用Western blot法检测Smurf2、α-平滑肌肌动蛋白(α-actin SMA,α-SMA)蛋白表达;RT-PCR法检测Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达;ELISA法检测TGF-β1蛋白分泌。结果与正常组比较,瘢痕组Smurf2蛋白[(0.83±0.08)比(0.38±0.07)]表达增加(P<0.05);与瘢痕组比较,Smurf2 RNA干扰组TGF-β1[(2.2±0.18)比(4.2±0.47)]表达降低(P<0.05);TGF-β1组Smurf2[(0.71±0.06)比(0.42±0.04)]、α-SMA[(1.42±0.12)比(0.91±0.09)]蛋白表达增加(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA[(0.72±0.09)比(0.41±0.07)]表达增加(P<0.05);补骨脂素组Smurf2[(0.05±0.01)比(0.42±0.04)]、α-SMA[(0.71±0.07)比(0.91±0.09)]蛋白表达降低(P<0.05),Ⅰ型胶原蛋白mRNA表达[(0.12±0.04)比(0.41±0.07)]降低(P<0.05)。结论补骨脂素可能通过TGF-β1/Smurf2信号通路抑制α-SMA蛋白表达,从而降低Ⅰ型胶原蛋白表达,起到抑制瘢痕形成的作用。     

中国仓鼠肺成纤维细胞和HeLa细胞DNA氧化损伤的自身修复能力与比较

目的:研究不同氧化相关因素对中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)和HeLa细胞DNA损伤的自身修复情况.方法:将CHL细胞和HeLa细胞用不同氧化相关因素处理一定时间[CHL细胞:过氧化氢(H2O2)25 min,重铬酸钾(K2Cr2O7)105 min,阿霉素(Dox)75 min;HeLa细胞:H2O2 25 min,K2Cr2O7 105 min],随后立即去毒培养0、0.5、1、2、3 h,以碱性单细胞凝胶电泳技术检测DNA链断裂情况.结果:①CHL细胞经H2O2、K2Cr2O7、Dox作用后引起DNA链断裂,去毒培养1 h链断裂修复明显(P<0.01);去毒培养2～3 h,前两毒剂的损伤组完全修复,而Dox组链断裂仍高于未损伤组;②HeLa细胞经H2O2、K2Cr2O7作用后引起DNA链断裂,去毒培养0.5 h链断裂明显修复(P<0.01),去毒培养1 h则完全修复;③CHL细胞和HeLa细胞损伤后修复的拖尾率与修复时间的回归系数显著不同(P<0.05).结论:两种细胞在氧化性DNA损伤后均迅速启动自身修复,但HeLa细胞比CHL细胞有更快的修复能力;同时这两种细胞由Dox所致损伤修复能力均较H2O2、K2Cr2O7所致的差.     

血管内皮细胞和成纤维细胞混合移植对人工真皮血管化的影响

目的观察同种血管内皮细胞和成纤维细胞移植对人工真皮血管化的促进作用。方法在27只Wistar大鼠背部造成2．5 cm×2．5 cm全层皮肤缺损创面(2处／只),将其分为血管内皮细胞组:将血管内皮细胞混入0．5 ml纤维蛋白胶中,按1．0×105／cm2的密度均匀喷洒于移植床;混合组:将血管内皮细胞和成纤维细胞混入等量纤维蛋白胶后,同前密度喷洒于移植床;对照组:按同样方法喷洒等量纤维蛋白胶。随后各组移植人工真皮,每组9只大鼠18处创面。于移植后5、10 d切取移植的真皮及周围组织行HE、血管内皮生长因子(VEGF)、Masson和墨汁灌注染色,观察新生血管生长情况。于移植后5 d行伊文思蓝灌注,以分光光度计定量检测法测定微血管形成情况。结果移植后5 d,HE、VEGF、Masson和墨汁灌注染色均可见各组移植床有新生血管长入。HE染色见血管内皮细胞组、混合组新生血管数量分别为(14．2±3．6)、(12．1±2．5)条,较对照组[(3．9±1．6)条]明显增多(P<0．05)。移植后10 d,人工真皮内及移植床均有微血管形成,且胶原组织的合成增加。移植后5 d,经伊文思蓝灌注,收集并检测血管内皮细胞组、混合组真皮组织溶出的上清液,吸光度值分别为0．167±0．058、0．155±0．046,均高于对照组的0．066±0．024(P<0．05)。结论同种血管内皮细胞和成纤维细胞移植可促进创面愈合过程中的血管新生,加速人工真皮移植后血管化过程,促进类真皮组织的成熟。     

部分创面外用抗菌药物与成纤维细胞生长因子2、表皮生长因子、重组人生长激素对成纤维细胞生物学特性影响的实验研究

目的观察部分创面外用抗菌药物与成纤维细胞生长因子(FGF)2、表皮生长因子 (EGF)、重组人生长激素(rhGH)对成纤维细胞生物学特性的影响。方法体外培养成纤维细胞, 按所加药物不同分为对照组(常规培养)、丁胺卡那霉素(0．021、0．210、2．100 mg/L)组、庆大霉素(5、 50、500 mg/L)组、氯霉素(0．01、0．10、1．00 mg/L)组、磺胺米隆(5、10 g/L)组、FGF2(2 400 U/ml)组、 EGF(2 000 U/ml)组及rhGH(0．016、0．160、1．600 g/L)组。用噻唑蓝(MTT)法测定各组成纤维细胞增殖活性[吸光度(A)值],用流式细胞仪检测细胞周期,并于显微镜下观察细胞形态的变化。结果 (1)MTT法检测:与对照组A值0．455 3±0．021 7比较,各种剂量丁胺卡那霉素组、庆大霉素组、氯霉素组、磺胺米隆组成纤维细胞A值均明显降低(P<0．05或0．01),其中磺胺米隆(5、10 g/L)组降低最明显,分别为0．101 3±0．001 1、0．095 0±0．004 1(P<0．01)。FGF2组及0．016 g/L rhGH 组细胞A值明显高于对照组(P<0．05),而EGF组及0.160、1．600 g/L rhGH组A值与对照组接近 (P>0．05)。(2)细胞周期检测:对照组细胞增殖指数(PI)为(9．63±0．45)％,与之比较,0．210 mg/L丁胺卡那霉素组细胞PI值无明显变化(P>0．05),FGF2组、EGF组及0．016 g/L rhGH组PI值均明显升高,分别为(46．76±2．33)％、(42．30±1．41)％、(13．29±0．47)％(P<0．05或0．01)。 (3)形态学观察:对照组、EGF组及0．160、1．600 g/L rhGH组成纤维细胞数目较多,呈长条形或梭形, 轮廓不清,透明度高;丁胺卡那霉素组、庆大霉素组、氯霉素组、磺胺米隆组细胞数目较少,形态不规则,轮廓清晰,透明度低,细胞内多有颗粒样物质及空泡;FGF2组、0．016 g/L rhGH组细胞分布均匀、密集,呈长条形或梭形,核分裂相多见,轮廓不清,透明度高。结论不同创面外用药物对成纤维细胞生物学特性的影响各异,在创面修复过程中应选择合适的创面外用药物,以促进愈合并抑制瘢痕增生。     

维拉帕米抑制培养细胞DNA、RNA和蛋白质合成的作用

为探讨钙拮抗剂对细胞大分子物质的代谢影响,本文观察了维拉帕米对人成纤维细胞(2BS)和猴内皮细胞(RF/6A)DNA,RNA和蛋白质合成的作用.维拉帕米抑制2BS细胞DNA和RNA合成的作用为浓度依赖性,ID_(50)分别为12.3和22μg/ml.抑制RF细胞DNA和蛋白质合成的ID_(50)分别为34.4和49.6μg/ml.     

氟伐他汀对环孢素A所致大鼠成纤维细胞肾毒性的保护作用

目的 观察免疫抑制剂环孢素Ａ（CsA）对大鼠肾脏成纤维细胞增殖及细胞因子表达的影响以及氟伐他汀的干预作用，探讨氟伐他汀对CsA肾毒性的保护作用。 方法 体外培养大鼠肾脏成纤维细胞，四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定CsA及氟伐他汀对细胞增殖的影响。RT-PCR方法检测转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）及c-fos mRNA水平。Western印迹检测纤连蛋白(FN)的表达。 结果 CsA可明显抑制成纤维细胞增殖，且呈剂量和时间依赖效应（P < 0.05）。氟伐他汀与CsA合用后，对细胞增殖有明显的抑制作用（P < 0.01）。CsA刺激成纤维细胞TGF-β1、CTGF、c-fos及FN的产生（P < 0.05），氟伐他汀可下调这些改变（P < 0.05）。 结论 氟伐他汀可减轻CsA所致的大鼠肾脏成纤维细胞毒性     

血小板源生长因子对人血管成纤维细胞DNA及胶原蛋白合成的影响

目的:观察血小板源生长因子对培养的人血管成纤维细胞DNA及胶原蛋白合成的影响。方法:采用培养的人血管成纤维细胞,应用 [³H]-TdR和 [³H]-脯氨酸掺入的方法,观察血小板源生长因子-BB对人血管成纤维细胞DNA合成以及胶原蛋白合成的影响。结果:血小板源生长因子-BB可促进静止状态的人血管成纤维细胞DNA及胶原蛋白的合成,在 30μg/L浓度时DNA及胶原蛋白的合成达到高峰,DNA及胶原蛋白分别于 2 4h和 36h合成最为显著。结论:血小板源生长因子-BB可明显促进培养的人血管成纤维细胞DNA及胶原蛋白的合成     

糖尿病大鼠创面愈合过程中成纤维细胞增殖及Ⅰ型胶原合成减少

目的：观察链脲佐菌素诱导的大鼠糖尿病复合创伤修复过程中成纤维细胞增殖与胶原合成的变化。 方法： 实验采用Wistar大鼠112只，随机分对照组和模型组。模型组大鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ）55 mg/kg，3周后各组动物复合背部2.04 cm²全厚皮切除形成伤口。观察创面愈合时间和愈合率；采用HE染色和免疫组化法观察成纤维细胞和增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平；采用苦味酸-天狼星红染色和图像分析技术观察创面Ⅰ、Ⅲ型胶原含量及Ⅰ/Ⅲ型比值。 结果： STZ诱发的糖尿病大鼠复合创伤后创面的愈合时间为(27.13±1.81)d，明显长于对照组（15.25±1.67）d，P<0.01；模型组在创伤第3、7和15 d创面愈合率明显低于对照组，分别P<0.01；在3、5、7和9 d模型组创面成纤维细胞数量和PCNA表达也明显少于对照组，分别P<0.05和P<0.01。两组创面在不同时点上Ⅰ型胶原分布均呈递增趋势，但对照组明显多于模型组，分别P＜0.05；尽管对照组在创伤3、7 d Ⅲ型胶原含量高于模型组，但在创伤3、7和11 d模型组Ⅰ/Ⅲ胶原比值都明显低于对照组，分别P＜0.01。 结论： STZ可能通过影响创面细胞增殖和创面胶原合成，从而导致创面愈合迟缓。     

三氧化二砷对皮肤成纤维细胞、中性粒细胞MMPs活性,TIMP-1及TGF-β1表达的影响

目的：砒石是化腐生肌的常用中药，其主要成分是三氧化二砷（As₂O₃）。本研究通过观察As₂O₃对基质金属蛋白酶（MMPs）活性、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）及转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达影响，探讨化腐中药能否调节胶原代谢，从而治疗慢性皮肤溃疡。方法:明胶酶谱法检测大鼠中性粒细胞（PMNs）来源的MMP-9活性、人成纤维细胞（hFb）分泌的MMP-1、MMP-2的活性，免疫细胞化学法检测hFb TIMP-1、TGF-β₁的表达。结果:As₂O₃浓度在50 mg/L时可以提高大鼠PMNs来源的MMP-9的活性（P<0.01）；在0.8 mg/L可以提高hFb分泌的MMP-1、MMP-2的活性（分别P<0.01）；同时As₂O₃作用于hFb 6 h、12 h、18 h后，TIMP-1、TGF-β₁表达持续降低（P<0.01）。结论:As₂O₃在一定范围内可提高PMNs来源的MMP-9的活性；也可提高hFb分泌的MMP-1、MMP-2的活性，同时抑制hFbTIMP-1、TGF-β₁的表达。提示砷类制剂可通过提高多种MMPs的活性，降低TIMP-1的表达从而发挥化腐作用。     

肾脏固有细胞和浸润细胞在肾小管间质病变中的作用

Tubulointerstitial lesions,occurring in many kinds of renal diseases,have been found to be the predominant factor in the impairment of renal function.The severe and extensive lesions often predict a poor outcome in future.It has been tested recent years that the infiltrating inflammatory cells might play important roles in the onset and deterioration of tubulointerstitial injuries.On the other hand,the resident cells,including the tubular epithelial cells and the fibroblasts,also directly take part in tubulointerstitial inflammation and fibrosis.Researches also dispaly implicated interactions between the infiltrating cells and the resident cells,which contribute to the amplification of inflammation and the progress of fibrosis.