连续核移植对异种山羊(Bore)克隆胚胎发育的影响

目的探讨连续核移植与异种山羊克隆胚胎发育之间的关系。方法分别以波尔(Bore)山羊耳部成纤维细胞、山羊-兔异种克隆桑椹胚卵裂球为核供体,以兔卵母细胞为受体,进行连续核移植。结果共构建145枚异种原代重构卵、73枚继Ⅰ代及20枚继II代重构卵,经电融合后,获得重构胚数分别为90、58和14枚,融合率分别为62.1%、79.5%和70%;162枚重构胚在同等条件下进行体外共培养,卵裂率分别为72.2%、75.9%和28.6%,囊胚率分别为10%、13.8%和0%;融合率方面,原代、继I及继II重构卵之间无显著差异(P>0.05);早期发育率无显著差异,但继Ⅰ代重构胚高于原代重构胚,相反,继II代远低于前两者,差异极显著(P<0.01)。结论波尔山羊体细胞核经第1次核移植过程中异种受体卵胞质作用后,比高度分化的体细胞更有利于重构胚的发育,但异种山羊克隆胚卵裂球反复多次暴露在异种卵胞质中,可能不利于细胞核的发育。     

细胞骨架在卵母细胞成熟、受精及核移植胚胎的作用

细胞骨架系统,不仅是活细胞的支撑结构,决定细胞的形状,赋予其强度,而且是对各细胞器乃至某些大分子进行空间的组织安排,并且参与细胞外信号向核的转导及核对整个细胞活动的调节。哺乳动物卵母细胞和早期胚胎细胞骨架具有其独特的分布和功能,使卵母细胞和胚胎呈现出精确的时空性变化特点。确保受精及胚胎发育按时有序地进行。本文综述了细胞骨架在卵母细胞成熟、受精、早期胚胎发育和核移植发育过程中的分布和作用。     

蛋白激酶C在卵母细胞成熟、受精和早期胚胎发育过程中的作用

小鼠胚胎发育过程中,蛋白激酶C(PKC)家族在调节卵的活化、完成减数分裂和开始有丝分裂、胚胎的致密,以及囊胚形成过程中都有作用,但其多个亚型的功能还知之甚少.研究表明,已知的十种PKC亚型以及PKC锚定蛋白--活化的磷脂酶C受体(RACK)在小鼠胚胎2-细胞期至囊胚期都有表达.本文归纳了近年来对PKC亚型各自不同的动态分布模式和表达水平的研究,这些研究表明它们在早期胚胎发育的各个时期都至关重要,尤其在胚胎4-细胞期的早期,个别亚型在核内的浓度是瞬间升高的,提示我们这些PKC亚型也许控制着早期小鼠胚胎核的组建以及机能调节.本文对核移植胚胎中PKC的可能作用也进行了分析.     

核质置换技术治疗线粒体疾病的研究进展

线粒体疾病是线粒体基因组发生基因突变所导致的一类遗传疾病,目前尚无治愈方法。近年核质置换技术的出现为线粒体疾病的治疗提供了新思路。现有的核质置换技术包括生发泡移植、纺锤体移植、极体移植和原核移植技术,其中生发泡移植涉及的体外成熟可影响卵母细胞的发育潜能;纺锤体移植最大的挑战是纺锤体组装对机械刺激敏感,缺乏核膜包绕,操作过程可能对纺锤体造成损伤;极体移植违背了自然选择过程,其远期影响尚不明了;原核移植操作方便、基础研究证据充分,具有短期内向临床转化的潜能,但使用已经受精的合子作为胞质供体面临的伦理争议较大。本文就4种核质置换技术治疗线粒体疾病的应用现状进行综述。     

维甲酸定向诱导小鼠核移植胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化

目的 初步探讨体外条件下定向诱导小鼠核移植胚胎干细胞分化为雄性生殖细胞的条件,建立有效诱导分化技术平台.方法 分离BALB/c小鼠NT-ESCs样集落并鉴定.NT-ESCs消化后分4组:1)采用维甲酸诱导NT-EBs向雄性生殖细胞方向分化;2)未分化的NT-ESCs;3)分化培养前的NT-EBs;4)自主分化的NT-EBs;5)小鼠胚胎成纤维细胞.RT-PCR法检测各组Oct-4、VASA、Scp3、Sry、Tex14和β-actin的mRNA表达;免疫荧光染色法检测VASA、Scp3蛋白表达.结果 NT-ESCs集落性生长,符合小鼠胚胎干细胞的一系列特性.NT-EBs维甲酸诱导组Oct-4、VASA、Scp3、Sry、Tex14和β-actin均有表达,对照组为阴性;NT-EBs细胞诱导分化后Scp3荧光强度为(+);实验组VASA荧光强度(+)也优于对照组的(±).结论 采用维甲酸诱导可促进核移植胚胎来源NT-ESCs分化为雄性生殖细胞.     

动物的克隆

1997年 2月英国罗斯林研究所宣布第一例体细胞克隆哺乳动物“多莉”羊诞生 ,这个消息轰动了全世界。它证明了哺乳动物高度分化了的体细胞具有发育成新个体的全能性 ,它的出世给生物技术领域带来了一场新的革命。本文介绍了动物克隆的历史、基本的技术环节 ,以及克隆动物的应用前景     

体细胞核移植表观遗传的研究进展

体细胞核移植技术因低效和后代生长发育异常等缺陷而未能广泛应用，关键在于对体细胞核移植的表观遗传的机制缺乏了解。供体细胞核的不完全重编程被认为是造成克隆胚胎不能正常发育到成年的首要原因。深入探讨体细胞核移植动物中潜在的表现遗传修饰机制，将有助于了解体细胞核移植动物能够正常发育的后成重编程机理。     

哺乳动物体细胞核移植后核重编程研究进展

通过体细胞核移植技术获得重构胚胎,在卵母细胞内多种重编程因子的作用下,供体细胞核抹去分化状态,恢复全能性,这就是核重新编程的过程.在这个过程中供体核必须被正确激活与胚胎发育密切相关的基因,同时抑制与分化有关的基因.到目前为止,通过这项技术已获得多种哺乳动物的克隆后代,但克隆成功率低且存活个体大多表型异常.核重编程的不准确性可能是克隆后代存在高死亡率和发育异常的主要原因之一.综述了重编程中DNA甲基化、组蛋白乙酰化、X染色体失活以及基因印迹等的近期研究.     

硬膜外移植自体髓核对大鼠神经根功能和组织学的影响

目的：探讨无机械压迫时，腰椎间盘髓核突出引起腰腿痛的发病机制。方法：用硬膜外穿刺的方法给大鼠注射生理盐水及自体髓核混悬液，并对机械刺激缩爪阈值、马尾神经传导速度，神经根组织形态、疼痛行为进行了测定和观察。结果：大鼠硬膜外移植自体髓核能产生明显的痛觉过敏反应，马尾神经传导速度和神经根组织形态产生明显改变。结论：髓核所致的炎症反应是引起坐骨神经痛的重要原因之一。     

上海首例克隆猪诞生

2007年8月由上海交通大学医学院附属新华医院发育生物学研究中心负责核移植的上海首例克隆猪诞生了,这只克隆的巴马小型猪目前健康状况良好。这是“猪体细胞克隆技术的建立及其优化”结出的硕果,该研究项目是该中心与上海市农业科学院畜牧研究所合作主持的上海科技兴农重点攻关