博莱霉素A_2B_2和A_5对人癌细胞脱氧核糖核酸的断链反应

本文观察比较了博莱霉素A_5(国产)、博莱霉素A_2B_2(日本产)和博莱霉素A_2B_2国际标准品对于人胃癌细胞总DNA和其～50kb部分,以及人舌癌细胞总DNA的体外断链的时间和浓度效应。药物作用后的DNA经琼脂糖微型快速电泳和溴化乙锭(Ethidium Bromide)染色后在紫外光下观察并摄影。实验结果表明博莱霉素对人胃癌细胞总DNA和～50kb DNA以及人舌癌总DNA均有断     

阿霉素产生菌突变株H6125转化研究

本文探讨了不同培养条件下,菌龄和再生温度对链霉菌质粒转化阿霉素突变株H6125的影响。结果证明,利用改良的R_2YE培养基在适宜的条件下可使pH702和PH922的转化率分别达到5×10~5/μg DNA和0.6×10~5/μg DNA。转入质粒的H6125遗传表型发生改变,其发生机理尚不清楚。     

博莱霉素A_2B_2和A_5对人癌细胞脱氧核糖核酸的断链效应

本文观察比较了博莱霉素A_5(国产)、博莱霉素A_2B_2(日本)和博莱霉素A_2B_2国际标准品对于人体胃癌细胞的总脱氧核糖核酸和其50kb部分,以及人舌癌细胞的总脱氧核糖核酸的体外断链效应。作用后脱氧核糖核酸经琼脂糖微型快速电泳和溴化乙锭染色后,紫外荧光摄影。显示三种博莱霉素产品对人癌细胞双链脱氧核糖核酸的作用模型电泳图。并观察了作用时间及药物浓度的效应。人体DNA10μg在博莱霉素400μg/ml(～0.27mM)浓度下,37℃作用30分钟后,即可观察到人体DNA的断裂效应;37℃作用120分钟后,几乎全部人体DNA分子均被切割断链。人体DNA20μg在系列浓度的博莱霉素存在下,37℃作用120分钟,观察到博莱霉素断链的最低有效浓度为1μg/ml(～0.67μM)左右。没有发现博莱霉素-人胃癌细胞脱氧核糖核酸与博莱霉素-人舌癌细胞脱氧核糖核酸的作用模型之间有何明显差别。 本文还讨论了以人体细胞脱氧核糖核酸为对象,研究抗癌药物作用模式的实践意义,和本实验系统正被应用于人体“癌基因”(Oncogenes)有关研究的价值。     

10例大肠癌患者外周血中CK20mRNA检测

目的:检测大肠癌患者外周血中的癌细胞,以确定其肿瘤是否有微转移发生.方法:应用逆转录酶链反应(RT-PCR),检测10例大肠癌患者癌组织和外周血中CK20mRNA的表达.结果:10例大肠癌患者中有5例外周血检测出CK20mRNA,阳性率为50%.结论:外周血中CK20mRNA检测可作为大肠癌病人肿瘤微转移的参考指标,有助于肠癌转移的早期发现和选择更好的化疗方案.     

10例大肠癌患者外周血中CK20mRNA检测

目的：检测大肠癌患者外周血中的癌细胞，以确定其肿瘤是否有微转移发生。方法：应用逆转录酶链反应(RT-PCR)，检测10例大肠癌患者癌组织和外周血中CK20mRNA的表达。结果：10例大肠癌患者中有5例外周血检测出CK20mRNA，阳性率为50％。结论：外周血中CK20mRNA检测可作为大肠癌病人肿瘤微转移的参考指标，有助于肠癌转移的早期发现和选择更好的化疗方案。     

转染融合基因的DC抗肿瘤免疫效应

 目的 研究转染融合基因（GM-CSF-survivin GM-ΔSur）的树突状细胞（DC）在体外诱导高效而特异的抗肿瘤免疫效应 。方法 用jetPEI^TM-Macrophage转染体系,将构建的GM-ΔSur融合基因转染入DC,用流式细胞仪检测DC的表面分子 HLA-DR、CD83、CD80、CD86表达的高低;用LDH法测定转染融合基因的DC诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）杀伤肿瘤细胞（HT-29和OVCAR-3）的能力。结果 转染融合基因的DC细胞中可检测到GM-ΔSur融合蛋白的表达;DC表面高表达HLA-DR、CD83、CD80、CD86;PHA/rhIL-2长期培养（21d）的T细胞CD8^＋比例明显增加;转染融合基因的DC 对HT-29肿瘤细胞的杀伤率显著高于未修饰的DC的杀伤率。结论 GM-ΔSur基因转染修饰的DC能选择性诱导MHC-I类分子限制的CTL的特异性,显著提高DC的抗原提呈功能和诱导高效而特异的抗肿瘤免疫效应。     

四川地区宫颈癌HPV33、52和58型E6基因突变分析

目的:调查我国四川地区妇女宫颈癌组织中HPV33、52和58型的感染率及E6基因结构特点,探讨其与宫颈癌发生的关系.方法:采用PCR技术,对四川地区2004年60例宫颈癌患者癌组织DNA进行HPV检测.结果:获得HPV52和HPV58型各4例,检出率为6.7%;HPV33型1例,检出率为1.7%.对所获得的各例HPV33、52和58 E6基因测序分析.结论:与Genbank标准株相比,四川地区发现的HPV33和HPV52E6基因有多处突变,与日本发现的HPV33,52突变株相近.     

GM-CSF-Survivin融合基因的构建及其在树突状细胞的表达

目的:构建以Survivin为肿瘤抗原,GM-CSF为基因佐剂的融合基因,并将该融合基因转入DC,研究DC疫苗抗肿瘤治疗的新方法。方法:参照GenBank收载的Survivin基因序列设计引物,提取HT-29肿瘤细胞中的mRNA,经RT-PCR反应获得野生型Survivin cDNA基因片段。人工合成GM-CSF、Survivin两端和中间连接接头引物。PCR反应获得GM-CSF、Survivin DNA片段。经BamHⅠ酶切,T4DNA连接酶连接获得GM-CSF-Survivin融合DNA。以此DNA为模板,用两端引物作PCR扩增以获得较纯的融合DNA片段。经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后与相同双酶切的pcDNA3.1(-)载体质粒混合,加入T4DNA连接酶,16℃连接20h。用连接物转化大肠杆菌DH5α,挑选克隆提取质粒。结果:经PCR和限制性内切酶酶切初步鉴定后,选取一株送样作DNA序列测定,结果与设计序列完全一致。质粒定名为pcGM-Sur,用jetPEITM-Macrophage转染体系,将构建的pcGM-Sur质粒转染DC。采用RT-PCR和Western blot检测到DC中的融合基因mRNA和表达的Survivin抗原。结论:质粒pcGM-Sur DNA序列与设计完全一致,转染DC后能转录出完整的融合基因mRNA并表达出具有Survivin抗原性的融合蛋白。     

一种从链霉菌和大肠杆菌提取大分子量总DNA的新方法

近年来,我们在进行基因工程试验中,探索建立了一种避免使用苯酚、简化操作程序的DNA提取方法。利用该法所得DNA不仅分子量大(约300kb),且纯度完全能满足内切酶消化,接连和转化。在提取链霉菌和大肠杆菌染色体DNA时,称1g湿菌体,加9ml溶菌缓冲液(50mMol/L Tris.Hcl PH8.0;25mmolL EDTA;0.3mol/l sucrose)。混匀菌体后加入1ml溶菌酶溶液(20mg/ml和200ul RNase     

半合成蒽环类抗癌抗生素的筛选研究

在发展新的半合成蒽环类抗癌抗生素的研制过程中,试用了新近在四川省肿瘤研究所建立的“人体肿瘤材料筛选系统”(HTMSS,Human Tumor Materials Sereening System)——包括人DNA,人癌细胞,人体肿瘤组织三级筛选:1.体外HDI系统(Human DNA Interaction System.):首先从分子水平上提供抗癌筛选信息,快速考察新衍生物与人癌细胞DNA的作用效应及模式,与已知抗癌药物相比较。2.细胞培养试验,运用细胞集落形成能力试验(ColonyFormation Assay,CFA),大分子物质合成试验(Macromolecular Synthesis),DNA转化试验(DNA Transfer Method),骨髓细胞毒性试验,细胞免疫功能试验等方法,从